本发明涉及微生物,尤其涉及一种多糖裂解单加氧酶cmlpmo10基因及其编码的酶以及在氧化降解多糖生物质中的应用。
背景技术:
1、植物木质纤维素是自然界中发现的最丰富的生物质来源,年产量在1011~1012吨左右。非淀粉多糖,如纤维素、半纤维素和木质素是植物木质纤维素的主要成分,它们赋予植物刚性和抵抗昆虫和真菌的攻击。几丁质是自然界中存量第二大的生物质,是由β-1,4糖苷键聚合β-n-乙酰-d-葡萄糖胺而形成的不溶性多糖。几丁质是节肢动物、昆虫、海洋动物的外骨骼以及真菌细胞壁的重要组成成分,大多以晶体几丁质方式存在。有效利用这些难降解结晶生物聚合物之前,需要将其完全分解为组成单体和低聚物。在工业中广泛应用两类糖苷水解酶(纤维素酶和几丁质酶)来降解纤维素和几丁质,特别是在食品/饲料添加剂的开发中。然而,由于纤维素和几丁质中含大量氢键网格而形成的各种晶体结构,使得纤维素和几丁质具有高度复杂和顽固的结构,而导致传统的糖苷水解酶——纤维素酶和几丁质酶不能高效率地分解天然纤维素和几丁质。
2、如何高效、环保的利用几丁质、纤维素等难溶多糖是该类生物质开发和利用面临的重大难题。目前主要通过化学法和酶法对纤维素和几丁质进行降解,与化学法相比酶法具有设备简单、反应条件温和及环境友好等优点。酶法主要利用传统糖苷水解酶对几丁质和纤维素等难溶多糖进行降解。由于传统的糖苷水解酶家族,它们对于底物结晶区的降解效率较低,且成本较高,这使得传统的糖苷水解酶家族难以满足工业应用的需求,因此限制了几丁质和纤维素等生物质的高效利用。
3、最近发现的氧化酶——多糖裂解单加氧酶(lpmos),是一类依赖铜的氧化酶,由于它们能够增强纤维素和几丁质降解酶系糖苷水解酶的降解能力,因此在难降解多糖降解领域具有巨大的应用潜力。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种多糖裂解单加氧酶cmlpmo10基因以及编码的多糖裂解单加氧酶,多糖裂解单加氧酶cmlpmo10能够分解几丁质或纤维素,还可以协同几丁质酶或纤维素酶分解几丁质或纤维素,明显提高几丁质酶或纤维素酶对几丁质和纤维素的分解效率。
2、为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
3、本发明提供了一种多糖裂解单加氧酶cmlpmo10基因,该多糖裂解单加氧酶cmlpmo10基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
4、本发明提供了所述基因编码的多糖裂解单加氧酶cmlpmo10,该多糖裂解单加氧酶cmlpmo10的氨基酸序列如seq id no.2所示。
5、本发明提供了含有所述糖裂解单加氧酶cmlpmo10基因的重组表达质粒。
6、作为优选,使用的原始质粒为pet-32a质粒。
7、本发明还提供了所述多糖裂解单加氧酶cmlpmo10在氧化降解多糖生物质中的应用。
8、作为优选,所述应用过程中同时添加多糖裂解单加氧酶cmlpmo10和糖苷水解酶,所述多糖裂解单加氧酶cmlpmo10与糖苷水解酶的体积比为1:(1.5-2.5)。
9、作为优选,所述糖苷水解酶包括几丁质酶或纤维素酶。
10、作为优选,所述多糖生物质包括几丁质或纤维素。
11、通过采用上述技术方案,本发明具有如下有益效果:
12、本发明的多糖裂解单加氧酶cmlpmo10基因如seq id no.1所示,编码酶的氨基酸序列如seq id no.2所示。本发明获得的多糖裂解单加氧酶cmlpmo10可以用于氧化降解多糖生物质,还可以协同几丁质酶或纤维素酶分解几丁质或纤维素,明显提高几丁质酶或纤维素酶对几丁质或纤维素的分解效率,应用到生物能源炼制等方面。
1.一种多糖裂解单加氧酶cmlpmo10基因,其特征在于,该多糖裂解单加氧酶cmlpmo10基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.权利要求1所述基因编码的多糖裂解单加氧酶cmlpmo10,其特征在于,该多糖裂解单加氧酶cmlpmo10的氨基酸序列如seq id no.2所示。
3.含有权利要求1所述糖裂解单加氧酶cmlpmo10基因的重组表达质粒。
4.根据权利要求3所述的重组表达质粒,其特征在于,使用的原始质粒为pet-32a质粒。
5.权利要求2所述多糖裂解单加氧酶cmlpmo10在氧化降解多糖生物质中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述应用过程中同时添加多糖裂解单加氧酶cmlpmo10和糖苷水解酶,所述多糖裂解单加氧酶cmlpmo10与糖苷水解酶的体积比为1:(1.5-2.5)。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述糖苷水解酶包括几丁质酶或纤维素酶。
8.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述多糖生物质包括几丁质或纤维素。
