本公开涉及一种抗il-33抗体或其抗原结合片段及其用途，具体涉及具有超强中和活性的抗il-33人源化单克隆抗体，其在治疗慢性炎症和自身免疫性疾病中有着潜在意义。
背景技术：
1、白介素33(interleukin 33，il-33)，又名il-1f11，属于il-1家族的一个成员，由th2细胞、肥大细胞和先天性的淋巴细胞产生。人和小鼠il-33cdna分别编码270和266个氨基酸的多肽，相应全长蛋白质的分子量分别为30kda和29.9kda。il-33可引起并调控多种炎症反应，可能在慢性炎症和自身免疫性疾病中发挥作用。il-33主要参与th2细胞介导的免疫应答、调节肥大细胞的功能，还作为一种细胞内的核因子，能调节基因转录的特性。
2、il-33是st2的特异性配体，st2基因在几种细胞如成纤维细胞和肥大细胞中表达，另外也在鼠和人的th2细胞中特异性表达，il-33信号转导依赖于其受体st2的表达，il-33与st2结合，通过下游信号分子髓样分化因子88(myd88)，il-1相关蛋白激酶(irak)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(traf6)，使nfκb和mapk激活，从而调节基因的转录，导致th2细胞因子il-4、il-5和il-13的产生和随后的生物学功能发挥。il-33是一种体内外th2细胞的有力的趋化剂，在体外，重组il-33能增加th2细胞的比例、以il-33浓度依赖的方式诱导th2细胞形态学上的改变并使其迁移进入胶原基质；在体内则吸引过继转移的st2(+)th2细胞到il-33注射的部位。因此，il-33通过主动募集th2细胞到炎症位点，而使il-33在维持慢性炎症中起关键的作用。
3、st2选择性地在th2细胞上表达，而在th1上不表达。st2与炎症反应强烈相关，th17细胞介导的自身免疫性疾病如类风湿性关节炎患者的关节液中可溶性st2表达增加，血清、关节液或炎症部位的il-33mrna及蛋白质水平也增加。系统性红斑狼疮患者血清中可溶性st2水平增高。因此，阻断il-33及其受体信号通路有可能为治疗关节炎和系统性红斑狼疮提供新的治疗策略。研究显示，给予il-33后可刺激il-5的产生，抑制th1细胞活性进而改善载脂蛋白e缺乏的小鼠发生动脉粥样硬化，可见，il-33对疾病发展也起到保护性作用。在绿脓杆菌性角膜炎的小鼠模型中，st2通过下调th1型细胞因子，上调th2型细胞因子尤其是il-10的表达，可减轻角膜感染和炎症反应。il-33还可以通过角膜中巨噬细胞极化产物的抗炎症介质来减轻绿脓杆菌性角膜炎的炎症反应。
4、il-33能调节肥大细胞的发育与功能。在体外，il-33促进人cd34+肥大细胞前体的成熟和诱导肥大细胞产生前炎症细胞因子和趋化因子。il-33能诱导小鼠骨髓衍生培养肥大细胞(bmcmc)以非ige方式产生il-13和il-6，il-33以myd88依赖的方式促进这些细胞因子的产生，但il-33不诱导和增强这些肥大细胞脱颗粒，在无ige的条件下，高浓度的il-33能延长bmcmc的生存。il-33能以剂量和时间依赖的方式刺激小鼠肥大细胞株p815细胞和bmcm分泌il-6，增加il-6和il-1b mrna的表达，il-33亦诱导bmcmc产生il-1β，肿瘤坏死因子(tnfα)，单核细胞趋化蛋白(mcp)-1和前列素d(pgd)2。il-33诱导bmcmc释放前炎症细胞因子，显示il-33具有同il-1和il-18相似的前炎症作用，另外，il-33还具有前面描述的il-1和il-18不同的th2型获得性免疫反应活性。il-33能促进人脐带血来源肥大细胞(hucbmc)的生存及粘附到纤连蛋白、诱导hucbmc中il-8和il-13的产生。因此，il-33在变态反应和其它疾病中可能增强肥大细胞的功能。哮喘患者血清和组织中st2和il-33mrna及蛋白质量表达增加。在卵白蛋白诱导的小鼠气道炎症哮喘模型的血清或肺组织中，可溶性st2和il-33mrna表达明显增加。在2,4-二硝基氟苯诱导的小鼠接触性皮炎的皮肤中，st2 mrna表达增加。此外，il-33还在过敏性结膜炎、鼻炎、过敏性休克和特应性皮炎中表达显著增加。这些结果表明il-33及其受体与上述过敏性疾病的发病机制有密切关系。
5、il-33还有其他的一些生物学功能。同il-1a等相似，il-33是一种多功能蛋白质，它不仅是一种前炎症细胞因子，它也作为一种内皮细胞衍生的染色质相关的核因子，具有转录抑制的特性。il-33可明显地抑制血管紧缩素-ii和苯肾上腺素诱导的心肌细胞肥大和纤维化，它抑制血管紧缩素-ii和苯肾上腺素诱导的nfκb抑制剂的磷酸化和nfκb核结合活性，而可溶性st2则可封闭il-33的这种抑制作用。il-33可通过促进内皮细胞的增殖、迁移和分化，促进血管发生，降低细胞间粘连蛋白相互作用提高血管渗透性。
6、综上所述，il-33是具有多种效应的促炎症因子，在调节固有免疫应答特别是肥大细胞的功能方面发挥重要作用，作为一种前炎症细胞因子可引起组织免疫病理损伤。il-33可用于自身免疫性疾病、过敏性障碍、心血管疾病，哮喘，胃肠道和肺部疾病的治疗。
技术实现思路
1、一方面，本公开提供了一种白介素33(il-33)的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区的cdr组合物为：由氨基酸序列seqid no:1构成的重链cdr1，由氨基酸序列seq id no:15构成的重链cdr2，由氨基酸序列seqid no:3构成的重链cdr3，以及由氨基酸序列seq id no:6构成的轻链cdr1，由氨基酸序列seq id no:7构成的轻链cdr2，由氨基酸序列seq id no:8构成的轻链cdr3。
2、在一些实施方式中，前述的抗体或其抗原结合片段具有下列的重链可变区和轻链可变区的组合：
