本发明涉及食品添加剂制备，特别涉及一种莱鲍迪苷n、o的分离方法。
背景技术：
1、甜菊糖苷是从菊科草本植物甜叶菊中提取的天然甜味剂，它具有高甜度、低热量的功能特点，其甜度是蔗糖的100-300倍，热量仅为蔗糖的1/300。甜菊糖苷2022版新国标中，糖苷范围从2014版的9种(ra、st、rc、rd、da、rub、rb、sbio、rf)增加至13种，与国际标准jecfa(2017)一致，新增了莱鲍迪苷e(re)、莱鲍迪苷m(rm)、莱鲍迪苷n(rn)、莱鲍迪苷o(ro)这4种化合物。
2、专利文献cn 108712864a的中国专利介绍了含有低含量莱鲍迪苷n、o组分的甜菊糖苷表现出与含有高含量莱鲍迪苷a、d、m等甜菊糖苷相似的口感，这表明莱鲍迪苷n、o对甜菊糖苷的甜味特征起到了显著的积极影响。
3、甜叶菊直接提取是常见的甜菊糖苷的主要提取方法，然而甜叶菊叶片中rn和ro的含量较低，经一定的提纯富集后含量有一定提升(提升至10-12％)，但是总苷含量较低，杂质含量较高，采用一般的树脂和结晶的方式很难将其分离提纯。
4、甜菊糖苷结晶母液是工业上通过溶剂浸提回收掉莱鲍迪苷a(ra)和甜菊苷(st)之后得到的反应尾液经过喷干后形成的粉末固体，也称为母液糖(mls)，一般作为低价甜味剂销售，甜菊糖苷结晶母液含有60％左右的甜菊糖苷，其中包含了上述的13种糖苷。从结晶母液中进一步回收甜菊糖苷不仅仅能够进一步提升甜菊糖苷的收率，还可以变废为宝，实现废物利用。比如中国专利cn108530503b公开了一种莱鲍迪苷c的分离纯化方法，其能够从甜菊糖苷结晶母液(母液糖)中回收得到高纯度莱鲍迪苷c(rc)，并且收率高；同时也可回收莱鲍迪苷a(ra)。
5、莱鲍迪苷n、o在结晶母液中的含量为10-15％，由于其含量较低，分离较难的原因。现有技术中并未记载从甜菊糖苷结晶母液中分离、提纯得到高纯度莱鲍迪苷n、o的方法。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种莱鲍迪苷n、o的分离方法，用于填补现有技术中从甜菊糖苷结晶母液中分离、提纯得到高纯度莱鲍迪苷n、o的空白。
2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：本发明提供一种莱鲍迪苷n、o的分离方法，包括以下步骤：
3、将甜菊糖苷结晶母液与水混合，得到结晶母液水溶液；
4、将所述结晶母液水溶液通过树脂进行分离，分离后所述树脂经溶剂1解析得到解析液，所述解析液经浓缩干燥得到甜菊糖苷i；
5、将所述甜菊糖苷i加入溶剂2中进行结晶，得到甜菊糖苷i结晶母液；
6、将所述甜菊糖苷i结晶母液通过色谱柱进行分离，再经过溶剂3进行洗脱，收集2-3bv流出段并经浓缩干燥得到甜菊糖苷ii，收集3-5bv流出段并经浓缩干燥得到甜菊糖苷iii；
7、将所述甜菊糖苷ii和iii分别加入溶剂4中进行结晶分别得到甜菊糖苷iv和v。
8、本发明公开一种莱鲍迪苷n、o的分离方法，包括以下步骤：将甜菊糖苷结晶母液与水混合，配置得到结晶母液水溶液；将所述结晶母液水溶液通过树脂进行分离，所述树脂经溶剂1解析得到甜菊糖苷i；将所述甜菊糖苷i加入溶剂2中进行结晶，得到甜菊糖苷i结晶母液；将所述甜菊糖苷i结晶母液通过色谱柱进行分离，再经过溶剂3进行洗脱，从不同洗脱段得到甜菊糖苷ii和iii；将甜菊糖苷ii和iii分别加入溶剂4中进行结晶分别得到主要成分为莱鲍迪苷n的甜菊糖苷iv和主要成分为莱鲍迪苷o的甜菊糖苷v。与现有技术相比，本发明以甜菊糖苷生产尾液母液糖为原料，通过对甜菊糖苷母液糖采用特定的树脂吸附和色谱柱分离，再经结晶和重结晶方法进一步分离，最终分离、提纯得到了高纯度的莱鲍迪苷n、o产品，填补了甜菊糖苷结晶料液处理上的技术空白，为莱鲍迪苷n、o的生产提供了新思路。实验结果表明，结晶后得到的甜菊糖苷iv和v中莱鲍迪苷n、o的含量分别可达85.3％和79.4％；再经重结晶得到的甜菊糖苷vi和vii中莱鲍迪苷n、o的含量分别可达97.5％和96.2％。
1.一种莱鲍迪苷n、o的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述结晶母液水溶液的质量浓度为5-10wt％；所述结晶母液水溶液的上样量为所述树脂体积的1-2bv；所述树脂为苯乙烯结构的非极性或弱极性的吸附树脂。
3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述溶剂1为体积比(0-30)：100的醇-水溶液；所述溶剂1的用量为所述树脂体积的1-3bv。
4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述溶剂2为90-95wt％的醇溶液，所述溶剂2的用量为所述甜菊糖苷i体积的1-3bv。
5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述色谱柱为低压、中压或高压色谱柱；所述色谱柱的填料为正向色谱填料中的一种；所述甜菊糖苷i结晶母液的上样量为所述色谱柱体积的2-5％。
6.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述溶剂3为水、甲醇、乙醇、乙腈或乙酸乙酯中的一种或多种，所述溶剂3的用量为所述色谱柱体积的5bv。
7.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述溶剂4为水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙腈或乙酸乙酯中的一种或多种；所述溶剂4的用量为所述甜菊糖苷ii体积的2-10bv；所述结晶包括将所述甜菊糖苷ii和iii分别加入溶剂4中，在60-100℃条件下溶解，后降温至温度为0-30℃，在80-120rpm条件下结晶20-30h。
8.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，在将所述甜菊糖苷ii和iii分别加入溶剂4中进行结晶后，还包括将所得晶体进行过滤、溶剂淋洗、干燥后分别得到甜菊糖苷iv和甜菊糖苷v。
9.根据权利要求1或8所述的分离方法，其特征在于，在得到所述甜菊糖苷iv和v后，还包括将所述甜菊糖苷iv和v分别加入溶剂5中在80-100℃条件下溶解，溶解后进行重结晶得到甜菊糖苷vi和vii。
10.根据权利要求9所述的分离方法，其特征在于，所述溶剂5的用量为所述甜菊糖苷iii体积的4-10bv；所述重结晶的温度为20-50℃，搅拌速率为80-120rpm；所述溶剂5为体积比为(50-70)：100的醇-水溶液。
