本申请属于生物，具体涉及一种抗c-met抗体及其制备与应用。
背景技术：
1、目前，单克隆抗体开发技术主要有杂交瘤技术、噬菌体展示技术和b细胞技术等。传统的杂交瘤技术依赖于骨髓瘤细胞，而兔单克隆抗体制备的兔骨髓瘤细胞受到专利技术限制，目前只有拥有该项专利技术公司使用该技术制备兔单克隆抗体。噬菌体展示抗体库采用大肠杆菌作为表达宿主，采用单链抗体(scfv)、单域抗体(vhh)或fab抗体等非天然抗体分子形式，抗体的结构和功能远不如哺乳动物细胞表达的抗体产品。此外，噬菌体展示抗体库筛选的抗体在分子转换成igg之后，即使采用哺乳动物细胞表达生产，也会出现部分克隆活性降低和丢失的现象。采用b细胞技术表达天然的抗体基因，表达的抗体具有高特异性和高亲和力。
2、细胞间质上皮转换因子(cellular-mesenchymal epithelial transitionfactor，c-met)，为受体酪氨酸激酶家族成员，作为肝细胞生长因子(hepatocyte growthfactor，hgf)的受体，是一种多功能跨膜酪氨酸激酶。c-met在一般组织中呈低表达或不表达，但在肺癌、肝癌、胰腺癌以及甲状腺癌等组织中均可见c-met的过表达。免疫组织化学(ihc)可用于检测c-met蛋白的过表达情况，通过检测c-met蛋白的表达水平和突变情况，可以帮助医生更好地诊断和预测某些疾病的发展和预后。c-met基因突变正是在许多肿瘤药物耐药的关键所在，作为细胞膜表面的靶点，c-met为抗体类药物开发提供了机会。
3、因此，开发一种亲和力高、特异性强的抗c-met抗体，对特异性地识别和检测肿瘤组织上c-met蛋白的表达，获得准确的评估和检测结果具有非常重要的意义。
技术实现思路
1、1.发明目的
2、本申请目的是提供一种抗c-met抗体及其制备与应用，该抗c-met抗体是以c-met蛋白的胞内段多肽为免疫原，免疫新西兰大白兔并经细胞分选等步骤获得，能够特异性识别c-met蛋白。经过多种不同组织的免疫组织化学(ihc)检测发现，该抗c-met抗体可以很好的检测到细胞上c-met蛋白的表达，可应用于免疫组织化学、间接elisa、免疫荧光、流式细胞术等技术检测与筛查c-met蛋白的表达。
3、2.技术方案
4、为了达到上述目的，本申请所采用的技术方案如下：
5、第一方面，本申请提供了一种抗c-met抗体，该抗c-met抗体能特异性与c-met蛋白结合，包括重链和轻链。
6、具体地，上述重链包括seq id no.4所示的氨基酸序列。
7、具体地，上述轻链包括seq id no.5所示的氨基酸序列。
8、第二方面，本申请还提供了一种核酸，该核酸编码上述抗c-met抗体。
9、具体地，上述编码抗c-met抗体的核酸，包括：
10、如seq id no.2所示的核苷酸序列，用于编码上述抗c-met抗体的包括seq idno.4所示的氨基酸序列的重链；
11、如seq id no.3所示的核苷酸序列，用于编码上述抗c-met抗体的包括seq idno.5所示的氨基酸序列的轻链。
12、第三方面，本申请还提供了一种重组表达载体，该重组表达载体含有上述编码抗c-met抗体的核酸，可以表达抗c-met抗体。
13、具体地，上述重组表达载体包括：含有上述编码抗c-met抗体的核酸，可以表达抗c-met重组单克隆抗体的pcdna3.1质粒。
14、第四方面，本申请还提供了一种重组表达细胞，该重组表达细胞包括上述重组表达载体或上述编码抗c-met抗体的核酸，可以表达抗c-met抗体。
15、具体地，上述重组表达细胞包括：hek293细胞系。
16、第五方面，本申请还提供了上述核酸、重组表达载体、重组表达细胞在制备抗c-met抗体中的应用。
17、第六方面，本申请还提供了一种上述抗c-met抗体的制备方法，包括：采用上述的重组表达载体转染到细胞获得重组表达细胞；培养重组表达细胞；收集上清液并纯化，得到抗c-met抗体。
18、第七方面，本申请还提供了上述抗c-met抗体、核酸、重组表达载体、重组表达细胞或抗c-met抗体的制备方法在检测c-met蛋白，或制备检测c-met蛋白设备中的应用。
