本发明属于生物，具体涉及种猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗及其制备方法与应用。
背景技术：
1、猪链球菌可引起猪急性败血症、脑膜脑炎、关节炎和急性死亡，也可导致生猪从业人员感染和死亡，是一种重要的人畜共患传染病。猪丹毒由红斑丹毒丝菌引起，可导致生猪从业人员感染和死亡，也是一种重要的人畜共患传染病。2010年以来，猪丹毒发病呈现逐年上升趋势，且主要为规模化猪场发病。
2、随着抗生素滥用问题的突出、临床上大量耐药细菌的产生以及抗生素药物残留引起的食品安全问题，国家逐步开展了减抗限抗政策，采用疫苗免疫是预防猪链球菌病、猪丹毒病等猪细菌病的最佳方式。同时，传统的全菌灭活疫苗或弱毒疫苗，虽在预防和控制传染病过程中起到了重要的作用，然而疫苗中存在的大量无效成份既可引起严重的副反应，又会引起过多无意义的非特异性免疫应答，浪费机体的免疫资源，不利于疫病的防控。而基因工程亚单位疫苗则具有安全性高、稳定性好、针对性强、副反应低等优点，是目前新型疫苗的重要研究方向。
3、猪链球菌具有多种血清型，并且可以利用毒力因子逃避宿主免疫系统，为开发高效的猪链球菌疫苗带来了巨大挑战。亚单位疫苗的目标是找到一种通用的保护性抗原，有效预防猪链球菌多种血清型的感染。在专利cn 116574160 a公开了一种猪链球菌免疫保护性抗原蛋白，发现其中小鼠感染模型中能够抵抗2型弱毒株的感染，但该蛋白能够抵抗强毒株感染或是否对其他血清型具有交叉保护作用并不清楚。专利cn 114903986 a公开了一种由猪链球菌3种抗原组成的三组分亚单位疫苗，其在3种蛋白浓度均为250ug/ml的浓度下对猪链球菌攻毒具有免疫保护作用。
4、猪丹毒是中国养猪业的三大传染病之一，目前主要试用灭活疫苗和弱毒活疫苗，灭活疫苗不能产生足够的保护力，弱毒活疫苗存在毒力返强和诱导隐形感染的可能性，亚单位疫苗是猪丹毒疫苗研究的主要方向。
5、猪链球菌病、猪丹毒两种疾病在猪群中的广泛流行，给生猪养殖业造成了重大的经济损失。因此，为解决上述问题，亟需开发一种安全高效的猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗。
6、猪链球菌abpb蛋白是猪链球菌表面抗原，具有精氨酸蛋白酶的功能，黄开松(2015)报道该蛋白在小鼠模型中能够抵抗2型猪链球菌的攻毒感染。atts是本发明首次公开的一个猪链球菌抗原，在本发明中其能够有效保护动物机体，避免猪链球菌攻毒感染引起的疾病。
7、本发明创制的新型猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗能同时有效预防猪链球菌病和猪丹毒，只需一针免疫，减少猪体应激，降低成本，不存在散毒的隐患，安全可靠，且生产工艺稳定，安全高效。
技术实现思路
1、本发明的目的之一在于提供了一种猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗，所述的亚单位疫苗包括猪链球菌抗原蛋白abpb、aats和猪丹毒抗原蛋白spaa，所述的abpb蛋白为seqid no.4所示，aats蛋白为seq id no.5所示，spaa蛋白为seq id no.6所示。
2、本发明的另一个目的在于提供了一种猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗的制备方法，利用该方法可大规模进行疫苗的制备，且无生物安全风险。
3、本发明的最后一个目的在于提供了一种猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗在制备猪链球菌和/或猪丹毒疫苗中的应用。
4、为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：
5、申请人采用蛋白质组学和反向疫苗学的方法，遵循精确、高效、微量和节省动物免疫资源、避免给动物施加大量无效蛋白刺激的原则，筛选到具有较好免疫原性和广谱性的猪链球菌免疫蛋白abpb、aats和猪丹毒免疫蛋白spaa，利用这三种蛋白，可制备为猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗。
6、本发明的保护范围包括：
7、一种猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗，所述的亚单位疫苗包括猪链球菌抗原蛋白abpb、aats和猪丹毒抗原蛋白spaa，所述的abpb蛋白为seq id no.4所示，aats蛋白为seqid no.5所示，spaa蛋白为seq id no.6所示。
8、上述二联亚单位疫苗的制备方法，包括将合成好的抗原蛋白abpb、aats和spaa的编码序列分别插入原核表达载体pet-28a后进行原核表达；
9、所述的abpb编码序列为seq id no.1所示，aats编码序列为seq id no.2所示，spaa编码序列为seq id no.3所示。
10、一种猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗在制备猪链球菌和/或猪丹毒疫苗中的应用；
11、以上所述的应用，优选的，所述疫苗包括抗原和佐剂，所述佐剂为marco152、isa201vg、氢氧化铝胶中任意一种。
12、以上所述的应用，优选的，所述的猪链球菌为猪链球菌2型、和/或猪链球菌7型；
13、所述的猪丹毒为红斑丹毒丝菌1a型、和/或红斑丹毒丝菌2型。
14、与现有技术相比，本发明具有以下优点：
15、本发明首次发现aats蛋白具有免疫原性，免疫动物后，能够激发机体产生较强的免疫应答，产生高水平的体液免疫抗体，有效预防猪链球菌的感染。
16、本发明提供的猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗能同时有效的预防猪链球菌病和猪丹毒，只需一针免疫，减少猪只应激，降低成本。临床上达到“一针多防”的效果，且不存在散毒的隐患，安全可靠。
1. 一种猪链球菌、猪丹毒二联亚单位疫苗，所述的亚单位疫苗包括猪链球菌抗原蛋白abpb、aats和猪丹毒抗原蛋白spaa，所述的abpb蛋白为seq id no.4所示，aats蛋白为seqid no.5所示，spaa蛋白为seq id no.6所示。
2.权利要求1所述的亚单位疫苗的制备方法，包括将合成好的抗原蛋白abpb、aats和spaa的编码序列分别插入原核表达载体pet-28a后进行原核表达；
3.权利要求1所述的二联亚单位疫苗在制备猪链球菌和/或猪丹毒疫苗中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述疫苗包括抗原和佐剂，所述佐剂为marco152、isa201vg、氢氧化铝胶中任意一种。
5.根据权利要求3所述的应用，所述的猪链球菌为猪链球菌2型、和/或猪链球菌7型。
6.根据权利要求3所述的应用，所述的猪丹毒为红斑丹毒丝菌1a型、和/或红斑丹毒丝菌2型。
