本发明涉及医学诊断领域，具体涉及外周血白细胞联合标志物及其在制备原发性肝细胞癌检测或诊断产品中的应用。
背景技术：
1、肝癌是世界上最常见的癌症之一，是一个全球性的健康问题，发病率和死亡率都在逐年增加。肝细胞癌(hcc)是最常见的原发性肝癌，占病例的80％～90％。肝细胞癌起病隐匿、恶性程度高且进展迅速，我国肝细胞癌患者在确诊时，多已处于局部晚期或伴有远处转移。越来越清楚的是，肝细胞癌在遗传、表观遗传、组织病理学和免疫学水平上具有高度异质性。肿瘤不仅在患者之间，在同一肝脏内甚至同一肿瘤不同区域内发现的病变之间也可能存在差异。肝细胞癌的异质性是造成肝细胞癌患者难治愈的主要原因。针对癌症不同阶段进行治疗发现，早期、中期和晚期肝细胞癌的中位生存时间分别为36个月、16个月和6个月。由此可见，早诊断，早治疗，可以显著提高肝细胞癌患者的生存率。
2、目前，针对肝细胞癌早期的筛查方式较为丰富，临床上诊断、治疗评估和复发检测主要依赖于影像学和血清生物标志物的使用。尽管如此，影像学和病理学检查在诊断准确性和敏感性方面仍有局限性，而常见的血清标志物诊断性能较差。若想改善肝细胞癌的诊疗现状，除了迫切需要新的治疗方法外，改进的诊断工具在早期阶段识别疾病也是必不可少的。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供外周血白细胞联合标志物及其在制备原发性肝细胞癌检测或诊断产品中的应用，基于检测外周血白细胞mrna水平变化而构建的早筛模型能够对早期肝细胞癌进行特异性的识别检测，具有高灵敏度及高特异性。
2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
3、第一方面，本发明提供了一种原发性肝细胞癌的外周血白细胞联合标志物，所述外周血白细胞联合标志物为来源于外周血白细胞mrna的tnfrsf10c、adgre3、ppp1r3b以及mpzl3。
4、第二方面，本发明提供了用于检测上述外周血白细胞联合标志物的引物，包括：
5、tnfrsf10c f：5′-tccagcaggatctcatagatcag-3′，
6、tnfrsf10c r：5′-caggacgtacaattactgacttgg-3′；
7、adgre3 f：5′-catgtaacgacaccacctcc-3′，
8、adgre3 r：5′-gaactttcgattccacatccc-3′；
9、ppp1r3b f：5′-agaacctcgcatttgagaagac-3′，
10、ppp1r3b r：5′-tctgaaccggcataagtgtcc-3′；
11、mpzl3 f：5′-gctaacagtcacagaaaggg-3′，
12、mpzl3 r：5′-catagtctgaatccaggcac-3′。
13、优选地，还包括内参引物序列：
14、hprt1 f：5′-gagaactacaaatchccacaaagc-3′，
15、hprt1 r：5′-cgtcattacaatagctcttcagtc-3′。
16、第三方面，本发明提供了一种原发性肝细胞癌的检测或诊断产品，包括上述外周血白细胞联合标志物。
17、优选地，还包括检测所述外周血白细胞联合标志物的引物，包括：
18、tnfrsf10c f：5′-tccagcaggatctcatagatcag-3′，
19、tnfrsf10c r：5′-caggacgtacaattactgacttgg-3′；
20、adgre3 f：5′-catgtaacgacaccacctcc-3′，
21、adgre3 r：5′-gaactttcgattccacatccc-3′；
22、ppp1r3b f：5′-agaacctcgcatttgagaagac-3′，
23、ppp1r3b r：5′-tctgaaccggcataagtgtcc-3′；
24、mpzl3 f：5′-gctaacagtcacagaaaggg-3′，
25、mpzl3 r：5′-catagtctgaatccaggcac-3′。
26、更优选地，还包括内参引物序列：
27、hprt1 f：5′-gagaactacaaatchccacaaagc-3′，
28、hprt1 r：5′-cgtcattacaatagctcttcagtc-3′。
29、优选地，所述原发性肝细胞癌包括早期原发性肝细胞癌；所述产品为试剂盒或芯片。
30、第四方面，本发明提供了上述外周血白细胞联合标志物作为原发性肝细胞癌辅助诊断指标的应用。
31、第五方面，本发明提供了上述外周血白细胞联合标志物在制备原发性肝细胞癌检测或诊断产品中的应用。
32、进一步地，所述tnfrsf10c、adgre3在原发性肝细胞癌中低表达，所述ppp1r3b、mpzl3在原发性肝细胞癌中高表达。
33、本发明的优点和有益效果如下：
34、1.原发性肝细胞癌的发病机制复杂，且肝细胞癌在遗传、表观遗传、组织病理学和免疫学水平上具有高度异质性。外周血白细胞联合标志物是一种液体活检生物标志物，利用液体活检早筛模型对潜在患者进行筛查，具有时效性和前瞻性，可以有效避免肝细胞癌病情隐匿所导致的延迟治疗。
35、2.基于检测外周血白细胞mrna水平变化来构建的早筛模型能够在肿瘤形成的初期便可以进行特异性的检测。
36、3.本发明基于多个外周血白细胞标志物进行联合检测，相较于单一的分子标志物，可在一定程度上减少因单一指标个体表达差异导致的误差，使检测结果更加准确。
1.一种原发性肝细胞癌的外周血白细胞联合标志物，所述外周血白细胞联合标志物为来源于外周血白细胞mrna的tnfrsf10c、adgre3、ppp1r3b以及mpzl3。
2.用于检测权利要求1所述的外周血白细胞联合标志物的引物，包括：
3.根据权利要求2所述的引物，其特征在于，还包括内参引物：
4.一种原发性肝细胞癌的检测或诊断产品，包括权利要求1所述的外周血白细胞联合标志物。
5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，还包括检测所述外周血白细胞联合标志物的引物，包括：
6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，还包括内参引物：
7.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述原发性肝细胞癌包括早期原发性肝细胞癌；所述产品为试剂盒或芯片。
8.权利要求1所述的外周血白细胞联合标志物作为原发性肝细胞癌辅助诊断指标的应用。
9.权利要求1所述的外周血白细胞联合标志物在制备原发性肝细胞癌检测或诊断产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述tnfrsf10c、adgre3在原发性肝细胞癌中低表达，所述ppp1r3b、mpzl3在原发性肝细胞癌中高表达。
