本发明涉及药物检测，尤其涉及一种保阴煎含量测定方法。
背景技术：
1、保阴煎为《景岳全书》处方，由生地黄、熟地黄、白芍、山药、续断、黄芩、黄柏、甘草共八味中药组成，其主要用于妇女带浊遗淋、色赤带血、脉滑多热、便血不止、及血崩血淋、或经期太早等，一切阴虚内热动血。文献还报道，其在治疗月经先期、月经过多、崩漏、经断前后诸证、胎漏、胎动不安、妊娠宫腔积液、不孕症等妇产科疾病具有较好作用。
2、保阴煎是由八味中药制成的复方制剂，即使是单一中药也含有多种成分，这就导致保阴煎整体成分复杂，而单一成分或指标评价很难全面的表征保阴煎的质量，而多成分质量控制的方法则需要较多次检测来实现。由于保阴煎中的多味中药中成分含量多、分离难度大、含量差异大等因素，在实际考察过程中很难一次性考察多种成分。目前，仅有少量对保阴煎中成分含量检测的研究，且仅能检测一种或少量的几种成分，如马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱，整体检测指标较少，难以全面评价保阴煎的质量。
技术实现思路
1、针对上述问题，本发明提供一种保阴煎含量测定方法。
2、为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：
3、一种保阴煎含量测定方法，所述保阴煎含量测定方法包括以下步骤：
4、取梓醇、地黄苷d、芍药苷、甘草苷、川续断皂苷vi、甘草酸、盐酸黄柏碱、黄芩苷和盐酸小檗碱，制备混合对照品溶液；
5、取保阴煎制备负离子模式保阴煎供试品溶液和正离子模式保阴煎供试品溶液；
6、取混合对照品溶液、负离子模式保阴煎供试品溶液和正离子模式保阴煎供试品溶液分别在正、负离子模式下进行高效液相色谱串联质谱检测，并利用外标一点法，分别计算得保阴煎中梓醇、地黄苷d、芍药苷、甘草苷、川续断皂苷vi、甘草酸、盐酸黄柏碱、黄芩苷和盐酸小檗碱的含量；
7、所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，采用0.08～0.12wt％甲酸乙腈-0.08～0.12wt％甲酸水溶液作为流动相，以梯度洗脱的方式进行洗脱；
8、其中，负离子模式下色谱洗脱程序为：
9、0～1.50min，1％→15％流动相a，99％→85％流动相b；
10、1.50～4.00min，15％→20％流动相a，85％→80％流动相b；
11、4.00～4.50min，20％→47％流动相a，80％→53％流动相b；
12、4.50～6.50min，47％→55％流动相a，53％→45％流动相b；
13、正离子模式下色谱洗脱程序为：
14、0～1.50min，18％流动相a，82％流动相b；
15、1.50～2.00min，18％→32％流动相a，82％→68％流动相b；
16、2.00～4.00min，32％→35％流动相a，68％→65％流动相b。
17、进一步的，负离子模式保阴煎供试品溶液是取保阴煎加入45～55vol％甲醇水溶液提取，过滤制得；
18、正离子模式保阴煎供试品溶液是取负离子模式保阴煎供试品溶液稀释后制得。
19、进一步的，提取的方式为超声提取或加热回流提取；
20、负离子模式保阴煎供试品溶液制备过程中，保阴煎与45～55vol％甲醇水溶液的重量体积比为0.001～0.003g：1ml；
21、正离子模式保阴煎供试品溶液制备过程中，稀释的倍数为10～50倍。
22、进一步的，所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，质谱是利用电喷雾离子源，采用正、负离子模式；
23、其中，正、负离子模式的参数均如下：毛细管电压为2900～3100v、脱溶剂温度为390～410℃、离子源温度为108～112℃、脱溶剂气流量为790～810l/hr、锥孔气体流速为48～52l/hr。
24、进一步的，所述混合对照品溶液中梓醇的含量为0.161～3.434μg/ml、地黄苷d的含量为0.196～4.180μg/ml、芍药苷的含量为1.860～39.680μg/ml、甘草苷的含量为0.390～8.30μg/ml、川续断皂苷vi的含量为1.058～22.575μg/ml、甘草酸的含量为0.896～19.105μg/ml、盐酸黄柏碱的含量为0.019～0.416μg/ml、黄芩苷的含量为0.019～0.416μg/ml、盐酸小檗碱的含量为0.022～0.461μg/ml。
