本发明涉及一种液体肉毒杆菌毒素制剂，其包含:(i)肉毒杆菌毒素，(ii)稳定蛋白如人血清白蛋白，(iii)螯合剂(例如edta)或磷酸盐，以及任选的(iv)钙盐、镁盐或锌盐，(v)张力剂和/或(vi)缓冲剂。此外，本发明涉及液体肉毒杆菌毒素制剂用于治疗和美容处理的用途。
背景技术：
1、肉毒杆菌神经毒素(bont或肉毒杆菌毒素(bt))是细菌神经毒素的一个家族，其被广泛用于治疗越来越多的神经、医学和美容疾病。bont有八种血清型(bont/a-h)。目前临床使用的有两种血清型，a型(bont/a)和b型(bont/b)。bont由梭菌属物种(clostridiumspp.)，特别是肉毒梭菌(clostridium botulinum)产生，以高分子量(高达～900kda)络合物的形式存在。这些毒素络合物由活性150kda的神经毒素和多种络合蛋白(无毒神经毒素相关蛋白，nap)组成。
2、150kda神经毒素被合成为一种无活性的单链多肽(～150kda)，其被蛋白水解切割成通过链间二硫键连接的轻链(lc，～50kda)和重链(hc，100kda)。hc包含介导与受体结合的c-末端结构域和介导lc跨内体膜转位的n-末端结构域。lc在神经元中充当蛋白酶并切割神经元snare蛋白。这阻止了突触小泡与质膜的融合，从而抑制了选定神经元的神经递质释放。
3、bonts的配制非常具有挑战性，因为其结构复杂且所用的产品浓度低。bont极易受各种条件的影响，如热和碱性ph。因此，由于bont只有在其结构完整的情况下才有功能，所以制备bont的医学剂型的挑战是配制一种组合物，该组合物在产品的生产、储存或使用过程中保护bont免于失活或部分丧失生物活性。此外，由于bont的极高效力，人类致死剂量仅为约0.1-1ng/kg，bont的药物制剂包含极少量的毒素，每瓶仅约1ng。这加剧了已知的由于表面变性导致的毒素活性丧失的问题。因此，bont配方中的主要挑战之一是在生产和储存过程中最小化活性损失。
4、由于这些因素，目前可用的主要bont产品是以冻干粉末的形式提供的，即在2-8℃甚至室温下储存时长期稳定的形式冻干形式的bont/a络合物于1989年(allergan)和1991年(ipsen)首次上市。在2005年，不含络合蛋白的纯150kda bont/a神经毒素的第一个稳定剂型被批准(merz制药公司)。然而，这些冻干产品需要在使用前重新配制，这一过程可能导致剂量误差和无菌问题。因此，已经进行了大量的努力来开发bont的液体制剂，其使用更方便并且可以容易地施用。
5、bont的第一个液体制剂于2000年获得批准，并于2001年作为在欧洲上市。(eisai)是bont/b络合物的无菌溶液，配制在含有琥珀酸二钠、氯化钠、人血清白蛋白(hsa)、辛酸钠和n-乙酰色氨酸钠的缓冲液中。然而，由于其酸性ph值，该产品在注射时可能会有疼痛。对于bont/a，迄今为止只有两种液体制剂获得了市场批准:(medytox)，但仅限于亚洲国内市场(例如，韩国，2013年批准)，以及(lpsen/galderma)，2021年批准在欧洲使用。这两种液体制剂都含有bont/a毒素络合物，并且除了水之外，还含有氯化钠、去污剂(polysorbate 20；聚山梨醇酯80)，氨基酸(蛋氨酸；组氨酸)和另外的赋形剂(磷酸钠作为缓冲剂；蔗糖)。
6、尽管在液体肉毒杆菌毒素制剂的制备方面取得了这些进展，但仍然需要新的选择来开发在运输和储存期间稳定的即用型肉毒杆菌毒素液体制剂。
7、本发明的目的
8、本发明的目的是提供一种肉毒杆菌毒素的稳定液体制剂，其可直接用于治疗和美容处理。
技术实现思路
1、本发明基于令人惊讶的发现，即向含有人血清白蛋白(hsa)的肉毒杆菌毒素液体制剂中加入螯合剂(例如edta)或磷酸盐会产生对热和光都稳定的改良制剂。
