本发明涉及植物组织人工培养，特别涉及一种燕窝果的快速训化方法。
背景技术：
1、燕窝果，原产于中美洲，是量天尺与蛇鞭柱(selenicereus grandiflorus)的杂交种，与常见的黄皮白肉火龙果相似，但并不等同于黄色火龙果。燕窝果被誉为火龙果中的皇后，其营养丰富，果肉结构呈细丝状，滑如燕窝，香甜可口，汁丰润喉，含有一般植物少有的植物性白蛋白及花青素，丰富的维生素和水溶性膳纤维。相比于普通火龙果，燕窝果从开花到果实成熟需要3～6个月的时间，单果重也比普通火龙果轻。目前燕窝果种苗通过实生、扦插和嫁接的方式繁殖，但繁殖系数低且受繁殖材料的限制，繁殖数量不能满足市场需求。植物组织培养技术可短期内繁育大量品质一致性的健康种苗，且可保存优良燕窝果的种质资源，植物培养取材量少，繁殖系数高且速度快，提高了生产化育苗的效率。目前燕窝果组织培养周期相对较长，继代生长周期一般为50-60天，生根周期一般为30-35天，本发明提供一种燕窝果的快速训化方法，提高了生产化育苗的效率，具有应用前景。
技术实现思路
1、鉴以此，本发明提出一种燕窝果的快速训化方法。
2、本发明的技术方案是这样实现的：
3、一种燕窝果快速训化方法，包括以下步骤：
4、(1)采用改性ms液体培养基，配制液体培养基ⅰ和液体培养基ⅱ；
5、优选的，液体培养基ⅰ由改性ms基本培养基+naa0.5-0.8mg/l+6-ba1.5-2.5mg/l+聚乙烯吡咯烷酮45-55mg/l+活性炭0.1-0.2g/l+蔗糖15-25g/l+抗生素3-5mg/l组成，ph值5.8-6.0；
6、优选的，液体培养基ⅰ中抗生素为硫酸链霉素，硫酸链霉素体积浓度为40-45μg/ml，所述液体培养基ⅰ-ⅱ在-20～-25℃保存。
7、优选的，液体培养基ⅱ由改性ms基本培养基+6-ba3-3.5mg/l+iaa0.4
8、-0.6mg/l+蔗糖20-23g/l+胰蛋白胨0.2-0.4g/l+活性炭0.1-0.2g/l组成，ph值5.8-6.0。
9、优选的，改性ms液体培养基组分和其对应的浓度如下：硝酸钾1700-1800mg/l，硝酸铵1500-1550mg/l，七水硫酸镁650-700mg/l，无水磷酸二氢钾160-170mg/l，二水氯化钙550-600mg/l，七水硫酸亚铁40-45mg/l，四水硫酸锰15-18mg/l，硫酸锌8-10mg/l，硼酸2-4mg/l，碘化钾0.5-0.7mg/l，五水硫酸铜0.02-0.03mg/l，六水氯化钴0.1-0.2mg/l，盐酸硫胺素5-7mg/l，烟酸2.0-2.3mg/l，盐酸吡哆醇2.0-2.3mg/l，肌醇80-90mg/l，6苄基嘌呤3.0-3.5mg/l，萘乙酸3.0-3.5mg/l。
10、优选的，改性ms液体培养基组分和其对应的浓度如下：硝酸钾1750mg/l，硝酸铵1500mg/l，七水硫酸镁650mg/l，无水磷酸二氢钾160mg/l，二水氯化钙600mg/l，七水硫酸亚铁45mg/l，四水硫酸锰16mg/l，硫酸锌10mg/l，硼酸3mg/l，碘化钾0.6mg/l，五水硫酸铜0.02mg/l，六水氯化钴0.1mg/l，盐酸硫胺素6mg/l，烟酸2.2mg/l，盐酸吡哆醇2.2mg/l，肌醇85mg/l，6苄基嘌呤3.0mg/l，萘乙酸3.0mg/l。
11、(2)选取含有刺座的健壮茎段灭菌；
12、优选的，灭菌方法，选取6-7cm含有刺座的健壮茎段灭菌，将茎段置于超净工作台，用无菌水清洗2-3次，75wt％乙醇棉片擦拭茎段2-3次；用无菌水清洗2-3次，用0.1％wthgcl2中浸泡10-12min；用无菌水清洗4-5次，再用2-5wt％次氯酸钠棉片擦拭2-3次，用无菌水清洗4-5次。
13、(3)将s2制备的灭菌枝条水平放置于液体培养基ⅰ中培养，得第一代无菌新芽，将第一代无菌新芽切段在液体培养基ⅱ中培养，得第二代无菌新芽；
14、优选的，第一代无菌新芽培养条件为，将s2制备的灭菌枝条水平放置于液体培养基ⅰ中，在光照强度为1600-2200lux，温度为25-27℃，16h光照与8h黑暗循环模式培养25-28d；所述第二代无菌新芽培养条件为，将第一代无菌新芽切段，取0.8-1cm中间段，置于液体培养基ⅱ中光照培养25-28d。
15、(4)将第二代无菌新芽移栽水培5-7d，得燕窝果幼苗。
