本发明涉及微生物培养,尤其涉及一种微生物分离鉴定及培养制备方法。
背景技术:
1、微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物,个体微小,结构简单,通常要用光学显微镜和电子显微镜放大约1000倍才能看到。土壤中微生物的种类较多,有细菌、真菌、放线菌、藻类和原生动物等。数量也很大,l克土壤中就有几亿到几百亿个。大部分土壤微生物对作物生长发育是有益的,它们对土壤的形成发育、物质循环和肥力演变等均有重大影响,当然也有那么些不被人喜欢的致病微生物。正是有了土壤微生物的默默耕耘,大地才会有春华秋实的生生不息。
2、微生物包括:细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体,它个体微小,与人类关系密切。涵盖了有益跟有害的众多种类,广泛涉及食品、医药、工农业、环保等诸多领域。微生物划分为以下8大类:细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体。有些微生物是肉眼可以看见的,像属于真菌的蘑菇、灵芝等。还有微生物是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”,但是它的生存必须依赖于活细胞。微生物培养需要用到培养基。
3、在进行微生物培养时,培养基的制作是关键,但传统的培养基配方不合理,消毒灭菌效果不好,导致在培养微生物时,容易造成污染。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种微生物分离鉴定及培养制备方法,旨在解决传统微生物培养消毒灭菌较差,易造成污染的问题。
2、为实现上述目的,第一方面,本发明提供了一种微生物培养制备方法,包括以下步骤:
3、按重量比例称取土壤、富硒玉米提取液、富氨溶液、糖水、硫酸铁溶液、磷酸钾溶液、富蛋白溶液、琼脂和蒸馏水;
4、操作员将所述土壤、所述蒸馏水、所述富硒玉米提取液、所述硫酸铁溶液、所述磷酸钾溶液和所述琼脂倒入搅拌机搅拌,并过滤混合物获取上清液,得到混合液;
5、操作员将所述混合液、所述糖水、所述富氨溶液和所述富蛋白溶液投入搅拌机中混合制备二次混合液,并将所述二次混合液置于培养皿封装,得到微生物样本。
6、其中,所述重量比例为土壤12-31份、富硒玉米提取液30-40份、富氨溶液10-20份、糖水10-20份、硫酸铁溶液2-4份、磷酸钾溶液2-4份、富蛋白溶液8-14份、琼脂12-20份和蒸馏水70-100份。
7、其中,所述操作员将所述土壤、所述蒸馏水、所述富硒玉米提取液、所述硫酸铁溶液、所述磷酸钾溶液和所述琼脂倒入搅拌机搅拌,并过滤混合物获取上清液,得到混合液的具体方式:
8、调整搅拌机温度,并将所述土壤、所述蒸馏水、所述富硒玉米提取液、所述硫酸铁溶液、所述磷酸钾溶液和所述琼脂倒入搅拌机内进行搅拌,得到固液混合物;
9、利用4层纱布过滤所述固液混合物除去沉淀,并对过滤液进行高温灭菌,冷却至室温,得到混合液。
10、其中,所述搅拌机温度为40-50摄氏度,所述搅拌机转速200-300r/min,搅拌时长20-40分钟,高温灭菌温度为110-125摄氏度,灭菌时间为15-30min。
11、其中,所述操作员将所述混合液、所述糖水、所述富氨溶液和所述富蛋白溶液投入搅拌机中混合制备二次混合液,并将所述二次混合液置于培养皿封装,得到微生物样本的具体方式:
12、将所述混合液、所述糖水、所述富氨溶液和所述富蛋白溶液投入搅拌机中混合制备二次混合液;
13、对所述二次混合液进行二次高温灭菌,冷却至室温后装入培养皿内,通过气调包装机封装,得到微生物样本。
14、其中,所述二次高温灭菌温度为115-120℃,灭菌时间为20-25min。
15、第二方面,本发明还提供了一种微生物分离鉴定方法,包括以下步骤:
16、对所述微生物样本进行预处理,加入含有甘油、聚乙二醇的pbs缓冲液,混匀并静置,取上清液混匀,并分装成小管保存,得到待分离样品;
17、对所述待分离样品使用含有cck8的液体培养基进行梯度稀释,并于进行预培养2-7天,统计长菌率,得到可培养微生物的密度;
18、基于所述可培养微生物的密度,计算长菌率的稀释度,并根据稀释度,对所述待分离样品加入含有cck8的液体培养基,混匀,分液后培养3-7天,收集有颜色变化和有明显浑浊的孔中的液体,进行菌种鉴定。
19、本发明的一种微生物培养制备方法,按重量比例称取土壤、富硒玉米提取液、富氨溶液、糖水、硫酸铁溶液、磷酸钾溶液、富蛋白溶液、琼脂和蒸馏水;操作员将所述土壤、所述蒸馏水、所述富硒玉米提取液、所述硫酸铁溶液、所述磷酸钾溶液和所述琼脂倒入搅拌机搅拌,并过滤混合物获取上清液,得到混合液;操作员将所述混合液、所述糖水、所述富氨溶液和所述富蛋白溶液投入搅拌机中混合制备二次混合液,并将所述二次混合液置于培养皿封装,得到微生物样本,该培养制备方法满足微生物的生长所需,可以大大缩短培养周期,提高微生物繁殖和质量,且培养效果好,微生物培养基的品质好,养分充足,大大的减少了培养基受细菌污染的情况发生,有利于微生物的健康成长,且培养基通过高温灭菌装置消毒灭菌后,再通过气调包装机进行封口包装,大大的减少了培养基受细菌污染的情况发生,解决传统微生物培养消毒灭菌较差,易造成污染的问题。
1.一种微生物培养制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.如权利要求1所述的一种微生物培养制备方法,其特征在于,
3.如权利要求1所述的一种微生物培养制备方法,其特征在于,
4.如权利要求3所述的一种微生物培养制备方法,其特征在于,
5.如权利要求1所述的一种微生物培养制备方法,其特征在于,
6.如权利要求5所述的一种微生物培养制备方法,其特征在于,
7.一种微生物分离鉴定方法,应用于如权利要求1-6所述的一种微生物培养制备方法,其特征在于,包括以下步骤: