本发明涉及荧光探针,特别涉及一种荧光探针及其应用。
背景技术:
1、孔雀石绿(malachite green,孔雀石绿)是一种人工合成的三苯甲烷类染料,常用于纺织、皮革和印刷行业。人们发现孔雀石绿对部分水霉病、寄生虫病和细菌性疾病具有良好的效果,于是将孔雀石绿使用到水产养殖行业当中。但在发现孔雀石绿对生物表现出高水平的毒性、致癌性和致突变性,即使只有1mg/l的孔雀石绿都会对水生物种的生长和生产构成危害时,被多个国家在水产养殖行业中禁止使用。但由于孔雀石绿具有良好的抗菌性能、简单的获取途径和极低的价格,导致仍然有不少商家在水产品中违法添加孔雀石绿,同时由于染料行业随意排放未经处理的污水也会导致水中孔雀石绿含量超标。因此开发出多种检测方法用于检测水产品中的孔雀石绿是否超标,常规的方法有液相色谱法(hplc)、酶联免疫法(elisa)、电化学法和比色法等,hplc准确度高、检出限低、选择性强,但需要大量有机溶剂,仪器价格昂贵、操作复杂、测试耗时较长等缺点、技术要求高。elisa检测快速、分析效率高、反应灵敏,但该技术的缺点是抗体制备复杂、抗体保存困难、成本较高,由于孔雀石绿结构类似物(如cv,lcv等三苯甲烷类染料)的干扰,无法直接测量水产品中孔雀石绿的残留,导致该方法经常出现假阳性结果,结果可靠性低,影响了该方法在检测孔雀石绿方面的应用。电化学方法简单、检测速度快,但电化学传感器的寿命短,受温度影响较大,与实际样品中的其他物质交叉灵敏度大,导致实际样品的检测误差较大。比色法操作简单、应用范围广,但一般需要结合适配体、纳米金等识别和显色材料,价格昂贵。因此开发一款成本低廉,响应迅速,结果准确的方法检测孔雀石绿的残留具有非常重要的意义。
2、由于荧光法检测具有结构简单、特异性强、反应迅速、结果准确等优点被广泛应用到定量和定性分析当中。
技术实现思路
1、本发明以邻菲罗啉(phen)、α-噻吩甲酰三氟丙酮(tta)作为配体,制备出的稀土配合物eu(tta)3phen配合物对孔雀石绿(malachite green,孔雀石绿)具有高荧光猝灭特性,且对水产养殖常见的鱼药如磺胺、氯霉素、硝基呋喃类药物基本保持原有的荧光强度;将该稀土配合物可以用于养殖水喝水产品中孔雀石绿的检测。
2、为此,本发明提供的技术方案之一如下:
3、一种荧光探针,包括稀土配合物eu(tta)3phen。
4、在一实施例中,所述稀土配合物eu(tta)3phen的制备方法如下:
5、(1)将邻菲罗啉和噻吩甲酰三氟丙酮溶于溶剂;
6、(2)将铕盐溶于溶剂;
7、(3)将(2)得到的溶液加入(1)中混合,调节混合溶液ph并搅拌、分离、洗涤制得。
8、在一实施例中,所述步骤(1)和步骤(2)中的溶剂选自无水乙醇;
9、优选的,所述步骤(3)中的混合溶液ph值为6.5-7.5;
10、更优选的,所述步骤(3)中的混合溶液ph值为7;
11、优选的,所述步骤(3)中搅拌的温度为50-60℃;
12、更优选的,所述步骤(3)中搅拌的温度为50℃;
13、优选的,所述步骤(3)中搅拌的时间为3-5h;
14、更优选的,所述步骤(3)中搅拌的时间为3h。
15、本发明提供的技术方案之二如下:
16、如上所述的荧光探针在孔雀石绿检测中的应用。
17、在一实施例中,该应用包括以下步骤:
18、(1)将荧光探针溶液与待测溶液混合,检测待测溶液的荧光强度,得到待测溶液的荧光淬灭率;
19、(2)根据步骤(1)得到的荧光淬灭率和预定的线性曲线,得到待测溶液中孔雀石绿的浓度。
20、在一实施例中,所述线性曲线为孔雀石绿浓度与荧光淬灭率的线性曲线。
21、在一实施例中,所述荧光淬灭率=1-f/f0,f0为荧光探针溶液的初始荧光强度,f为待测溶液的荧光强度;
22、所述线性曲线的线性范围为0.1-10μmol/l。
23、在一实施例中,所述荧光探针溶液中,所述稀土配合物eu(tta)3phen的浓度为1.0-2.0μg/ml;
24、优选的,所述荧光探针溶液中使用的溶剂为乙腈或乙醇;
25、更优选的,所述荧光探针溶液中使用的溶剂为乙醇;
26、优选的,所述荧光探针溶液的ph值为6-8;
27、更优选的,所述荧光探针溶液的ph值为7。
28、本发明提供的技术方案之三如下:
29、如上所述的荧光探针在孔雀石绿去除领域中的应用。
30、基于上述,本发明提供的荧光探针可排除其他水产养殖类鱼药的干扰,对孔雀石绿产生专一的选择性。响应时间在1min内,线性范围为0.1-70μ/mol l,检出限为0.023μmol/l(3σ/k,n=9)。
31、利用该稀土配合物eu(tta)3phen对水样和鱼类中的孔雀石绿进行检测,加标回收率在89.2%-98.6%之间,可见,该稀土配合物eu(tta)3phen能作为荧光探针用于检测水产品中孔雀石绿的残留。
32、本发明的其它特征和有益效果将在随后的说明书中阐述,并且,部分地从说明书中变得显而易见,或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他有益效果可通过在说明书、权利要求书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。
1.一种荧光探针,其特征在于:包括稀土配合物eu(tta)3phen。
2.根据权利要求1所述的荧光探针,其特征在于,所述稀土配合物eu(tta)3phen的制备方法如下:
3.根据权利要求2所述的荧光探针,其特征在于:所述步骤(1)和步骤(2)中的溶剂选自无水乙醇;
4.根据权利要求1-3任一项所述的荧光探针在孔雀石绿检测中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,包括以下步骤:
6.根据权利要求5所述的孔雀石绿的应用,其特征在于:所述线性曲线为孔雀石绿浓度与荧光淬灭率的线性曲线。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述荧光淬灭率=1-f/f0,f0为荧光探针溶液的初始荧光强度,f为待测溶液的荧光强度;
8.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述荧光探针溶液中,所述稀土配合物eu(tta)3phen的浓度为1.0-2.0μg/ml;
9.根据权利要求1-3任一项所述的荧光探针在孔雀石绿去除领域中的应用。
