本公开涉及炔雌醇检测，特别是涉及一种基于高效液相色谱检测包合物中炔雌醇含量的方法。
背景技术：
1、随着药物制剂技术的发展，环糊精作为一种常用的药物载体，因其独特的环状结构和包合能力，在药物传递系统中扮演着重要角色。环糊精能够与多种药物分子形成包合物，从而改善药物的溶解性、稳定性和生物利用度。炔雌醇作为一种重要的性激素类药物，因其广泛的临床应用和潜在的副作用，对炔雌醇及其包合物的准确检测具有重要意义。
2、然而，现有技术中缺乏能够同时检测环糊精-炔雌醇包合物中游离的炔雌醇和包合的炔雌醇含量的方法以及对环糊精-炔雌醇包合物中炔雌醇含量的定量分析方法。这限制了对药物制剂质量的全面评估和药物安全性的准确监控。
3、因此，开发一种能够同时定量检测环糊精-炔雌醇包合物中游离的炔雌醇和包合的炔雌醇含量的新技术，对于提高药物制剂的安全性、有效性和可控性具有重要的科学意义和应用价值。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利旨在提供一种新的检测方法，能够定量测定炔雌醇环糊精复合物中的游离炔雌醇和包合炔雌醇含量。
2、本公开的目的是通过以下技术方案实现的：
3、本公开提供一种基于高效液相色谱检测包合物中炔雌醇含量的方法，其中，所述包合物为环糊精-炔雌醇包合物，所述包合物中包含游离于所述包合物的炔雌醇，所述方法包括：
4、1)将待测环糊精-炔雌醇包合物样品溶于乙酸乙酯，过滤，得到滤液和滤渣；
5、2)将步骤1)所得滤液溶于乙腈，进高效液相色谱仪进行检测，将测得的信号值与标准曲线比对，从而确定所述样品中的炔雌醇含量，即为游离炔雌醇含量。
6、在一实施方案中，所述环糊精-炔雌醇包合物通过包括以下步骤的方法制备：
7、取炔雌醇的乙醇溶液添加至环糊精(例如β-环糊精)水溶液中，充分搅拌，分离并干燥得到所述环糊精-炔雌醇包合物。
8、在一些实施方案中，所述待测环糊精-炔雌醇包合物样品中，用于提取游离炔雌醇的乙酸乙酯体积与所述样品质量的比值大于5:196(v/mg)。
9、在一些实施方案中，所述待测环糊精-炔雌醇包合物样品中，用于提取游离炔雌醇的乙酸乙酯体积与所述样品质量的比值大于10:196(v/mg)。
10、在一些实施方案中，所述待测环糊精-炔雌醇包合物样品中，用于提取游离炔雌醇的乙酸乙酯体积与所述样品质量的比值为(10～30):196(v/mg)，更优选为(10～25):196(v/mg)，进一步可以为10:196(v/mg)、15:196(v/mg)、20:196(v/mg)或25:196(v/mg)。
11、在一些实施方案中，步骤1)所得滤液与乙腈的体积比为1:5-25；更优选为1:(10～20)，更优选为1:10。
12、在一些实施方案中，步骤1)中，过滤前还包括超声提取的步骤。
13、在一些实施方案中，所述超声提取的时间为大于10min，优选大于15min，更优选为15～30min。
14、在一些实施方案中，所述包合物中还包含包合于环糊精的炔雌醇，所述包合于环糊精的含量的测定方法包括：
15、3)将步骤1)所得滤渣溶于乙腈溶液，进高效液相色谱仪进行检测，将测得的信号值与标准曲线比对，从而确定所述样品中的炔雌醇含量，即为包合于环糊精的炔雌醇(或称包合炔雌醇)含量。乙腈帮助溶解环糊精-炔雌醇包合物，帮助提取包合物中包合炔雌醇的含量。
16、在一些实施方案中，步骤2)之前还包括对所述滤渣进行干燥处理的步骤。
17、在一些实施方案中，所述干燥处理的温度为85-95℃；优选为90℃。
18、在一些实施方案中，所述干燥处理的终点为滤渣质量不发生变化，以充分除去滤渣中的水分，减小检测误差。
19、在一些实施方案中，所用流动相为乙腈与水的混合溶液，优选为乙腈与水体积比1:1的混合溶液。
20、在一些实施方案中，所述流动相流速为1ml/min。
21、在一些实施方案中，高效液相色谱所用色谱柱为：以键合硅烷的硅胶填充剂而成的色谱柱。
22、在一些实施方案中，所述填充剂为端基封尾的丁基硅烷键合硅胶。
23、在一些实施方案中，所述色谱柱为反相色谱柱。
24、在一些实施方案中，所述基于高效液相色谱测定的检测条件为：柱温30℃。
25、在一些实施方案中，所述基于高效液相色谱测定的检测条件为：紫外-可见吸收检测器，检测波长220nm。
26、在一些实施方案中，所述基于高效液相色谱测定的进样量为30μl。
27、在一些实施方案中，步骤1)包括：
28、1)将待测环糊精-炔雌醇包合物样品和对照品贮备液加入乙酸乙酯，过滤，得到滤液和滤渣；
29、其中，所述对照品贮备液为炔雌醇乙酸乙酯溶液。
30、在一些实施方案中，对照品贮备液为0.8mg/ml的炔雌醇乙酸乙酯溶液。
31、在一些实施方案中，所述对照品贮备液的添加量为5～20ml，优选为5ml。
32、在一些实施方案中，所述标准曲线为炔雌醇和环糊精混合溶液中炔雌醇浓度对高效液相色谱检测信号值的曲线。
