本发明涉及植物育种,尤其涉及一种与白菜毛刺性状相关的snp位点及其应用。
背景技术:
1、大白菜(brassica rapa ssp. pekinensis l)是现有主要的蔬菜作物之一,毛刺是大白菜组织表皮上的显著性状。大白菜的毛刺主要分布在叶片正表面、叶柄和叶片背面的叶脉部分。大白菜的毛刺属于非腺毛类型,目前有较多报道发现非腺毛刺与食草昆虫抗性存在关联,并且与毛刺形成相关的基因会参与到下游吲哚类葡萄糖醇(igs)的合成从而提升白菜对病害的耐受性。
2、表皮毛由植株表皮细胞发育分化而来,是一种特殊的结构,在很多植株的叶、茎、果实和其他地方存在着毛刺。毛刺在叶片上密集的生长可以减少叶片上机械损伤、减少叶片水分的损失和抵御昆虫的侵害,同时毛刺生成的代谢途径过程中参与了植株的发育和植株抵抗病害过程中的代谢物生成。近年来育种学家对白菜毛刺基因进行遗传性状、基因定位及相关基因的表达进行了研究,探索毛刺表达模式及决定基因。
3、与白菜毛刺相关基因调控过程相对复杂,开发大白菜毛刺相关基因的分子标记对研究白菜毛刺基因和毛刺性状具有一定意义,并且开发得到的分子标记也能够用于分子标记辅助育种。
技术实现思路
1、为了解决现有技术存在的问题,本发明提供一种与白菜毛刺性状相关的snp位点及其应用。通过对该snp位点的多态性进行检测可以实现对待测白菜毛刺性状的高效鉴定。
2、第一方面,本发明提供一种snp位点,所述snp位点基于基因组版本brara chiifu3.0,位于a06染色体第24918527位,多态性为t/c。
3、进一步地,所述snp位点位于核酸第30位,多态性为t/c,所述核酸包括如seq idno.1或seq id no.2所示的核苷酸序列。
4、具体核苷酸序列如下:
5、cttatggtatactctctcccaaatccagatggtctttaatagctaaaagggtacctggaaggacagataaccaagtcaagaatcactggaacactcatctcag(seq id no.1)。
6、cttatggtatactctctcccaaatccagacggtctttaatagctaaaagggtacctggaaggacagataaccaagtcaagaatcactggaacactcatctcag(seq id no.2)。
7、第二方面,本发明提供一种引物对,包括:
8、正向引物:5’- cttatggtatactctctcccaaatccagc-3’;
9、反向引物:5’- ctgagatgagtgttccagtgattcttg-3’。
10、第三方面,本发明提供一种试剂盒,所述试剂盒包括所述snp位点或所述引物对。
11、进一步地,所述试剂盒还包括:pcr反应缓冲液、dna聚合酶、dntp和ddh2o。
12、第四方面,本发明提供所述snp位点,或所述引物对,或所述试剂盒在鉴定白菜毛刺性状中的应用。
13、本发明进一步提供所述snp位点,或所述引物对,或所述试剂盒在如下任意一项中的应用:
14、i)白菜的分子标记辅助育种;
15、ii)培育带毛刺白菜品种,或培育无毛刺白菜品种;
16、iii)检测白菜的毛刺相关基因。
17、进一步地,所述白菜包括大白菜、小白菜、乌塌菜、青梗菜或菜心中的一种或多种。
18、第五方面,本发明提供一种鉴定白菜毛刺性状的方法,包括:
19、检测待测白菜所述snp位点的多态性;根据检测结果判断所述待测白菜的毛刺性状。
20、进一步地,包括:
21、获取所述待测白菜的基因组dna,通过所述的引物对进行pcr扩增;
22、将pcr扩增产物酶切后进行检测,根据酶切产物的检测结果判断所述待测白菜的毛刺性状。
23、进一步地,若所述酶切产物只有103bp的扩增产物,则所述待测白菜的毛刺性状为无毛刺;若所述酶切产物只包括74bp的扩增产物,或包括103bp和74bp的扩增产物,则所述待测白菜的毛刺性状为有毛刺。
24、进一步地,所述pcr扩增的反应程序为:95~97℃、3~5min;95~97℃、15~30s,64~68℃、15~30s,72~74℃、20~45s,35~40个循环;72~74℃、5~10min。
25、进一步地,以10μl体系计,所述pcr扩增的反应体系包括:2×rapid taq mastermix 5μl,正向引物(10μm) 0.3μl,反向引物(10 μm) 0.3μl,gdna 1μl,ddh2o:3.4μl。
26、进一步地,所述酶切采用pvull内切酶酶切。
27、进一步地,可以提取待测白菜的整体或植株的一部分的基因组dna,例如叶片、茎,本发明优选使用待测植株叶片。
28、本发明具备如下有益效果:
29、本发明研究得到一种与白菜的毛刺性状有关的snp位点,并且针对该snp位点开发了dcaps分子标记,以及相应的检测白菜毛刺性状的方法。本发明提供的方法可以有效区分鉴定有毛刺白菜和无毛刺白菜,并且具备较高的准确性。本发明提供的dcaps分子标记以及相应的检测方法可以用于培育不同毛刺性状的白菜品种,用于白菜的分子标记辅助选育,这在白菜育种领域具有重要的应用价值。
1.一种snp位点,其特征在于,所述snp位点基于基因组版本brara chiifu 3.0,位于a06染色体第24918527位,多态性为t/c。
2.一种snp位点,其特征在于,所述snp位点位于核酸第30位,多态性为t/c,所述核酸包括如seq id no.1或seq id no.2所示的核苷酸序列。
3.一种引物对,其特征在于,包括:
4.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1或2所述的snp位点,或权利要求3所述的引物对。
5.权利要求1或2所述的snp位点,或权利要求3所述的引物对,或权利要求4所述的试剂盒在鉴定白菜毛刺性状中的应用。
6.权利要求1或2所述的snp位点,或权利要求3所述的引物对,或权利要求4所述的试剂盒在如下任意一项中的应用:
7.根据权利要求5或6所述的应用,其特征在于,所述白菜包括大白菜、小白菜、乌塌菜、青梗菜或菜心中的一种或多种。
8.一种鉴定白菜毛刺性状的方法,其特征在于,包括:
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,包括:
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,若所述酶切产物只有103bp的扩增产物,则所述待测白菜的毛刺性状为无毛刺;若所述酶切产物只包括74bp的扩增产物,或包括103bp和74bp的扩增产物,则所述待测白菜的毛刺性状为有毛刺。