2、因此，一方面，本发明提供了一种液体制剂，其包含:
3、(i)肉毒杆菌毒素，
4、(ii)稳定蛋白，优选人血清白蛋白(hsa)，和
5、(iii)螯合剂或磷酸盐。
6、任选地，本发明的液体制剂进一步包含(iv)钙盐、镁盐或锌盐，或其混合物，或(v)张力剂(例如氯化钠)，或(vi)缓冲剂(例如磷酸盐缓冲剂或组氨酸缓冲剂或两者)，或组分(iv)-(vi)中的两种(例如(iv)和(v)、(iv)和(vi)，或(v)和(vi))，或组分(iv)-(vi)中的所有三种。
7、在另一方面，本发明涉及用于治疗的根据本发明的液体制剂，特别是用于治疗神经肌肉疾病、疼痛、流涎、多汗症、泌尿系统疾病和神经系统疾病。
8、在另一方面，本发明涉及本发明的液体制剂的美容(美学)用途，用于治疗美容病况，优选皮肤病况，特别是用于治疗皮肤纹理或褶皱或皱纹。
9、在另一方面，本发明涉及一种治疗疾病或病况的方法，包括给有需要的人施用有效量的本发明的液体制剂。
10、在所附权利要求中阐述了根据本发明的液体肉毒杆菌毒素制剂、其用途和使用方法的优选实施方案。
11、通过参考本发明的以下具体实施方式和其中包括的实施例，可以更容易地理解本发明。
1.一种液体制剂，其包含
2.根据权利要求1所述的液体制剂，其中所述稳定蛋白选自人血清白蛋白、卵清蛋白、酪蛋白及其混合物，或者其中所述稳定蛋白是人血清白蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的液体制剂，其中所述稳定蛋白是人血清白蛋白，并且所述人血清白蛋白以0.001-1.00％w/v的浓度存在于所述液体制剂中。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的液体制剂，其中所述螯合剂选自由以下组成的组：具有三到六个羧酸官能团的氨基多羧酸、柠檬酸盐、卟啉、n,n,n′,n′-四(2-吡啶基甲基)-1,2-乙二胺(tpen)、三亚乙基四胺(teta)及其混合物。
5.权利要求4所述的液体制剂，其中所述螯合剂是通式(i)的氨基多羧酸:
6.根据权利要求1-5中任一项所述的液体制剂，其中所述螯合剂以0.01-100mm的浓度存在于所述液体制剂中。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的液体制剂，其中所述肉毒杆菌毒素为不含络合蛋白的肉毒杆菌神经毒素，或其中所述肉毒杆菌毒素为血清型a的肉毒杆菌毒素，或其中所述肉毒杆菌毒素为不含络合蛋白的血清型a的肉毒杆菌神经毒素，或其中所述肉毒杆菌毒素为血清型a的肉毒杆菌毒素且以1-1000u/ml的浓度存在，或其中所述肉毒杆菌毒素为不含络合蛋白的血清型a的肉毒杆菌神经毒素且以1-1000u/ml的浓度存在。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的液体制剂，其包含
9.根据权利要求1-8中任一项所述的液体制剂，其中所述液体制剂进一步包含:
10.根据权利要求1-9中任一项所述的液体制剂，其中所述液体制剂进一步包含:
11.根据权利要求1-10中任一项所述的液体制剂，其中所述液体制剂进一步包含:
12.根据权利要求1-11中任一项所述的液体制剂，其中所述液体制剂的ph在5.0到8.0的范围内。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的液体制剂，其用于治疗，尤其用于治疗神经肌肉疾病、疼痛、流涎、多汗症、泌尿系统障碍和神经系统障碍。
14.根据权利要求1-12中任一项所述的液体制剂用于治疗美容病况的美容用途。
15.一种治疗疾病或病况的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的权利要求1-12中任一项所述的液体制剂。
