本发明涉及微生物,尤其涉及香菇菌种保存方法及其子实体复苏和菌丝培养的方法。
背景技术:
1、目前食用菌菌种的保存常用方法主要有以下三种:一是采用液氮超低温保存,二是0-4℃冰箱保存;三是无菌水或液体石蜡常温保存,上述三种保存方法各有利弊,超低温液氮保存,是食用菌菌种保存年限最长的一种保存方法,效果较好,但存在操作程序繁琐、技术要求高、设备价格昂贵、日常维护费用偏高等诸多弊端,致使普通生产者及菌种生产企业望而却步,使用者大都为大专院校和科研院所。冰箱0-4℃的菌种保存方法最为常用,具有设备简易、技术含量低、易于操作等优点,但也存在3-4个月就需转管一次,否则菌种就会老化,或因无序转代之培养基配方、菌丝培养条件及操作误差等原因,所保存菌种极易出现老化退化问题。液体石蜡和无菌水封存法保存菌种,具有操作简便、不需要仪器设备、技术含量低等优点,但该种保存方法存在保存时间短、菌丝复活困难、菌株变异潜在风险高等缺点,应用相对较少。而申请人经过偶然的发现,并进行深入的研究,开发出了操作简单,成本低,保存年限长,并复活率高的香菇菌种保存方法。
技术实现思路
1、基于以上背景,本发明提供香菇菌种保存方法及其子实体复苏和菌丝培养的方法,操作简单,成本低,菌种稳定保存年限长,并复活率高的香菇菌种保存方法,并进一步地开发出了子实体复苏和菌丝培养的方法。
2、本发明的技术方案为:
3、香菇菌种保存方法,其包括如下步骤:
4、s1:在菌棒在第一或第二出菇潮时,选择个体均匀、朵形圆正、无病虫害、无畸形、不开伞的6-8分熟还未有弹射孢子的子实体;
5、s2:将步骤s1采摘的子实体移入超净工作台中,进行紫外杀菌消毒,并通风散发子实体表面水分;
6、s3:对子实体进行修切后,取菌褶与菌柄交接部位及纵深0.5cm的肉质组织并切成组织块;
7、s4:避光照,对子实体进行通风干燥,干燥至子实体组织块降重至原重的15-20%后,排除空气进行密封保存;
8、s5:将装有干燥的子实体的密封袋置于0-4℃进行保存。
9、进一步地,步骤s3中切块组织块的大小为0.4×0.4×0.4cm-0.6×0.6×0.6cm。
10、进一步地,步骤s1对子实体进行采摘时,用手捏住菇柄根部,经旋转后采下,并刮掉基部培养基。
11、基于同一发明构思,本发明还提供了了采用上述的香菇菌种保存方法保存的干燥的子实体的复苏和菌丝培养的方法,其包括如下步骤:
12、(1)取密封袋中干燥的子实体,依次采用高锰酸钾、酒精进行处理后,并采用无菌水对子实体组织块表面残存的高锰酸钾和酒精进行稀释后,并沥水至无水滴;
13、(2)取步骤(1)处理后的子实体组织块分别转接接种到多个平板培养基上;
14、用透气的平板封口塑料带对平板培养基进行封口后,移入生化培养箱中进行菌丝的培养;
15、(3)当菌丝圈生长至直径75-85mm时将其转接至新的空白平板培养基后,继续培养;
16、(4)待转接后的平板培养基长满菌丝后即可于0-4℃短期进行保存,待需要时采用菌丝进行菌种扩繁及其出菇生产。
17、进一步地,步骤(1)中的高锰酸钾的质量浓度为4‰。
18、进一步地,步骤(1)中酒精的体积浓度为75%。
19、进一步地,步骤(3)在对菌丝进行转接前需对菌丝进行三次筛选,具体的筛选操作见下:
20、第一次筛选:在步骤(2)中将子实体组织块接种至平板培养基后的第四天进行,主要是观察接种物萌发菌丝情况,淘汰没有萌发菌丝平板,保留已经萌发菌丝的平板继续培养;
21、第二次筛选:在步骤(2)中将子实体组织块接种至平板培养基后的第六天进行,主要考察菌丝边缘生长是否整齐一致,有无角变扇变,菌丝生长是否洁白一致,菌丝是否粗壮有力,接种点是否变色和色斑,不符合条件的平板培养基予以淘汰,符合条件的平板培养基保留继续培养;
22、第三次筛选:在第二次筛选后的24小时在平板背面菌丝尖端划线或测量菌丝直径,相隔24小时再测量一次,依次测量和计算菌丝实际生长速度,生长速度低于2.5mm/日的平板培养基淘汰,生长速度大于或等于2.5mm/日的平板培养基淘汰保留继续培养;
23、经过三次筛选后的平板培养基在符合要求后进行转接。
24、进一步地,步骤(3)在对菌丝进行转接时的操作具体见下:
25、在无菌条件下,使用无菌打孔器在平板内以接种点为中心点,在半径为30mm位置圆形取点,并转接与新的空白平板之上,继续恒温培养。
26、进一步地,步骤(2)至(4)菌丝的培养环境条件如下:
27、温度设定25℃±0.5℃;空气相对湿度保持在60%以下;要求暗光培养;二氧化碳浓度不得高于5000ppm。
28、采取本发明实现的有效效果为:
29、本发明采用将还未有弹射孢子的6-8分熟的子实体(此时香菇还未开伞)进行干燥处理,以实现菌种的保存,操作简单,成本低,并其有效保存时限长(4年以上),子实体复苏转接后复活率可高达95%及以上,并可随取随用。
30、本发明相较于单将菌种于0-4℃进行保存,无需进行不断转管操作,可大大节省操作,更为简便,可极大的降低成本。
31、并且经过实验验证,干燥保存的子实体再复苏接种,以子实体组织块接种至平板培养基后,直接生成菌丝进行培养,并经过实验验证,通过本发明保存的香菇菌种是未有出现明显的菌株老化及其突变现象,能够很好的保有菌株原有的优良种性;并在出菇菌棒生产时,抗杂能力强、菌丝生长速度快、丰产性好。
1.香菇菌种保存方法,其特征在于,其包括如下步骤:
2.根据权利要求1所述的香菇菌种保存方法,其特征在于,
3.根据权利要求1所述的香菇菌种保存方法,其特征在于,步骤s1对子实体进行采摘时,用手捏住菇柄根部,经旋转后采下,并刮掉基部培养基。
4.子实体的复苏和菌丝培养的方法,其特征在于,其针对权利要求1至3任一项保存的干燥的子实体进行复苏和菌丝培养,具体包括如下步骤:
5.根据权利要求4所述的子实体的复苏和菌丝培养的方法,其特征在于,步骤(1)中的高锰酸钾的质量浓度为4‰。
6.根据权利要求5所述的子实体的复苏和菌丝的培养方法,其特征在于,步骤(1)中酒精的体积浓度为75%。
7.根据权利要求4所述的子实体的复苏和菌丝培养的方法,其特征在于,步骤(3)在对菌丝进行转接前需对菌丝进行三次筛选,具体的筛选操作见下:
8.根据权利要求7所述的子实体的复苏和菌丝培养的方法,其特征在于,步骤(3)在对菌丝进行转接时的操作具体见下:
9.根据权利要求4所述的子实体的复苏和菌丝培养的方法,其特征在于,步骤(2)至(4)菌丝的培养环境条件如下:
