本发明涉及药物分析，尤其涉及苏葶丸中化学成分含量测定方法及指纹图谱建立方法。
背景技术：
1、苏葶丸为经典名方，首载于《医宗金鉴》(清·吴谦)，全称苏葶定喘丸，由葶苈子和紫苏子组成，具有泻肺平喘的功效。该方收录于2022年公布的《古代经典名方目录(第二批儿科部分)》，从历代医籍记载可知临床效果较好。目前，对苏葶丸的研究多集中在临床应用与观察方面，对其质量控制的研究极少。虽然报道苏葶丸的研究并不多，但其作为广为流传的儿科经典名方，疗效确切，完善其质量控制方法，具有重要的价值。
2、苏葶丸由葶苈子和紫苏子配伍而成，成分复杂，单一活性成分的含量检测难以体现其整体质量特征，故采用常规的含量测定方法不能全面控制其质量。中药指纹图谱是目前控制中药产品质量主要手段之一，可更全面的反映中药产品的整体特征和产品质量。目前指纹图谱研究常用高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法等，其中高效液相色谱法方法重复性好、准确性高，便于推广与执行。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种苏葶丸中化学成分的含量测定方法和指纹图谱的建立方法以及相应的指纹图谱，通过采用化学成分含量及全方指纹图谱相结合的方法控制苏葶丸质量。
2、本发明的第一方面，提供一种苏葶丸中化学成分含量的测定方法，包括以下步骤：
3、z1、取苏葶丸粉末与醇溶剂混合，回流提取后得到待测溶液；
4、z2、制备对照品溶液：
5、以体积分数为50％-100％的甲醇为溶剂，分别制成1-100μg/ml的槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷和浓度为20-500μg/ml迷迭香酸的对照品溶液；
6、z3、采用高效液相色谱法，对步骤z1中所述待测溶液成分进行检测，具体的检测条件如下：
7、色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25-35℃；检测波长：槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷的含量测定波长为250-260nm，迷迭香酸的含量测定波长为320-330nm；流动相流速为0.8-1.0ml/min；进样量为1-10μl；流动相a：0.05-0.2％磷酸水溶液，流动相b：乙腈，梯度洗脱；
8、z4、根据所述对照品的进样浓度、所述对照品在色谱图中的峰面积以及苏葶丸中与对照品相对应的成分在色谱图中的峰面积，且基于步骤z3中的检测条件，以外标两点法计算苏葶丸中的两种有效成分槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷和迷迭香酸的含量。
9、优选的是，步骤z1中所述醇溶剂为体积分数为30％-100％的甲醇溶剂，所述苏葶丸粉末与醇溶剂的质量体积比为(0.4-0.7)g∶(20-50)ml，所述回流提取的时间为30-120min；
10、优选的是，步骤z4中所述槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷对照品的进样浓度为41.108μg/ml；所述迷迭香酸对照品的进样浓度为162.619μg/ml。
11、本发明的第二方面，提供一种苏葶丸指纹图谱建立方法，包括以下步骤：
12、(1)取苏葶丸粉末与醇溶剂混合，回流提取后得到供试品溶液；
13、(2)采用高效液相色谱法检测步骤(1)中所述供试品溶液，具体的检测条件如下：
14、色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25-35℃；检测波长：250-260nm；流动相流速为0.8-1.0ml/min；进样量为1-10μl；流动相a：0.05-0.2％磷酸水溶液，流动相b：乙腈，梯度洗脱；
15、(3)将所述苏葶丸的色谱图，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件分析，得到苏葶丸的指纹图谱。
16、优选的是，所述步骤(1)中的醇溶剂为体积分数为30％-100％的甲醇溶剂，所述苏葶丸粉末与醇溶剂的质量体积比为(0.4-0.7)g∶(20-50)ml，所述回流提取的时间为30-120min。
17、本发明提供的苏葶丸中化学成分的检测方法及指纹图谱的建立方法，其具体技术效果如下：
18、1.本发明提供的含量检测方法精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合现行版药典要求，检测结果准确可靠，可对苏葶丸中2种化学成分含量同时进行准确定量，对促进苏葶丸质量的检验、控制、评价以及该方的现代化具有重要意义，为后续该经典方的研究和新的应用奠定了基础。
19、2.应用本发明提供的流动相、洗脱条件、检测波长获得的指纹图谱背景干净，各峰分离效果好，基线平稳，精密度良好、重复性强、稳定性高，适于苏葶丸指纹图谱的建立。
20、3.本发明采用化学成分含量测定与指纹图谱相结合的方法对经典名方苏葶丸进行质量控制，为经典名方苏葶丸的质量控制标准提供依据。
21、下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
1.一种苏葶丸化学成分含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤z1中所述的醇溶剂为体积分数为30％-100％的甲醇，所述苏葶丸粉末与醇溶剂的质量体积比为(0.4-0.7)g∶(20-50)ml，所述回流提取的时间为30-120min。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述苏葶丸的制备方法包括：
4.根据权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，在步骤z4中，所述槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷对照品的进样浓度为1-100μg/ml；所述迷迭香酸对照品的进样浓度为20-500μg/ml。
5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，在步骤z4中，所述槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖-7-o-β-d-龙胆双糖苷对照品的进样浓度为41.108μg/ml；所述迷迭香酸对照品的进样浓度为162.619μg/ml。
6.一种苏葶丸指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的苏葶丸指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤z1中所述醇溶剂为体积分数为30％-100％的甲醇溶剂，所述苏葶丸粉末与醇溶剂的质量体积比为(0.4-0.7)g∶(20-50)ml，所述回流提取的时间为30-120min。
8.根据权利要求6所述的苏葶丸指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述苏葶丸的制备方法包括：
9.根据权利要求6-8中任一项的方法建立的苏葶丸指纹图谱，如图4或图5所示。