3、所述重链可变区包含seq id no.16所示氨基酸序列或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％以上同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含seqid no.20所示氨基酸序列或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％以上同一性的氨基酸序列。
4、在一些实施方式中，前述的抗体是igg1、igg2、igg3或igg4型抗体。
5、在一些优选的实施方式中，所述重链包含seq id no.18所示氨基酸序列或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％以上同一性的氨基酸序列；
6、在一些优选的实施方式中，所述轻链包含seq id no.22所示氨基酸序列或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％以上同一性的氨基酸序列。
7、另一方面，本公开提供了编码前述的抗体或其抗原结合片段的核酸。
8、在一些优选的实施方式中，前述核酸具有seq id no.17或其任何变体的抗体重链可变区编码核苷酸序列，和seq id no.21或其任何变体的抗体轻链可变区编码核苷酸序列。其中，所述任何变体优选与seq id no.17和/或seq id no.21具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％以上同一性的核酸序列。
9、在一些优选的实施方式中，前述核酸具有seq id no.19或其任何变体的抗体重链编码核苷酸序列，和seq id no.23或其任何变体的抗体轻链编码核苷酸序列。其中，所述任何变体优选与seq id no.19和/或seq id no.23具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％以上同一性的核酸序列。
10、另一方面，本公开提供了前述核酸的载体。
11、另一方面，本公开提供了前述核酸载体的宿主细胞。
12、另一方面，本公开提供了一种药物组合物或药物组合，其包含前述的抗体或其抗原结合片段、核酸、载体和/或细胞。
13、在一些实施方式中，所述组合物或药物组合还包括第二治疗剂。
14、在一些优选的实施方式中，所述第二治疗剂选自β-2肾上腺素受体激动剂(saba)、抗胆碱能药、肾上腺素能激动剂、糖皮质激素、长效β-2肾上腺素受体激动剂(laba)、白三烯拮抗剂和肥大细胞稳定剂。
15、另一方面，本公开提供了一种生成前述的抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括培养前述的核酸或表达载体的宿主细胞。
16、另一方面，本公开提供了一种前述的抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、宿主细胞或药物组合物或药物组合用于制备检测、治疗、预防和/或减轻自身免疫性疾病、过敏性障碍、心血管疾病，哮喘，胃肠道和肺部疾病的药物或试剂盒中的用途。
17、在一些优选的实施方式中，所述自身免疫性疾病是类风湿性关节炎。
18、本公开提供了具有超强中和活性的抗il-33人源化单克隆抗体，本发明公开的人源化抗体在细胞水平上对il-33激活的nkκb信号通路的阻断效果较强，同时能够较强抑制il-33诱导的d10.g4.1细胞增殖，在治疗慢性炎症和自身免疫性疾病中有着潜在意义。
1.一种白介素33(il-33)的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区的cdr组合为：由氨基酸序列seq id no:1构成的重链cdr1，由氨基酸序列seq id no:15构成的重链cdr2，由氨基酸序列seq id no:3构成的重链cdr3，以及由氨基酸序列seq id no:6构成的轻链cdr1，由氨基酸序列seq id no:7构成的轻链cdr2，由氨基酸序列seq id no:8构成的轻链cdr3。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其具有下列的重链可变区和轻链可变区的组合：
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体是igg1、igg2、igg3或igg4型抗体；
4.编码根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的核酸；
5.包含权利要求4所述核酸的载体。
6.包含权利要求4所述的核酸或权利要求5所述的载体的宿主细胞。
7.一种药物组合物或药物组合，其包含权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求4所述的核酸、权利要求5所述的载体和/或权利要求6所述的细胞；
8.一种生成权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括培养包含编码权利要求4所述的核酸或权利要求5所述的表达载体的权利要求6所述的宿主细胞。
9.权利要求1-3中任一项的所述抗体或其抗原结合片段、权利要求4所述的核酸、权利要求5所述的载体、权利要求6所述的宿主细胞或权利要求7所述的药物组合物或药物组合用于制备检测、治疗、预防和/或减轻自身免疫性疾病、过敏性障碍、心血管疾病，哮喘，胃肠道和肺部疾病的药物或试剂盒中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其中，所述自身免疫性疾病是类风湿性关节炎。
