本发明涉及分子生物学,具体涉及一种与甘蓝型油菜千粒重紧密相关的分子标记及其分子标记扩增引物和应用。
背景技术:
1、油菜(brassica napus l.)是世界上最重要的油料作物之一,也是我国第一大油料作物,菜籽油占整个国产食用植物油的55%以上。预计到2050年世界人口将达到90亿,为了满足供给缺口,油菜产量亟待提高(liu s y,raman h,xiang y,zhao c j,huang j y,zhang y y.de novo design of future rapeseed crops:challenges andopportunities.the crop journal,2022,10(3):587-596.)。油菜高产新品种的培育对满足国内外市场需求具有重要意义,对我国油菜产业的发展和油料供给安全提供重要保证。
2、粒重是油菜种子产量的主要组成部分。前人对油菜粒重进行了大量的qtl定位或关联分析,试图解析其遗传基础,目前仅鉴定出少数功能基因,对油菜粒重调控机制的认识有限(dong h l,yang l,liuy l,tian g f,tang h,xin s s,cui y x,xiong q,wan h f,liu z,jung c,qian w.detection of new candidate genes controlling seed weightby integrating gene coexpression analysis and qtl mapping inbrassica napusl.the cropjournal,2022.)。随着油菜基因组测序的完成和泛基因组平台的建立,借助数量性状位点(qtl)定位和分子标记,对油菜粒重性状进一步研究,将有助于推动油菜粒重功能基因的挖掘,为揭示油菜粒重的调控机制奠定基础,同时有助于油菜高产育种的分子标记辅助选择。因此,希望提供一种甘蓝型油菜千粒重主效qtl位点紧密相关的indel标记,其能检测或预测甘蓝型油菜的千粒重大小,对甘蓝型油菜的千粒重进行有效选择,可用于甘蓝型油菜粒重qtl位点的精细定位和图位克隆,对解析油菜粒重的调控机制具有重要意义,也可用于甘蓝型油菜粒重性状的分子标记辅助育种,加速油菜高产品种的育种进程。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种与甘蓝型油菜千粒重紧密相关的分子标记及其扩增引物,为解决常规育种方法中存在的千粒重性状必须在种子成熟收获后才能考察鉴定、群体鉴定工作量大、周期长等缺点,提高育种和生产效率。
2、为了达到上述目的,本发明提供了一种与甘蓝型油菜千粒重性状相关的分子标记,该分子标记为da03-213,包含核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4的两条序列,该分子标记可用于甘蓝型油菜千粒重性状的鉴定。
3、本发明还提供了一种鉴定上述分子标记的扩增引物,该扩增引物包含核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2的两条引物,该扩增引物还可以制备成一种鉴定甘蓝型油菜千粒重性状的试剂盒。
4、本发明提供的扩增引物和试剂盒均可用于甘蓝型油菜种植领域中,具体可用于甘蓝型油菜千粒重性状的鉴定和提高甘蓝型油菜的育种效率。
5、本发明还提供了一种甘蓝型油菜千粒重性状的鉴定方法,包含如下步骤:
6、(1)提取待测甘蓝型油菜的基因组dna;
7、(2)以提取的基因组dna为模板,利用上述的扩增引物进行pcr扩增;
8、(3)通过扩增结果判断甘蓝型油菜的千粒重性状,当扩增产物的序列为seq idno.3时,表明该待测甘蓝型油菜为低千粒重性状;当扩增产物的序列为seq id no.4时,表明该待测甘蓝型油菜为高千粒重性状;当扩增产物的序列为seq id no.3和seq id no.4时,表明该待测甘蓝型油菜为中千粒重性状。
9、优选地,上述的pcr扩增条件具体为:
10、pcr反应体系为:50ng/μl的dna模板1μl,2×taq mix加5μl,10mm的正、反向扩增引物分别加0.5μl,ddh2o补足至10μl;
11、pcr扩增程序为梯度扩增:94℃5min;[94℃30s,62℃30s(δt=-0.5℃),72℃30s]×10循环;[94℃30s,57℃30s,72℃30s]×25循环;72℃5min,16℃pause。
12、本发明具有以下优点:
13、本发明公开了一种与甘蓝型油菜千粒重性状相关的分子标记及其扩增引物,通过该扩增引物对分子标记进行扩增鉴定,可以实现甘蓝型油菜千粒重性状的判定,有效解决了常规育种方法中存在的千粒重性状必须在种子发育至成熟收获才能鉴定、群体鉴定工作量大、周期长等缺点,显著提高了甘蓝型油菜千粒重植株的选择效率,节约了育种选择的时间。其检测简便快捷、成本低廉、结果稳定,适于大规模推广应用。
1.一种与甘蓝型油菜千粒重性状相关的分子标记,其特征在于,该分子标记为da03-213,包含核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4的两条序列。
2.如权利要求1所述的分子标记在甘蓝型油菜千粒重性状鉴定中的应用。
3.一种鉴定如权利要求1所述分子标记的扩增引物,其特征在于,所述扩增引物包含核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2的引物。
4.如权利要求3所述的扩增引物在甘蓝型油菜种植领域中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,该应用包含甘蓝型油菜千粒重性状的鉴定或/和提高甘蓝型油菜的育种效率。
6.一种鉴定甘蓝型油菜千粒重性状的试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒包含如权利要求3所述的扩增引物。
7.一种甘蓝型油菜千粒重性状的鉴定方法,其特征在于,包含如下步骤:
8.根据权利要求7所述的鉴定方法,其特征在于,所述pcr扩增的条件包含:pcr反应体系为:50ng/μl的dna模板加1μl,2×taq mix加5μl,10mm的正、反向扩增引物分别加0.5μl,ddh2o补足至10μl;
