本发明涉及药物制剂，尤其涉及一种靶向治疗皮肤t细胞淋巴瘤的外泌体复合纳米水凝胶及其制备方法。
背景技术：
1、皮肤t细胞淋巴瘤是一种罕见疾病，通常无法治愈，常导致患者的生活质量下降，目前全身性治疗很少有稳定和长期的疗效。皮肤t细胞淋巴瘤(cutaneous t-celllymphoma,ctcl)是结外非何杰金淋巴瘤(extra-nodal non-hodgkin’s lymphoma,nhl)的一种，是原发于皮肤的由皮肤归巢的t淋巴细胞克隆性增生造成的疾病。其中，蕈样肉芽肿(mycosis fungoides，mf)和原发皮肤cd30+t淋巴细胞增殖性疾病(cd30+cutaneouslymphoproliferative disease,cd30+clpd)是最常见的类型，两者发病率占到ctcl的80％以上。
2、随着人们对这一类疾病认识的不断提高，皮肤t细胞淋巴瘤的发病率近年来快速增长。针对此类型疾病的治疗方法较多，其中，car-t近年来在淋巴瘤治疗中获得重大进展，涉及的ctcl分子靶点包括cd30、ccr4、cd25、cd52、hdac等，其中，cd30为一种细胞膜蛋白和肿瘤标志物，是肿瘤坏死因子受体超家族中的一员，它在几乎所有经典霍奇金淋巴瘤、间变大细胞淋巴瘤和包括皮肤t细胞淋巴瘤和弥漫大b细胞淋巴瘤在内的部分其他淋巴瘤中普遍表达，而在正常细胞上cd30的表达有限。
3、外泌体是细胞以主动方式向细胞外分泌的囊泡样小体，磷脂双分子层结构，直径30～150nm，内含蛋白质、rna和脂类。外泌体代表了新型的远距离作用模式，可进一步调节免疫应答和细胞间信号传递。如何利用外泌体使药物靶向发挥治疗ctcl的作用，是本申请要解决的问题。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种用于靶向治疗ctcl的外泌体复合纳米水凝胶及其制备方法，该复合纳米水凝胶通过提取分离靶向cd30的嵌合抗原受体t细胞表达的细胞外泌体，装载利妥昔单抗纳米颗粒，并最终封装到普兰尼克f127热敏水凝胶中制成。该复合纳米水凝胶特异性靶向递送药物至ctcl的病灶部位发挥治疗作用，实现ctcl的靶向治疗，并降低药物毒副作用。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种靶向治疗皮肤t细胞淋巴瘤的外泌体复合纳米水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)制备皮肤t细胞淋巴瘤药物纳米颗粒；
5、(2)制备嵌合抗原受体t细胞外泌体溶液；
6、(3)制备装载步骤(1)所述纳米颗粒的外泌体溶液；
7、(4)将步骤(3)所述外泌体溶液和水凝胶混合，得到靶向治疗皮肤t细胞淋巴瘤的外泌体复合纳米水凝胶。
8、优选的，步骤(1)所述皮肤t细胞淋巴瘤药物先溶于二甲基亚砜，再与质量分数为0.5～1.5％的f127水溶液混合，超声混合成o/w型乳液后，冻干得到皮肤t细胞淋巴瘤药物纳米颗粒。
9、优选的，所述皮肤t细胞淋巴瘤药物为利妥昔单抗。
10、优选的，所述利妥昔单抗在二甲基亚砜中的浓度为5～10μg/μl，所述二甲基亚砜与f127水溶液的体积比1～5:1～5。
11、优选的，步骤(2)所述外泌体的制备方法为：培养靶向cd30的嵌合抗原受体t细胞36～72h，收集上清，离心后即得外泌体溶液。
12、优选的，步骤(3)所述制备装载纳米颗粒的外泌体方法为：
13、a、将步骤(2)制备分离得到的外泌体溶液与步骤(1)所述的纳米颗粒按质量比1～2：1的比例混合，获得混合溶液；
14、b、脉冲式超声处理步骤a所述的混合溶液，在36～38℃下孵育0.5～1.5h；
15、c、去除游离纳米颗粒，得到装载纳米颗粒的外泌体溶液。
16、优选的，步骤b中所述脉冲式超声处理的条件为on/off各4～6s，重复4～6次。
17、优选的，步骤(4)所述水凝胶的制备方法为：将pf-127粉末溶于pbs，制成质量分数为20～30％水凝胶溶液，加入装载纳米颗粒的外泌体溶液，混合后制得复合纳米水凝胶。
18、优选的，所述装载纳米颗粒的外泌体溶液与水凝胶溶液的体积比为1～5:3～10。
19、本发明还提供了一种所述的制备方法得到的靶向治疗皮肤t细胞淋巴瘤的外泌体复合纳米水凝胶。
20、本发明提供的外泌体复合纳米水凝胶一方面增加了负载物的溶解性、稳定性，使药物具有缓释、控释的特点；另一方面，该复合外泌体保持了其纳米级别的粒径和良好的流动性，能够靶向治疗皮肤t细胞淋巴瘤，从而达到提高抗癌疗效、降低副作用和不良反应的目的。
1.一种靶向治疗皮肤t细胞淋巴瘤的外泌体复合纳米水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述皮肤t细胞淋巴瘤药物先溶于二甲基亚砜，再与质量分数为0.5～1.5％的f127水溶液混合，超声混合成o/w型乳液后，冻干得到皮肤t细胞淋巴瘤药物纳米颗粒。
3.根据权利要求2所述的复合纳米水凝胶，其特征在于，所述皮肤t细胞淋巴瘤药物为利妥昔单抗。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述利妥昔单抗在二甲基亚砜中的浓度为5～10μg/μl，所述二甲基亚砜与f127水溶液的体积比1～5:1～5。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述外泌体的制备方法为：培养靶向cd30的嵌合抗原受体t细胞36～72h，收集上清，离心后即得外泌体溶液。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述制备装载纳米颗粒的外泌体方法为：
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤b中所述脉冲式超声处理的条件为on/off各4～6s，重复4～6次。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述水凝胶的制备方法为：将pf-127粉末溶于pbs，制成质量分数为20～30％水凝胶的溶液，加入装载纳米颗粒的外泌体溶液，混合后制得复合纳米水凝胶。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述装载纳米颗粒的外泌体溶液与水凝胶溶液的体积比为1～5:3～10。
10.一种权利要求1～9任一项所述的制备方法得到的靶向治疗皮肤t细胞淋巴瘤的外泌体复合纳米水凝胶。
