本发明属于生物，具体涉及一种试剂盒、使用方法及存储介质。
背景技术：
1、脂肪性肝病(fatty liver disease,fld)简称脂肪肝，是一组由易感基因、表观遗传、饮食和生活方式等多因素复杂作用所致的高度异质性疾病，包括酒精性肝病(alcoholrelated-liver disease,ald)和非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liverdisease,nafld)两大类。脂肪肝在病理上，主要表现为肝细胞弥漫性脂肪变性。正常情况下，人体的肝脏当中都会含有少量的脂肪，但是不会超过整个肝脏的5％。肝细胞脂肪变性在5％～33％时，为轻度脂肪肝；33％～66％时为中度脂肪肝；超过66％时为重度脂肪肝。众多研究表明，fld尤其是中重度脂肪肝，会增加肝脏失代偿和肝癌的患病风险，同时也会增加心血管-肾脏-代谢相关疾病风险和非肝脏恶性肿瘤风险。
2、超声显像是基于图像诊断脂肪肝最常用的影像学技术，但超声诊断脂肪肝患者的最大缺点是对初始脂肪变性的检测灵敏度低，如肝脂肪变性百分比<30％时，超声诊断脂肪肝的灵敏度约为60％，特异性约为77％，肥胖患者检测困难(这在脂肪肝患者中很常见)，且判读依赖操作者、存在较大主观性。由于超声的阴性结果不排除轻度脂肪变性，在这种情况下，应使用另一种更敏感的方法：计算机断层扫描(ct)和磁共振成像(mri)。两者也可用于检测中度至重度脂肪变性，但价格较高、可用性较低，且ct检查还存在辐射。磁共振技术质子密度脂肪分数(magnetic resonance imaging-derived proton density fatfraction,mri-pdff)能够客观评估整个肝脏脂肪含量，已用于临床试验评估肝脏脂肪含量的变化，mri-pdff≥5％和10％分别提示显著和中-重度肝脂肪变性，但检测成本高和可及性低等缺点限制其推广应用。因此，需要迫切研发成本低、准确性高和可及性强的脂肪肝检测新方法。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本发明提供一种试剂盒、使用方法及存储介质。通过选择特定的基因和基因序列实现对脂肪肝的诊断，且通过不同的cut off值分别实现轻、中、重度脂肪肝的精确诊断。
2、为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
3、一种试剂盒，所述试剂盒用于诊断脂肪肝，包括适于检测pnpla3基因的试剂；以hg38为参考基因组，所述pnpla3基因目的区域选择chr22:43928769-43928882；所述试剂包括引物和探针；所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物如seq id no：1所示，所述下游引物如seq id no：2所示；所述探针包括第一探针和第二探针，所述第一探针如seqid no：3所示，所述第二探针如seq id no：4所示。
4、进一步的，所述第一探针和第二探针处于同一反应体系中且具有不同的荧光报告基团。
5、进一步的，所述试剂盒还包括下列至少一种：样本收集容器、空白对照模块和阳性对照模块。
6、本发明还提供了上述试剂盒的使用方法，基于采集的生物标志物进行基因型的判定；对年龄、bmi、基因型以及性别进行处理，构建模型并进行训练；基于模型进行脂肪肝诊断。
7、进一步的，所述生物标志物为血液或口腔拭子。
8、进一步的，对年龄、bmi、基因型以及性别进行处理，具体包括：年龄：小于30岁等级为0，不小于30岁且小于40岁等级为1，不小于40岁且小于50岁等级为2，不小于50岁且小于60岁等级为3，不小于60岁等级为4；bmi：小于18.5kg/m2等级为0，不小于18.5kg/m2且小于24kg/m2等级为1，不小于24kg/m2且小于28kg/m2等级为2，不小于28kg/m2等级为3；基因型：cc型等级为0，cg型等级为1，gg型等级为2；性别：男等级为1，女等级为0。
9、进一步的，第一探针为pnpla3基因目的区域突变型探针，第二探针为pnpla3基因目的区域野生型探针；所述基因型的判定标准为：gg：第一探针的ct≤35，且第二探针的ct＞38；cg：第一探针的ct≤35，且第二探针的ct≤35；cc：第一探针的ct＞38，且第二探针的ct≤35；若第一探针和第二探针无扩增曲线，则ct值为45。
10、进一步的，flscan＝-9.0638+0.1885age-0.4647gender+2.5617pnpla3+3.5636bmi，当模型分数小于-2.293，则判断结果为健康；当模型分数不小于-2.293且小于-0.559，则判断结果为轻度脂肪肝；当模型分数不小于-0.559且小于3.832，则判断结果为中度脂肪肝；当模型分数不小于3.832，则判断结果为重度脂肪肝。
11、进一步的，还包括质控品；所述质控品包括空白对照品和阳性对照品；所述阳性对照品的质控标准为：基因型为cg，第一探针的ct≤35且第二探针的ct≤35。
12、本发明还提供了一种计算机可读存储介质，所述计算机可读存储介质存储有一个或者多个程序，所述一个或者多个程序可被一个或者多个处理器执行，以实现基于上述试剂盒的使用方法。
13、本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果包括：
14、(1)本发明通过检测pnpla3基因，实现对不同程度的脂肪肝的诊断，且具有高敏感性和特异性。
15、(2)针对pnpla3基因，设定了特定引物和探针，无需提取dna直接扩增，相比传统提取dna后再扩增检测，减少试剂消耗，降低耗材成本，减少实验人员操作步骤，快速且降低实验错误率。
16、(3)口腔拭子样本的qpcr检测相对于超声检测来说，简单方便、成本低廉、可及性强，能够居家检测。
1.一种试剂盒，所述试剂盒用于诊断脂肪肝，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
4.根据权利要求1-3任一所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，
5.根据权利要求4所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，
6.根据权利要求4所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，
7.根据权利要求6所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，
8.根据权利要求7所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，
9.根据权利要求4所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，
10.一种计算机可读存储介质，其特征在于，
