本发明涉及生物，具体涉及一种感受态金黄色葡萄球菌及其制备方法和应用。
背景技术：
1、细菌感受态是指细菌细胞在一定的生长阶段，通过特定的理化方法处理后，能够允许外源dna分子进入细胞内。这一过程允许科学家将特定的dna片段引入细菌中，进而研究这些dna片段的功能或利用细菌进行基因表达，对于基因工程和分子生物学研究非常重要。
2、当前未发现金葡菌在自然状态下存在能易于接收外源性遗传物质的感受态，也没有通过特定的培养和处理步骤可以制备出金葡菌感受态细胞。金葡菌质粒转导目前依赖电穿孔转导、噬菌体转导等方法。电穿孔法需要实验室配置电穿孔仪，噬菌体转导法依赖噬菌体对金葡菌亚型的特异性。这些方法不能同时具备高效、低廉、通用的特点，因此需要一种简单通用的金葡菌感受态诱导方法。
技术实现思路
1、针对上述现有技术的不足，本发明旨在提供一种感受态金黄色葡萄球菌及其制备方法和应用，以解决针对金葡菌感受态细胞制备过程中复杂、不便利的问题。
2、为了解决上述问题，本发明采用了如下的技术方案：
3、金葡菌的质粒转导效率低是由于较厚的金葡菌细胞壁构成的物理屏障阻碍了dna物质的穿透。临床使用的多种抗生素有抑制细胞壁合成的功能，在这里称为细胞壁靶向抗生素，如磷霉素、万古霉素，环丝氨酸，氨苄西林等。适量浓度的抗生素能抑制细胞壁合成，兼顾抑制细菌生长，但不会杀灭细菌。
4、第一方面，本发明提供一种感受态金黄色葡萄球菌的制备方法，将金黄色葡萄球菌进行培养至平台早期(od600＝0.6～0.8)，采用细胞壁靶向抗生素对金黄色葡萄球菌菌液进行处理，得到感受态金黄色葡萄球菌。
5、进一步，所述金黄色葡萄球菌进行培养包括：
6、将金黄色葡萄球菌在tsa琼脂固体平板上四象限划板，在37℃细菌培养箱中静置培养12-18小时，至第四象限单克隆菌落直径生长至3～5mm；
7、取单个克隆的金黄色葡萄球菌菌落接种至1-10mltsb液体培养基中(优选为5mltsb液体培养基)，在细菌摇床中37℃、100～200rpm培养至少8小时，使其到达至平台期，得金黄色葡萄球菌浑浊菌液；
8、取金黄色葡萄球菌浑浊菌液，1:50稀释至tsb蔗糖培养基中，置于细菌摇床37℃、150rpm培养4小时，至其od600测量值达到0.6～0.8，得金黄色葡萄球菌菌液。
9、进一步，所述金黄色葡萄球菌为rn4220或usa300或其他金黄色葡萄球菌的临床菌株。
10、进一步，所述采用细胞壁靶向抗生素对金黄色葡萄球菌菌液进行处理包括：
11、将所述金黄色葡萄球菌菌液加入等体积的tsb蔗糖培养基中，加入细胞壁靶向抗生素至细胞壁靶向抗生素的终浓度为10～200μg/ml，在细菌摇床37℃、150rpm培养2小时，得感受态金黄色葡萄球菌菌液。
12、进一步，还包括将所述感受态金黄色葡萄球菌菌液进行离心，去除上清，再使用等体积的缓冲液1重悬，重复一次或多次；再使用缓冲液2重悬菌液，将菌液浓缩至原体积的1/20，得到感受态金黄色葡萄球菌。
13、进一步，所述细胞壁靶向抗生素包括磷霉素、万古霉素、环丝氨酸和/或氨苄西林。
14、进一步，所述tsa琼脂固体培养基包括胰酪大豆胨液体培养基30克和营养琼脂15克，用去离子水定容至1.0l后高压灭菌后使用。
15、进一步，所述tsb液体培养基包括胰酪大豆胨液体培养基30克，用去离子水定容至1.0l后高压灭菌后使用；
16、所述tsb蔗糖培养基包括胰酪大豆胨液体培养基30克和蔗糖171克，用去离子水定容至1.0l后高压灭菌后使用。
17、进一步，所述缓冲液1为蔗糖171克，用去离子水定容至1.0l后灭菌，加入1ml的1mol/ml的hepes使终浓度达到1mm；
18、缓冲液2为蔗糖171克，用去离子水定容至1.0l后灭菌，加入1ml的1mol/ml的hepes使终浓度达到1mm后再加入100ml的甘油。
19、第二方面，本发明提供所述的感受态金黄色葡萄球菌的制备方法所制备的感受态金黄色葡萄球菌。
20、第三方面，本发明提供所述的感受态金黄色葡萄球菌在质粒转化和电转化中应用。
21、本发明的有益效果在于：本发明使用细胞壁靶向抗生素诱导金黄色葡萄球菌进入感受态形式，使其处于高效接受质粒的状态，本制备方法能降低金葡菌质粒转染的试剂成本、设备成本、时间成本，便于金黄色葡萄球菌感受态细胞的制备，为基因工程和分子生物学研究提供快速的感受态细胞制备。
1.一种感受态金黄色葡萄球菌的制备方法，其特征在于，将金黄色葡萄球菌进行培养，采用细胞壁靶向抗生素对金黄色葡萄球菌菌液进行处理，得到感受态金黄色葡萄球菌。
2.根据权利要求1所述的感受态金黄色葡萄球菌的制备方法，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌进行培养包括：
3.根据权利要求2所述的感受态金黄色葡萄球菌的制备方法，其特征在于，所述采用细胞壁靶向抗生素对金黄色葡萄球菌菌液进行处理包括：
4.根据权利要求3所述的感受态金黄色葡萄球菌的制备方法，其特征在于，还包括将所述感受态金黄色葡萄球菌菌液进行离心，去除上清，再使用等体积的缓冲液1重悬，重复一次或多次；再使用缓冲液2重悬菌液，将菌液浓缩至原体积的1/20，得到感受态金黄色葡萄球菌。
5.根据权利要求4所述的感受态金黄色葡萄球菌的制备方法，其特征在于，所述细胞壁靶向抗生素包括磷霉素、万古霉素、环丝氨酸和/或氨苄西林。
6.根据权利要求4所述的感受态金黄色葡萄球菌的制备方法，其特征在于，所述tsa琼脂固体培养基包括胰酪大豆胨液体培养基30克和营养琼脂15克，用去离子水定容至1.0l后高压灭菌后使用。
7.根据权利要求4所述的感受态金黄色葡萄球菌的制备方法，其特征在于，所述tsb液体培养基包括胰酪大豆胨液体培养基30克，用去离子水定容至1.0l后高压灭菌后使用；
8.根据权利要求4所述的感受态金黄色葡萄球菌的制备方法，其特征在于，所述缓冲液1为蔗糖171克，用去离子水定容至1.0l后灭菌，加入1ml的1mol/ml的hepes使终浓度达到1mm；
9.权利要求1-8任一所述的感受态金黄色葡萄球菌的制备方法所制备的感受态金黄色葡萄球菌。
10.权利要求9所述的感受态金黄色葡萄球菌在质粒转化和电转化中应用。