25、一种保阴煎含量测定方法，所述保阴煎含量测定方法包括以下步骤：
26、取保阴煎制备负离子模式保阴煎供试品溶液和正离子模式保阴煎供试品溶液；
27、取负离子模式保阴煎供试品溶液和正离子模式保阴煎供试品溶液分别在正、负离子模式下进行高效液相色谱串联质谱检测，所得各成分对应的峰面积代入各成分相应的标准曲线，分别计算得保阴煎中梓醇、地黄苷d、芍药苷、甘草苷、川续断皂苷vi、甘草酸、盐酸黄柏碱、黄芩苷和盐酸小檗碱的含量；
28、所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，采用0.08～0.12wt％甲酸乙腈-0.08～0.12wt％甲酸水溶液作为流动相，以梯度洗脱的方式进行洗脱；
29、其中，负离子模式下色谱洗脱程序为：
30、0～1.50min，1％→15％流动相a，99％→85％流动相b；
31、1.50～4.00min，15％→20％流动相a，85％→80％流动相b；
32、4.00～4.50min，20％→47％流动相a，80％→53％流动相b；
33、4.50～6.50min，47％→55％流动相a，53％→45％流动相b；
34、正离子模式下色谱洗脱程序为：
35、0～1.50min，18％流动相a，82％流动相b；
36、1.50～2.00min，18％→32％流动相a，82％→68％流动相b；
37、2.00～4.00min，32％→35％流动相a，68％→65％流动相b。
38、进一步的，所述各成分对应的标准曲线分别为：
39、梓醇对应的标准曲线为y＝34776x+2324，r＝0.9991；
40、地黄苷d对应的标准曲线为y＝25481x+2077，r＝0.9992；
41、芍药苷对应的标准曲线为y＝26400x+42212，r＝0.9992；
42、甘草苷对应的标准曲线为y＝77078x+12391，r＝0.9993；
43、川续断皂苷vi对应的标准曲线为y＝33408x+29190，r＝0.9991；
44、甘草酸对应的标准曲线为y＝84182x+37063，r＝0.9990；
45、盐酸黄柏碱对应的标准曲线为y＝907936x-8115.5，r＝0.9996；
46、黄芩苷对应的标准曲线为y＝256512x+49642，r＝0.9993；
47、盐酸小檗碱对应的标准曲线为y＝1035032.87x-8728.11，r＝0.9990。
48、进一步的，所述各成分对应的标准曲线的获得方法如下：
49、分别取梓醇、地黄苷d、芍药苷、甘草苷、川续断皂苷vi、甘草酸、盐酸黄柏碱、黄芩苷和盐酸小檗碱，加45～55vol％甲醇水溶液分别制成不同浓度的对照品混标溶液；
50、不同浓度的对照品混标溶液中梓醇的含量均在0.161～3.434μg/ml之间、地黄苷d的含量均在0.196～4.180μg/ml之间、芍药苷的含量均在1.860～39.680μg/ml之间、甘草苷的含量均在0.390～8.30μg/ml之间、川续断皂苷vi的含量均在1.058～22.575μg/ml之间、甘草酸的含量均在0.896～19.105μg/ml之间、盐酸黄柏碱的含量均在0.019～0.416μg/ml之间、黄芩苷的含量均在0.019～0.416μg/ml之间、盐酸小檗碱的含量均在0.022～0.461μg/ml之间；
51、分别取不同浓度的对照品混标溶液进行高效液相色谱串联质谱检测，并根据各成分的浓度和相应成分对应浓度测定的峰面积，绘制各成分对应的标准曲线。
52、进一步的，负离子模式保阴煎供试品溶液是按重量体积比0.001～0.003g：1ml取保阴煎加至45～55vol％甲醇水溶液中，经超声提取或加热回流提取，过滤制得；
53、正离子模式保阴煎供试品溶液是取负离子模式保阴煎供试品溶液稀释10～50倍后制得。
54、进一步的，所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，质谱是利用电喷雾离子源，采用正、负离子模式；
