本发明涉及食品添加剂制备，特别涉及一种母液糖中甜菊糖苷单苷的提纯方法。
背景技术：
1、甜菊糖苷是从菊科草本植物甜叶菊中提取的天然甜味剂，它具有高甜度、低热量的功能特点，其甜度是蔗糖的100-300倍，热量仅为蔗糖的1/300。溶剂浸提是目前商业甜菊糖提取的主要工艺，该工艺最后经过结晶回收高纯度莱鲍迪苷a(ra)和甜菊苷(st)之后，剩余母液通常经过喷干后成为粉末固体，称为母液糖(mls)，一般作为低价甜味剂销售。
2、在当前的工业化生产中，对母液糖中单苷的提取、分离主要采用树脂分离法，例如新型树脂的合成、混合树脂层析法、改性树脂层析法，然而这些方法不仅未能实现母液糖中ra和st的有效分离，对其他单苷的分离效果也很差。
3、另外，母液糖中含有60％左右的甜菊糖苷和一些残余的多酚、黄酮类杂质，这些杂质的存在不仅加重母液糖后苦味，而且影响糖苷的进一步回收。
4、因此，树脂法处理母液糖在工业上的应用遇到了障碍，现有技术中亟待寻求一种新的提纯方法，能将母液糖中的单苷提纯，并将杂质分离，从而得到纯度更高，口味更好的甜菊糖苷单苷产品。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种母液糖中甜菊糖苷单苷的提纯方法，用于从母液糖中分离得到更高纯度、口感更好的甜菊糖苷组合物。
2、为了实现上述目的，本发明提供一种母液糖中甜菊糖苷单苷的提纯方法，包括以下步骤：
3、将母液糖与溶解溶剂混合，配制得到母液糖溶液；
4、将所述母液糖溶液通过正向树脂进行吸附分离；
5、将所述吸附后的树脂依次经多级洗脱溶液进行梯度洗脱；
6、分别收集各级梯度下的洗脱液，得到单苷提纯后的多组洗脱液；
7、分别将所述多组洗脱液进行干燥得到晶体，将所述晶体分别加入有机结晶溶剂进行结晶，得到多种甜菊糖苷单苷提纯产品。
8、本发明公开一种母液糖中甜菊糖苷单苷的提纯方法，包括以下步骤：将母液糖与溶解溶剂混合，配制得到母液糖溶液；将所述母液糖溶液通过正向树脂进行吸附分离；将所述吸附后的树脂依次经多级洗脱溶液进行梯度洗脱；分别收集各级梯度下的洗脱液，得到单苷提纯后的多组洗脱液；分别将所述多组洗脱液进行干燥得到晶体，将所述晶体分别加入有机结晶溶剂进行结晶，得到甜菊糖苷单苷提纯产品。本发明选择的正向树脂骨架上可键合多种功能基团，比如氨基、二醇基及弱阴离子交换基团等，其能与带有-oh，-nh或-sh官能团的分子形成氢键从而可以改善对极性分子的保留，由于相互作用力有大有小，溶剂分子与溶质分子、溶质分子相互之间又存在竞争吸附，从而造成了在吸附柱内保留时间的差异，使不同物质得到分离。流动相种类和比例的调整对杂质与甜菊糖苷的分离可产生一定的影响；利用正相分离模式与反向分离模式的差异，洗脱溶剂极性选择由低到高(在正向色谱中，极性组分的保留更强)，分别对甜菊糖苷单苷进行分离和提纯，得到甜菊糖苷单苷纯品。本发明对甜菊糖苷母液糖采用特定的树脂吸附和吸附后采用多级梯度洗脱的方式，最终有效去除了母液糖中多酚、黄酮等杂质，并分离、提纯得到了甜菊糖苷单苷纯品，为母液糖的利用提供了新的技术思路。实验结果表明，以甜菊糖苷总苷含量为64.8％的母液糖为例，采用本发明所述方法提纯后，得到的甜菊糖苷单苷纯品中甜茶苷含量由1.7％提升至23.8％，da含量由1.9％提升至16.5％，rb含量由1.2％提升至13.5％，stv含量由14.2％提升至65.3％，rc含量由18.0％提升至45.8％，ra含量由21.3％提升至46.7％，rd含量由1.4％提升至12.1％。
1.一种母液糖中甜菊糖苷单苷的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述母液糖与溶解溶剂的质量比为1：(4-6)；所述溶解溶剂为水、甲醇、乙醇和乙酸乙酯饱和水溶液中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的提纯方法，其特征在于，在配制得到母液糖溶液后，将所述母液糖溶液通过正向树脂前，还包括向所述正向树脂中通入溶解溶剂以平衡树脂；其中所述溶解溶剂的进料量为所述正向树脂体积的1-2bv，进料速度为1-2bv/h。
4.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述正向树脂的载体为中低压色谱柱；所述母液糖溶液的进料量为所述正向树脂体积的4-6％，进料速度为1-2bv/h；所述正向树脂为氨基硅胶填料、氨丙基填料、mb70-75或smb70-45中的一种。
5.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述依次经多级洗脱溶液进行梯度洗脱包括：依次经两级及以上洗脱溶剂进行洗脱，且每级洗脱溶剂的极性由低到高；所述洗脱溶剂选自甲醇、乙醇和乙酸乙酯饱和水溶液中的一种及多种。
6.根据权利要求5所述的提纯方法，其特征在于，所述依次经多级洗脱溶液进行梯度洗脱包括：依次经两级及以上乙酸乙酯/乙醇混合溶液和两级及以上乙醇水溶液进行梯度洗脱；其中，每级所述乙酸乙酯/乙醇的的体积比在[1.5,0.3]范围内逐渐降低，每级乙醇水溶液的体积分数在[99％,70％]范围内逐渐降低。
7.根据权利要求1或5所述的提纯方法，其特征在于，所述梯度洗脱中各梯度的洗脱溶剂用量均为所述正向树脂体积的2bv，所述梯度洗脱的流速为1-2bv/h。
8.根据权利要求7所述的提纯方法，其特征在于，所述分别收集各级梯度下的洗脱液，得到单苷分离后的多组洗脱液包括：每个梯度收集1bv/次，每个梯度收集得到2组洗脱液，共收集得到2n组洗脱液，其中，n为梯度洗脱总级数。
9.根据权利要求8所述的提纯方法，其特征在于，在所述得到单苷分离后的多组洗脱液后，所述多组洗脱液进行干燥前，还包括：将相邻的、主要成分为同一单苷的洗脱液进行合并，得到主要成分为不同单苷的多组洗脱液。
10.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述多组洗脱液进行干燥得到晶体中的干燥条件为干燥温度80-85℃，时间1-2h；
