本发明属于分离纯化，具体涉及一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法。
背景技术：
1、紫色杆菌素是一种由细菌合成的紫色天然双吲哚色素，近年来因其抗菌、抗病毒、抗肿瘤和抗氧化活性而备受关注。脱氧紫色杆菌素是紫色杆菌素的结构类似物，细菌在合成脱氧紫色杆菌素时，必然会伴随紫色杆菌素的同时合成；目前研究已证明脱氧紫色杆菌素对于金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌具有有效抗菌作用，同时还具有抗癌、抗寄生虫、抗病毒等潜力，是一种具有巨大潜力的色素与药物，因此，优化脱氧紫色杆菌素的分离纯化工艺，实现脱氧紫色杆菌素与紫色杆菌素的分离，对于开发具有高附加值的色素及药品具有十分重要的意义。
2、而目前，微生物发酵液中紫色杆菌素或脱氧紫色杆菌素的提取通常采用的是大孔树脂，由于其孔径较大，只能用于去除其他杂质，而不能实现将脱氧紫色杆菌素与结构类似物紫色杆菌素分离纯化，因此，目前尚无能够将脱氧紫色杆菌素与结构类似物紫色杆菌素有效分离的方法，这就导致市面上无高纯脱氧紫色杆菌素的销售，严重阻碍脱氧紫色杆菌素的应用和推广。
3、因此，研发一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法，得到高纯的脱氧紫色杆菌素成为亟待解决的问题。
技术实现思路
1、本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供了一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法，其操作简单、色素损失少，能够有效实现脱氧紫色杆菌素与紫色杆菌素的分离，且制得的脱氧紫色杆菌素纯度高。
2、为实现上述目的，本发明所采取的技术方案如下：
3、一种脱氧紫色杆菌素的纯化方法，采用柱层析对脱氧紫色杆菌素粗提液进行精制，收集脱氧紫色杆菌素洗脱液，干燥，得纯化的脱氧紫色杆菌素；
4、所述脱氧紫色杆菌素来源于微生物发酵液；
5、所述柱层析采用硅胶柱。
6、作为进一步的技术方案，所述柱层析采用正己烷和乙酸乙酯作为洗脱剂，所述正己烷和乙酸乙酯的体积比为2-3：1；
7、作为进一步的技术方案，以脱氧紫色杆菌素计，所述脱氧紫色杆菌素的上样样品与硅胶柱中硅胶的质量比为1：200-600。
8、作为进一步的技术方案，进行精制前，还需对脱氧紫色杆菌素粗提液进行浓缩处理。
9、作为进一步的技术方案，所述脱氧紫色杆菌素粗提液浓缩处理至原体积的5％-15％；
10、作为进一步的技术方案，所述干燥采用真空浓缩干燥。
11、一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法，包括如下步骤：
12、步骤1、预处理：将产脱氧紫色杆菌素微生物的发酵液进行固液分离，得微生物菌体；
13、步骤2、菌体破碎：将步骤1获得的微生物菌体破碎后，用水洗涤若干次，然后固液分离去除可溶性杂质和蛋白质，得固形物；
14、步骤3、提取：向步骤2获得的固形物中加入萃取剂进行萃取，然后，过滤、浓缩，得脱氧紫色杆菌素粗提液；
15、步骤4、纯化：采用所述纯化方法对步骤3所得的脱氧紫色杆菌素粗提液进行纯化，得纯化的脱氧紫色杆菌素。
16、作为进一步的技术方案，步骤2中所述破碎采用珠磨或均质。
17、作为进一步的技术方案，在进行破碎前，还需向微生物菌体中加入水。
18、作为进一步的技术方案，所述微生物菌体与水的重量比为1：5-20，优选1:10。
19、作为进一步的技术方案，步骤2中，以水为溶剂进行破碎后菌体的洗涤，并采用离心或过滤的方式进行固液分离。
20、作为进一步的技术方案，步骤2中，固液分离采用过滤方式，所述过滤用滤膜的孔径大于步骤3中过滤所用滤膜的孔径。