55、其中，正、负离子模式的参数均如下：毛细管电压为2900～3100v、脱溶剂温度为390～410℃、离子源温度为108～112℃、脱溶剂气流量为790～810l/hr、锥孔气体流速为48～52l/hr。
56、本发明的保阴煎含量测定方法的有益效果为：
57、由于保阴煎的品质受药材来源、饮片炮制、配伍比例、制备工艺等影响，且保阴煎的成分复杂，将保阴煎的成分量化，有利于保证保阴煎的质量及疗效；本发明的保阴煎含量测定方法能够实现对保阴煎中多个指标成分(9种成分)的控制，有效保证了保阴煎的质量和疗效；
58、本发明通过一次性定量分析保阴煎中9种成分，能够有效控制保阴煎的质量，且为后期保阴煎物质基础研究过程中，为成分与活性研究提供依据，使之发挥更大的药用价值，为保阴煎制剂二次开发提供有力支撑；
59、本发明的保阴煎含量测定方法一次测定9种成分，能够快速、简便的获知保阴煎的质量情况，解决了现有技术的检测方法仅能够一次测定一种或少数几种成分的问题，有效节省了工艺步骤和人工成本，且能够更加全面控制保阴煎的质量；
60、本发明的保阴煎含量测定方法通过调整提取工艺和色谱条件，能够同时定量分析保阴煎中9种成分，且测定结果准确，操作简单、快捷、稳定可靠，精密度高，易于掌握，可为保阴煎的开发和质量标准制定提供参考；
61、本发明通过调整高效液相色谱条件，筛选合适的工艺参数，实现了梓醇、地黄苷d、芍药苷、甘草苷、川续断皂苷vi、甘草酸、盐酸黄柏碱、黄芩苷和盐酸小檗碱共9种成分的完全分离，且与其它杂质峰有效分离，相互之间无干扰；
62、不同溶剂或不同浓度的同种溶剂，对于中药物质中有效成分的提取效率也有所不同，本发明通过选用合适的提取溶剂，有效提高了保阴煎的提取效率，从而精准测定保阴煎中9种成分的含量；
63、本发明的保阴煎含量测定方法重复性高、稳定性高、线性关系良好。
1.一种保阴煎含量测定方法，其特征在于，所述保阴煎含量测定方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的保阴煎含量测定方法，其特征在于，负离子模式保阴煎供试品溶液是取保阴煎加入45～55vol％甲醇水溶液提取，过滤制得；正离子模式保阴煎供试品溶液是取负离子模式保阴煎供试品溶液稀释后制得。
3.根据权利要求2所述的保阴煎含量测定方法，其特征在于，提取的方式为超声提取或加热回流提取；
4.根据权利要求1-3中任一项所述的保阴煎含量测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，质谱是利用电喷雾离子源，采用正、负离子模式；
5.根据权利要求1-3中任一项所述的保阴煎含量测定方法，其特征在于，所述混合对照品溶液中梓醇的含量为0.161～3.434μg/ml、地黄苷d的含量为0.196～4.180μg/ml、芍药苷的含量为1.860～39.680μg/ml、甘草苷的含量为0.390～8.30μg/ml、川续断皂苷vi的含量为1.058～22.575μg/ml、甘草酸的含量为0.896～19.105μg/ml、盐酸黄柏碱的含量为0.019～0.416μg/ml、黄芩苷的含量为0.019～0.416μg/ml、盐酸小檗碱的含量为0.022～0.461μg/ml。
6.一种保阴煎含量测定方法，其特征在于，所述保阴煎含量测定方法包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的保阴煎含量测定方法，其特征在于，所述各成分对应的标准曲线分别为：
8.根据权利要求6或7所述的保阴煎含量测定方法，其特征在于，所述各成分对应的标准曲线的获得方法如下：
9.根据权利要求6或7所述的保阴煎含量测定方法，其特征在于，负离子模式保阴煎供试品溶液是按重量体积比0.001～0.003g：1ml取保阴煎加至45～55vol％甲醇水溶液中，经超声提取或加热回流提取，过滤制得；
10.根据权利要求6或7所述的保阴煎含量测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，质谱是利用电喷雾离子源，采用正、负离子模式；