16、优选的，新芽移栽水培的营养液成分包括，硝酸钾240-360g/l，硝酸钙400-450g/l，硫酸钾80-90g/l，磷酸二氢钾90-100g/l，磷酸二氢铵5-10g/l，硫酸镁180-220g/l，硫酸铜0.3-0.5g/l，钼酸铵0.1-0.3g/l，dtpa铁12-15g/l，氨基酸锌硫酸盐0.5-0.8g/l，氨基酸锰盐4.0-4.5g/l。
17、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
18、(1)本发明采用改性ms+抗生素液体培养基和新芽移栽水培的栽培方法培养的燕窝果幼苗根部有较好的发育，改性ms培养基增加了肌醇、6苄基嘌呤和萘乙酸和抗生素液体复配后，抑菌的同时增加了燕窝果幼苗根部的增长，使平均根直径、平均总根长和平均根表面积均显著提高。
19、(2)本发明采用改性ms+抗生素液体培养基和新芽移栽水培的栽培方法培育得燕窝果幼苗侧枝指标试验结果显示，该复配培养基配合水培的栽培方式有效提高了燕窝果幼苗得侧枝数量、侧枝长度和地上部生物量。
20、(3)本发明采用水培法能够在较短的时间内提高燕窝果的成活率，不需要使用土壤和农药等成本较高的资源，同时便于管理，节省时间和生产成本。
1.一种燕窝果快速训化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1-2所述的一种燕窝果快速训化方法，其特征在于，所述液体培养基ⅰ中抗生素为硫酸链霉素，硫酸链霉素体积浓度为40-45μg/ml，所述液体培养基ⅰ-ⅱ在-20～-25℃保存。
3.如权利要求1所述的一种燕窝果快速训化方法，其特征在于，s1，所述液体培养基ⅱ由改性ms基本培养基+6-ba3-3.5mg/l+iaa0.4-0.6mg/l+蔗糖20-23g/l+胰蛋白胨0.2-0.4g/l+活性炭0.1-0.2g/l组成，ph值5.8-6.0。
4.如权利要求1所述的一种燕窝果快速训化方法，其特征在于，s1，所述改性ms液体培养基组分和其对应的浓度如下：硝酸钾1700-1800mg/l，硝酸铵1500-1550mg/l，七水硫酸镁650-700mg/l，无水磷酸二氢钾160-170mg/l，二水氯化钙550-600mg/l，七水硫酸亚铁40-45mg/l，四水硫酸锰15-18mg/l，硫酸锌8-10mg/l，硼酸2-4mg/l，碘化钾0.5-0.7mg/l，五水硫酸铜0.02-0.03mg/l，六水氯化钴0.1-0.2mg/l，盐酸硫胺素5-7mg/l，烟酸2.0-2.3mg/l，盐酸吡哆醇2.0-2.3mg/l，肌醇80-90mg/l，6苄基嘌呤3.0-3.5mg/l，萘乙酸3.0-3.5mg/l。
5.如权利要求1所述的一种燕窝果快速训化方法，其特征在于，s1，所述改性ms液体培养基组分和其对应的浓度如下：硝酸钾1750mg/l，硝酸铵1500mg/l，七水硫酸镁650mg/l，无水磷酸二氢钾160mg/l，二水氯化钙600mg/l，七水硫酸亚铁45mg/l，四水硫酸锰16mg/l，硫酸锌10mg/l，硼酸3mg/l，碘化钾0.6mg/l，五水硫酸铜0.02mg/l，六水氯化钴0.1mg/l，盐酸硫胺素6mg/l，烟酸2.2mg/l，盐酸吡哆醇2.2mg/l，肌醇85mg/l，6苄基嘌呤3.0mg/l，萘乙酸3.0mg/l。
6.如权利要求1所述的一种燕窝果快速训化方法，其特征在于，s2，所述灭菌方法，选取6-7cm含有刺座的健壮茎段灭菌，将茎段置于超净工作台，用无菌水清洗2-3次，75wt％乙醇棉片擦拭茎段2-3次；用无菌水清洗2-3次，用0.1％wthgcl2中浸泡10-12min；用无菌水清洗4-5次，再用2-5wt％次氯酸钠棉片擦拭2-3次，用无菌水清洗4-5次。
7.如权利要求1所述的一种燕窝果快速训化方法，其特征在于，s3，所述第一代无菌新芽培养条件为，将s2制备的灭菌枝条水平放置于液体培养基ⅰ中，在光照强度为1600-2200lux，温度为25-27℃，16h光照与8h黑暗循环模式培养25-28d；所述第二代无菌新芽培养条件为，将第一代无菌新芽切段，取0.8-1cm中间段，置于液体培养基ⅱ中光照培养25-28d。
8.如权利要求1所述的一种燕窝果快速训化方法，其特征在于，s4，所述新芽移栽水培的营养液成分包括，硝酸钾240-360g/l，硝酸钙400-450g/l，硫酸钾80-90g/l，磷酸二氢钾90-100g/l，磷酸二氢铵5-10g/l，硫酸镁180-220g/l，硫酸铜0.3-0.5g/l，钼酸铵0.1-0.3g/l，dtpa铁12-15g/l，氨基酸锌硫酸盐0.5-0.8g/l，氨基酸锰盐4.0-4.5g/l。
