本发明属于植物保护,具体涉及一种植物生防菌株的筛选方法。
背景技术:
1、作物病虫害是我国的主要农业灾害之一,它具有种类多、影响大、并时常暴发成灾的特点。现在常用的防治植物病害的方法有农业防治和化学防治,主要是通过农业和物理控制,辅之以化学控制。但它们都存在一定的问题,如农业防治防治效果有限,防治方法通常需要长时间的实践,防治效果相对较弱。化学防治由于化学药剂的使用,容易残留在土壤和水源中,可能对生态环境造成一定的影响,同时,化学药剂在农产品上的残留问题可能对人体健康造成影响,引发慢性疾病等健康问题。因此,采用生物防治的方法帮助植物抵御病害变成了一种必要的手段。
2、生防菌(biocontrolbacteria)是指能利用有益微生物杀死或降低病原微生物的数量,以控制植物病害发生的一类措施,主要是利用生防真菌、生防细菌和链霉菌等微生物群体通过调节生物的种间、种内关系降低有害病菌在入侵部位的密度来防治植物病害,即用生物防治生物,是一种对社会环境友好,对人体健康无害的生物防治手段。鉴于此,近年来利用生防微生物来防治病害已经成为国内外在生物防治研究中的一个热点。
3、传统筛选生防菌的方式多是实验人员前往植物病害发生地采集土壤样品,这种方法不仅耗费大量的时间,而且对单一病原菌的针对性不强,很难在多病害发生地筛选出针对某一种病原菌的拮抗菌株。但迫于现阶段我国长时间使用化学杀菌剂等手段对生态和环境造成的危害,采用微生物防治帮助植物抵御病害变成了一种必要的手段。因此迫切需要一种能快速有效筛选生防菌的方法,可以针对单一病原菌快速筛选出能拮抗病原菌生长的菌株。
技术实现思路
1、本发明提供了一种植物生防菌株的筛选方法,诱导植物自身募集益生微生物,快速筛选对单一病原菌和广谱抗病的生防菌。
2、本发明提供了一种生防菌株的筛选方法,包括以下步骤:利用免疫抑制剂对植株灌根,或利用病原真菌喷施植株叶面,分离纯化根际土壤中微生物和/或植物内生菌,鉴定得生防菌株。
3、优选的,所述灌根包括每周灌根一次,共灌根4次。
4、优选的,所述免疫抑制剂包括雷帕霉素。
5、优选的,在利用所述免疫抑制剂第一次灌根后一个月,分离纯化根际土壤中的微生物。
6、优选的,利用病原真菌喷施植株叶面时,每7天喷施一次,共喷施2次。
7、优选的,喷施所述植株叶面时,应用的病原真菌包括病原真菌的孢子悬液。
8、优选的,在植株叶面出现明显病变时,分离纯化根际土壤中微生物,并分离纯化植物内生菌。
9、优选的,所述植物内生菌分离的组织来源包括根、茎和叶。
10、本发明还提供了利用上述筛选方法筛选得到的生防菌株。
11、本发明还提供了基于上述生防菌株制备得到的生防菌剂。
12、有益效果:本发明提供了一种生防菌株的筛选方法,通过用免疫抑制剂免疫诱导或病原真菌侵染植物,利用植物在面对外界胁迫时的“呼救”反应,诱导植物根际招募并富集益生微生物,然后通过平板对峙的方法筛选出具有抑制真菌病害发生的拮抗菌株。
13、本发明实施例中,将植物培育到第4~5真叶期(大约4-5周龄)时,先利用雷帕霉素灌根处理辣椒幼苗,为期一个月(一周一次),一个月后从植物根际土壤中分离纯化根际细菌。或利用大丽轮枝菌孢子悬液叶面喷洒(直至达到径流)侵染棉花幼苗,病原体共接种两次(一周一次),以确保在实验期间病原体压力持续,当在植物叶片上能特别明显观察到病变时,可从植物根际土壤和体内分离纯化菌株。最后通过体外抑菌圈法筛选出拮抗灰霉病和棉花黄萎病等病原菌的拮抗菌株。
1.一种生防菌株的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:利用免疫抑制剂对植株灌根,或利用病原真菌喷施植株叶面,分离纯化根际土壤中微生物和/或植物内生菌,鉴定得生防菌株。
2.根据权利要求1所述筛选方法,其特征在于,所述灌根包括每周灌根一次,共灌根4次。
3.根据权利要求1或2所述筛选方法,其特征在于,所述免疫抑制剂包括雷帕霉素。
4.根据权利要求1所述筛选方法,其特征在于,在利用所述免疫抑制剂第一次灌根后一个月,分离纯化根际土壤中的微生物。
5.根据权利要求1所述筛选方法,其特征在于,利用病原真菌喷施植株叶面时,每7天喷施一次,共喷施2次。
6.根据权利要求1或5所述筛选方法,其特征在于,喷施所述植株叶面时,应用的病原真菌包括病原真菌的孢子悬液。
7.根据权利要求6所述筛选方法,其特征在于,在植株叶面出现明显病变时,分离纯化根际土壤中微生物,并分离纯化植物内生菌。
8.根据权利要求7所述筛选方法,其特征在于,所述植物内生菌分离的组织来源包括根、茎和叶。
9.利用权利要求1~8任一项所述筛选方法筛选得到的生防菌株。
10.基于权利要求9所述生防菌株制备得到的生防菌剂。
