本发明属于昆虫饲养，具体涉及一种评估蚊科幼虫取食行为的方法及其应用。
背景技术：
1、在蚊科昆虫中，雌性的伊蚊、按蚊和库蚊属昆虫在叮咬人类的过程中可以传播登革热、疟疾、黄热病、丝虫病、日本脑炎等疾病，严重危害人类的健康。蚊科昆虫在幼虫阶段，通常生活在水域中，活动范围较小，通过取食有机碎屑以及浮游生物完成生长发育。而成蚊善于飞行，活动范围较大。因此，蚊科幼虫阶段的害虫综合防控与治理是防蚊抗病的有效途经。
2、抑制蚊科幼虫的取食行为可以有效阻止幼虫完成正常的生长发育过程，筛选活性化合物，测定其对蚊科生物取食量的影响对于防蚊抗病具有重要的意义。然而目前关于蚊科幼虫取食量的测定方法研究较少，虽然现有技术中存在多种检测果蝇等昆虫采食量的方法，例如毛细血管法和染料法，但是蚊科幼虫的生活环境与果蝇等完全不同，蚊科幼虫阶段的生命活动限制在水中，常规检测方法不能适用于蚊科幼虫的取食水平的准确评估。因此，亟需提供一种准确评估蚊科幼虫取食行为的方法。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种评估蚊科幼虫取食行为的方法，能够精确评估蚊科幼虫的取食水平。
2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
3、本发明提供了一种苯胺蓝染色的酵母作为饲料在评估蚊科幼虫取食行为中的应用。
4、优选的，所述苯胺蓝染色的酵母的制备方法为用苯胺蓝溶液对酵母进行染色8～14h。
5、优选的，所述苯胺蓝溶液的浓度为1～10mg/ml；
6、所述酵母的染色浓度为0.8～1mg/ml。
7、本发明提供了一种评估蚊科幼虫取食行为的方法，包括以下步骤：
8、将蚊科幼虫分为实验组、校准组和空白组：
9、实验组以所述应用中苯胺蓝染色的酵母作为饲料饲喂蚊科幼虫，采用分光光度法测定饲喂后的蚊科幼虫体内苯胺蓝的吸光光度值m1；
10、校准组对蚊科幼虫饥饿处理后，以所述应用中苯胺蓝染色的酵母作为饲料饲喂蚊科幼虫，采用实验组中分光光度法测定饲喂后的蚊科幼虫体内吸光光度值m；
11、空白组对蚊科幼虫饥饿处理后，以未染色的酵母作为饲料饲喂蚊科幼虫，采用实验组中分光光度法测定饲喂后的蚊科幼虫体内吸光光度值m0；
12、将所述m1、m和m0代入公式i中计算蚊科幼虫的取食指数：
13、取食指数＝(m1-m0)/(m-m0)公式i
14、所述取食指数与蚊科幼虫的取食水平呈正比，取食指数越高，表明蚊科幼虫的取食水平越高。
15、优选的，所述饲喂的时间为10～20min。
16、优选的，所述饲料的添加量≥0.04mg/只。
17、优选的，所述饥饿处理的时间为4～8h。
18、优选的，所述蚊科幼虫的龄期包括以下任意一种：二龄、三龄和四龄。
19、本发明提供了一种所述方法在筛选或评估调控蚊科幼虫取食行为的药物中的应用。
20、本发明提供了一种所述方法在筛选或评估抑制蚊科幼虫生长发育的药物中的应用。
21、优选的，所述药物包括避蚊胺。
22、有益效果：
23、本发明提供了一种苯胺蓝染色的酵母作为饲料在评估蚊科幼虫取食行为中的应用。本发明用苯胺蓝对酵母细胞染色，用苯胺蓝染色的酵母饲喂蚊科幼虫后，苯胺蓝的含量会随着进食量的增加不断提高，根据蚊科幼虫体内苯胺蓝的含量可以精确反映蚊科幼虫的取食水平。本发明实施例中分别用苯胺蓝染色的酵母和荧光染色的酵母饲喂蚊科幼虫，检测蚊科幼虫体内吸光度值，结果表明，苯胺蓝染色组可以检测到蚊科幼虫体内苯胺蓝的含量，并且随着蚊科幼虫取食量的增加而升高，而荧光染色组蚊科幼虫的本底荧光会干扰标记酵母的荧光，导致检测荧光强度不能准确反映蚊科幼虫的取食水平。因此，以苯胺蓝染色的酵母作为饲料有利于精确反映蚊科幼虫的取食行为及取食量。
24、本发明提供了一种评估蚊科幼虫取食行为的方法，采用本发明方法计算取食指数可准确评估蚊科幼虫的取食行为。本发明取食指数计算公式中引入空白组和校准组数据可以避免蚊科幼虫自身和不同批次实验操作对于检测结果的干扰，更加准确反映蚊科幼虫的取食水平。采用本发明方法对饥饿处理的蚊科幼虫和非饥饿处理的蚊科幼虫的取食行为进行了评估，结果表明未饥饿组蚊科幼虫的取食指数显著低于饥饿处理组。采用本发明方法对二龄、三龄和四龄的蚊科幼虫的取食行为进行了评估，结果表明，蚊科幼虫从二龄到四龄取食量显著增加，可见本发明评估方法可以准确反映蚊科幼虫的取食行为。
25、本发明提供了一种所述方法在筛选或评估调控蚊科取食行为的药物中的应用。
26、本发明还提供了一种所述方法在筛选或评估抑制蚊科幼虫生长发育的药物中的应用。成蚊在幼虫时期摄入食物不足将很大程度影响成虫的正常羽化和求偶交配，难以完成正常的生长发育。因此，所述方法可以用于筛选或评估通过调控蚊科取食行为进而抑制蚊科幼虫生长发育的药物。采用本发明方法评估避蚊胺(deet)对于蚊科幼虫取食行为的影响，结果表明，在食物和/或环境中添加deet后，蚊科幼虫的取食水平显著降低。可见，deet是一种能够有效降低蚊科幼虫取食水平的药物，本发明方法对于研究调控蚊科幼虫取食行为和生长发育的药物具有重要的意义。
1.一种苯胺蓝染色的酵母作为饲料在评估蚊科幼虫取食行为中的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述苯胺蓝染色的酵母的制备方法为用苯胺蓝溶液对酵母进行染色8～14h。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述苯胺蓝溶液的浓度为1～10mg/ml；
4.一种评估蚊科幼虫取食行为的方法，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述饲喂的时间为10～20min。
6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述饲料的添加量≥0.04mg/只。
7.根据权利要求4～6任意一项所述方法，其特征在于，所述饥饿处理的时间为4～8h；
8.权利要求4～7任意一项所述方法在筛选或评估调控蚊科幼虫取食行为的药物中的应用。
9.权利要求4～7任意一项所述方法在筛选或评估抑制蚊科幼虫生长发育的药物中的应用。
10.根据权利要求8或9所述应用，其特征在于，所述药物包括避蚊胺。