21、作为进一步的技术方案，步骤2中，当采用过滤进行固液分离时，所用滤膜采用微孔滤膜，所用微孔滤膜的孔径为0.2μm-0.6μm，可以采用0.2μm、0.25μm、0.3μm、0.35μm、0.4μm、0.45μm、0.5μm、0.55μm、0.6μm等，优选0.4μm。
22、作为进一步的技术方案，步骤3中，所述萃取剂包括甲醇、乙醇中的一种或两种，萃取剂的体积浓度为70％-100％，可以采用70％、80％、90％、100％等，优选100％；
23、作为进一步的技术方案，所述萃取剂的用量为固形物重量的10-15倍，可以是10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍等；
24、作为进一步的技术方案，所述萃取的时间为30min-60min，可以选择30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min等。
25、作为进一步的技术方案，步骤3中过滤采用微孔滤膜，所述微孔滤膜的孔径为0.1μm-0.5μm，可以采用0.1μm、0.15μm、0.2μm、0.25μm、0.3μm、0.35μm、0.4μm、0.45μm、0.5μm等，优选0.3μm。
26、作为进一步的技术方案，一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法，包括如下步骤：
27、步骤1、预处理：将产脱氧紫色杆菌素微生物的发酵液进行固液分离，得微生物菌体；
28、步骤2、菌体破碎：将微生物菌体破碎、并洗涤若干次后，固液分离去除可溶性杂质和蛋白质，得固形物；
29、步骤3、提取：向步骤1的固形物中加入萃取剂进行萃取，然后，过滤、浓缩，得脱氧紫色杆菌素粗提液；
30、步骤4、纯化：将步骤3所得的脱氧紫色杆菌素粗提液浓缩至原体积的5％-15％，然后采用柱层析对脱氧紫色杆菌素粗提液进行精制，收集脱氧紫色杆菌素洗脱液，干燥，得纯化的脱氧紫色杆菌素。
31、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
32、本发明首次采用硅胶柱柱层析法进行脱氧紫色杆菌素与紫色杆菌素的分离纯化，并限定了其洗脱剂的组成和配比、限定上样量，其采用一次柱层析即可实现脱氧紫色杆菌素与紫色杆菌素的有效分离，不需二次柱层析及其他的纯化操作进行辅助。
33、本发明以产脱氧紫色杆菌素微生物的发酵液为原料，经固液分离、菌体破碎、洗涤、过滤除水溶性杂质和蛋白质、萃取和硅胶柱层析纯化，得到高纯脱氧紫色杆菌素，其能够有效实现脱氧紫色杆菌素与紫色杆菌素的分离，且制得的脱氧紫色杆菌素纯度高，可达98％以上，且操作简单、色素损失少，收率可达80％以上。
1.一种脱氧紫色杆菌素的纯化方法，其特征在于，采用柱层析对脱氧紫色杆菌素粗提液进行精制，收集脱氧紫色杆菌素洗脱液，干燥，得纯化的脱氧紫色杆菌素；
2.根据权利要求1所述的一种脱氧紫色杆菌素的纯化方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的一种脱氧紫色杆菌素的纯化方法，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的一种脱氧紫色杆菌素的纯化方法，其特征在于，进行精制前，还需对脱氧紫色杆菌素粗提液进行浓缩处理。
5.根据权利要求1所述的一种脱氧紫色杆菌素的纯化方法，其特征在于，
6.一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法，其特征在于，步骤2中所述破碎采用珠磨或均质；在进行破碎前，还需向微生物菌体中加入水。
8.根据权利要求6所述的一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法，其特征在于，
9.根据权利要求6所述的一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法，其特征在于，
10.根据权利要求6所述的一种微生物发酵液中脱氧紫色杆菌素的提取纯化方法，其特征在于，