33、在一些实施方案中，所述炔雌醇和环糊精混合溶液为炔雌醇和环糊精在乙酸乙酯中的混合溶液。
34、在一些实施方案中，所述混合溶液中炔雌醇的浓度为0.02～4mg/ml。
35、在一些实施方案中，所述混合溶液中环糊精的浓度为16～20mg/ml。
36、在一些实施方案中，所述信号值为峰面积。
37、在一些实施方案中，所述环糊精为β-环糊精。
38、在一些具体实施方案中，所述方法包括以下步骤：
39、1)将待测环糊精-炔雌醇包合物样品和对照品贮备液加入乙酸乙酯，过滤，得到滤液和滤渣；
40、2)将步骤1)所得滤液溶于乙腈，进高效液相色谱仪进行检测，将测得的信号值与标准曲线比对，从而确定所述样品中的炔雌醇含量，即为游离炔雌醇含量；
41、3)将步骤1)所得滤渣溶于乙腈溶液，进高效液相色谱仪进行检测，将测得的信号值与标准曲线比对，从而确定所述样品中的炔雌醇含量，即为包合于环糊精的炔雌醇含量。
42、其中所述对照品贮备液为8mg/ml的炔雌醇溶液；
43、其中用于测定标准曲线的线性溶液浓度中炔雌醇含量为0.1％～20％(以质量含量计)，所述线性溶液优选通过包括以下步骤的方法制备：
44、称取199.8mgβ-环糊精，加入0.025ml所述对照品贮备液，用乙酸乙酯定容10ml，为炔雌醇含量20％的线性溶液；
45、称取199mgβ-环糊精，加入0.125ml所述对照品贮备液，用乙酸乙酯定容10ml，为炔雌醇含量20％的线性溶液；
46、称取198mgβ-环糊精，加入0.25ml所述对照品贮备液，用乙酸乙酯定容10ml，为炔雌醇含量20％的线性溶液；
47、称取196mgβ-环糊精，加入0.5ml所述对照品贮备液，用乙酸乙酯定容10ml，为炔雌醇含量20％的线性溶液；
48、称取190mgβ-环糊精，加入1.25ml所述对照品贮备液，用乙酸乙酯定容10ml，为炔雌醇含量20％的线性溶液；
49、称取180mgβ-环糊精，加入2.5ml所述对照品贮备液，用乙酸乙酯定容10ml，为炔雌醇含量20％的线性溶液；
50、称取160mgβ-环糊精，加入5ml所述对照品贮备液，用乙酸乙酯定容10ml，为炔雌醇含量20％的线性溶液。
51、有益效果：
52、1、本公开采用高效液相色谱法，使用乙酸乙酯提取游离炔雌醇，使用乙腈提取包合物中炔雌醇，可有效检出炔雌醇的含量，并且检测限低至0.01％；线性范围广，在0.01％～20％溶液浓度范围内呈线性相关；各浓度水平所测炔雌醇回收率均在90.0％～110.0％之间。
53、2、本公开的方法操作简便，不需要复杂的仪器设备、样品用量小、成本低廉、样品前处理简单，适用于工业应用。
1.基于高效液相色谱测定包合物中炔雌醇含量的方法，其中，所述包合物为环糊精-炔雌醇包合物，所述包合物中包含游离于所述包合物的炔雌醇，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述待测环糊精-炔雌醇包合物样品中，用于提取游离炔雌醇的乙酸乙酯体积与所述样品质量的比值大于5:196(v/mg)，优选大于10:196(v/mg)，更优选为(10～30):196(v/mg)，更优选为(10～25):196(v/mg)；
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤1)中，过滤前还包括超声提取的步骤；
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中，所述包合物中还包含包合于环糊精的炔雌醇，所述包合于环糊精的含量的测定方法包括：
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中，所用流动相为乙腈与水的混合溶液，优选为乙腈与水体积比1:1的混合溶液；
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中，高效液相色谱所用色谱柱为：以键合硅烷的硅胶填充剂而成的色谱柱；优选地，所述填充剂为端基封尾的丁基硅烷键合硅胶；
7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其中，步骤1)包括：
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其中，所述方法包括：
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其中，所述标准曲线为炔雌醇和环糊精混合溶液中炔雌醇浓度对高效液相色谱检测信号值的曲线；
10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其中，所述环糊精为β-环糊精。
