本发明涉及分子生物学、分子育种领域,特别是一种检测籽用南瓜种子百粒重相关的分子标记的引物组及其应用。
背景技术:
1、籽用南瓜是以种子的商业价值为主的南瓜类型,百粒重是与种子产量相关的重要指标,具有较大的百粒重性状通常作为培育优异籽用南瓜品种的目标之一。籽用南瓜以种子产量为主要育种方向,常规提高产量的方法是适当增加肥料的施用率,但是在实际操作过程中农户由于误解认为肥料施用越多产量越高,最终造成肥料滥用、土壤板结、土壤中菌群失衡导致病害发生、以及食品安全问题。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题,本发明提供了一种检测籽用南瓜种子百粒重相关的分子标记的引物组及其应用。
2、为达到上述目的,本发明是按照以下技术方案实施的:
3、本发明的目的之一是要提供一种检测籽用南瓜种子百粒重相关的分子标记的引物组,所述引物组包括:
4、上游引物forward primer1:5'-gccttgttcttcctggtgaa-3';
5、下游引物reverse primer1:5'-attcagaacagacaagccgc-3';
6、所述分子标记为5c13,所述5c13位于13号染色体2194632bp处。
7、本发明的目的之二是要提供一种利用上述引物组在检测籽用南瓜高百粒重南瓜材料中的应用,包括以下步骤:
8、s1、提取籽用南瓜材料的幼苗叶片的基因组dna;
9、s2、以步骤s1中提取的基因组dna为模板,利用上游引物forward primer1和下游引物reverse primer1进行pcr扩增;
10、s3、扩增产物采用2.5%的琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳仪进行检测,所得带型为183-195bp长度,则为高百粒重南瓜材料。
11、具体地,所述pcr扩增的反应体系为:模板dna 1μl,2×taqmastermix10μl,上游引物forward primer11μl,下游引物reverse primer11μl,ddh2o 7μl;pcr反应循环程序为:95℃预变性5min,95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min;35个循环;72℃延伸10min后,于16℃保存。
12、与现有技术相比,利用本发明设计的引物组,能够筛选得到高百粒重南瓜材料;进而可对籽用南瓜百粒重性状进行分子标记辅助选择,对籽用南瓜进行重要性状改良,提高单瓜产量,培育出高百粒重南瓜新品种。
1.一种检测籽用南瓜种子百粒重相关的分子标记的引物组,其特征在于,所述引物组包括:
2.一种如权利要求1所述的引物组在检测籽用南瓜高百粒重南瓜材料中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,包括以下步骤:
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述pcr扩增的反应体系为:模板dna 1μl,2×taq mastermix 10μl,上游引物forward primer11μl,下游引物reverse primer11μl,ddh2o 7μl;pcr反应循环程序为:95℃预变性5min,95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min;35个循环;72℃延伸10min后,于16℃保存。