19、具体地，上述检测c-met蛋白包括免疫组织化学、elisa、免疫荧光、流式细胞术检测c-met蛋白中的任意一种或多种。
20、具体地，上述检测c-met蛋白设备包括试剂盒、抗体偶联、抗体芯片等中的任意一种或多种。
21、第八方面，本申请还提供了一种检测c-met蛋白的试剂盒，该试剂盒包括上述抗c-met抗体，以抗c-met抗体为一抗。
22、具体地，上述试剂盒为流式细胞检测试剂盒，包括上述抗c-met抗体，还包括流式细胞检测试剂。
23、进一步地，上述流式细胞检测试剂盒还包括：荧光标记二抗、pbs、牛血清白蛋白、human igg、7-aad等试剂。
24、具体地，上述试剂盒为免疫组织化学检测试剂盒包括：包括上述抗c-met抗体，还包括免疫组织化学检测试剂。
25、进一步地，上述免疫组织化学检测试剂盒包括：hrp酶标二抗、edta修复液、过氧化氢酶封闭液、dab浓缩液、dab缓冲液、苏木素、返蓝液等。
26、第九方面，本申请还提供了上述一种检测c-met蛋白的试剂盒在检测c-met蛋白中的应用。
27、具体地，上述流式细胞检测试剂盒应用包括：细胞复苏、fc受体阻断、一抗孵育、二抗孵育、7-aad活性染色、上机收集数据等。
28、具体地，上述免疫组织化学检测试剂盒应用包括：脱蜡、抗原修复、内源性过氧化物酶失活、封闭、一抗孵育、二抗孵育、dab显色、复染、脱水、封片和镜检等。
29、3.有益效果
30、本申请与现有技术相比，其有益效果在于：
31、(1)本申请提供的一种抗c-met抗体及其制备与应用，该抗c-met抗体是以c-met蛋白的胞内段多肽为免疫原，免疫新西兰大白兔并经细胞分选等步骤获得，包括如seq idno.4所示的氨基酸序列的重链和seq id no.5所示的氨基酸序列的轻链，能够特异性地识别和检测肺腺癌、甲状腺癌、肝癌、胰腺癌等肿瘤或癌症组织上c-met蛋白的表达，有利于获得准确的评估和检测结果。
32、(2)本申请提供的一种抗c-met抗体及其制备与应用，与传统杂交瘤方法相比，周期更短，不受骨髓瘤细胞限制；与噬菌体展示技术相比，天然抗体具有更高的亲和力。
1.一种抗c-met抗体，其特征在于，所述抗c-met抗体包括重链和轻链，重链包括seq idno.4所示的氨基酸序列，轻链包括seq id no.5所示的氨基酸序列。
2.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1所述的抗c-met抗体的重链和/或轻链。
3.根据权利要求2所述的一种核酸，其特征在于，所述的核酸包括seq id no.2和/或seq id no.3所示的核苷酸序列。
4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求2或3所述的核酸。
5.一种重组表达细胞，其特征在于，所述重组表达细胞包括权利要求4所述的重组表达载体，或权利要求2或3所述的核酸。
6.权利要求2或3所述的核酸、或权利要求4所述的重组表达载体、或权利要求5所述的重组表达细胞在制备抗c-met抗体中的应用。
7.权利要求1所述的抗c-met抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
8.权利要求1所述的抗c-met抗体、或权利要求2或3所述的核酸、或权利要求4所述的重组表达载体、或权利要求5所述的重组表达细胞、或权利要求7所述的抗c-met抗体的制备方法在检测c-met蛋白，或制备检测c-met蛋白设备中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的检测c-met蛋白包括免疫组织化学、elisa、免疫荧光、流式细胞术中的任意一种或多种。
10.一种检测c-met蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的抗c-met抗体。
