本发明属于免疫学领域，具体涉及杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8、其分泌的抗猪肺炎支原体单克隆抗体与应用。
背景技术：
1、由猪肺炎支原体(mycoplasma hyopneumoniae，mhp)引起的猪气喘病是严重危害全球养猪业的重大疫病，不仅导致猪的生长率下降12％-16％，商品猪的出栏时间延迟10-30天(邵国青，刘茂军，靳岷.检测猪肺炎支原体抗体间接elisa方法的建立.江苏农业学报，2007，23:437-441)，同时还破坏猪的支气管、纤毛和巨噬细胞，降低机体的免疫清除能力，引起继发感染和混合感染(maes d,segales j,meyns t,et al.control of mycoplasmahyopneumoniae infections in pigs.vet microbiol,2008,126:297-309)。该病呈现高接触性、高传染性和高发病率的特征。
2、特异、敏感、使用方便的诊断与检测技术是早期、及时发现疫病、防止疫病传播与扩散的关键，是有效控制与消灭动物传染病的前提。尽管病原的分离鉴定是诊断动物疫病的金标准，但由于猪肺炎支原体的培养条件极其苛刻，分离培养相当困难，并且容易受猪鼻支原体和猪絮状支原体的污染，从临床病料中分离、培养、鉴定的方法很少用于猪肺炎支原体的诊断。目前，针对猪肺炎支原体的诊断已经发展了很多技术，包括核酸探针、pcr、间接血凝试验、补体结合试验、酶联免疫吸附试验(elisa)、胶体金等。在这些诊断技术和方法中，临床上应用比较多的主要有pcr技术和elisa技术。但是，通过检测人工感染猪和临床样品，发现pcr仅适用于急性感染期，无急性病例的猪场难以检出(stark kd，etal.detection of mycoplasma hyopneumoniae by air sampling with a nested pcrassay.appl enviro n microbiology.1998,64(2):543)，而且猪肺炎支原体引起的往往是慢性呼吸道感染，提示pcr在临床应用存在一定的局限性。免疫学检测方法多运用间接elisa技术，适用于血清中猪肺炎支原体抗体、猪呼吸道分泌物中slga抗体的检测，尚无针对病原进行免疫学诊断的商品化试剂盒。
3、单克隆抗体具有纯度高、重复性好、与抗原结合特异性强等特点。然而单抗的制备，尤其是杂交瘤细胞的筛选具有偶然性，采用同种免疫原、同种免疫方式、同种筛选方式，同一个人试验，最后筛选出来的杂交瘤细胞株往往是不同的，所产生抗体的特异性、敏感性、稳定性、效价、功能、应用范围等等也存在不确定性，需要经过多轮筛选才能获得好用的单克隆抗体。
4、猪肺炎支原体无细胞壁结构，其外膜蛋白承担着猪肺炎支原体定殖、感染、致病、与宿主细胞交互等多种重要功能。本发明用于制备单克隆抗体的免疫原lppb是位于猪肺炎支原体外膜表面的重要毒力蛋白，猪肺炎支原体可借助lppb黏附定殖于猪呼吸道，lppb还具有炎症诱导和造成宿主免疫细胞凋亡，引起免疫抑制的能力。制备抗猪肺炎支原体外膜蛋白的单克隆抗体，可以为阐明猪肺炎支原体外膜蛋白的结构和功能提供有力工具。lppb具有良好的免疫原性和特异性，用该抗原制备的单克隆抗体适用于猪肺炎支原体的精准检测和和疫苗使用效果的评价。此外，lppb单克隆抗体还可以阻断猪肺炎支原体与猪肺泡巨噬细胞的靶向粘附，对猪支原体肺炎的预防及治疗具有重要理论和现实意义。然而，发明人发现，目前尚无猪肺炎支原体lppb单克隆抗体的相关研究和报道。
5、本发明提供一种杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8及其分泌的抗猪肺炎支原体的单克隆抗体，将单克隆抗体应用于elisa、western blot和免疫荧光检测中，可提高检测的特异性和灵敏性，为制备高质量的猪肺炎支原体检测试剂或试剂盒奠定基础，lppb单克隆抗体还可以阻断猪肺炎支原体与猪肺泡巨噬细胞的粘附，为猪支原体肺炎的预防和治疗提供技术支撑。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的问题，申请人提供了一株杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8，所述的杂交瘤细胞株的保藏编号为cctcc no:c2024161。
2、本发明的另一个目的是提供一种杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8分泌的单克隆抗体。
3、本发明的最后一个目的在于提供了上述杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8或其分泌的单克隆抗体的应用。为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：
4、本发明通过分析研究了猪肺炎支原编码的lppb蛋白的抗原表位、信号肽和跨膜区域，以去除信号肽、跨膜区并包含绝大多数抗原表位的lppb蛋白作为抗原，再通过免疫实验动物、免疫后动物脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，得到杂交瘤细胞株，杂交瘤细胞株通过多轮的稳定性、效价等筛选，最终获得了一株杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8，所述杂交瘤细胞株已于2024年05月27日送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：cctcc no:c2024161，分类命名为：杂交瘤细胞株(hybridoma cell line)mhp_lpp b-3e8，地址：中国武汉武汉大学。
5、以上所述的杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8，传代稳定，平均染色体数目是112.8条，分泌的单克隆抗体的重链亚型为igg2b，轻链亚型为kappa，该单克隆抗体具备阻断猪肺炎支原体与猪肺泡巨噬细胞粘附的能力。
6、本发明的保护范围包括：
7、杂交瘤细胞株(hybridoma cell line)mhp_lppb-3e8分泌的单克隆抗体。
8、杂交瘤细胞株(hybridoma cell line)mhp_lppb-3e8或分泌的单克隆抗体在制备猪肺炎支原体检测试剂盒中的应用。
9、杂交瘤细胞株(hybridoma cell line)mhp_lppb-3e8或分泌的单克隆抗体在制备猪肺炎支原体抗原检测试剂盒中的应用。
10、杂交瘤细胞株(hybridoma cell line)mhp_lppb-3e8或分泌的单克隆抗体在制备猪肺炎支原体阻断制剂中的应用。
11、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
12、本发明提供了可特异性识别猪肺炎支原体抗原的单克隆抗体，利用单克隆抗体建立的猪肺炎支原体elisa、western blot检测方法和免疫荧光检测方法，均能特异性识别猪肺炎支原体，具有很强的反应活性和特异性。
13、利用该单克隆抗体建立的猪肺炎支原体elisa检测，对猪肺炎支原体全菌抗原的最低检出量为2.5ng/ml。
14、利用该单克隆抗体建立的免疫荧光检测，可直接与猪肺炎支原体特异性结合并标记上荧光，在显微镜下实现猪肺炎支原体的可视化标记与示踪。
15、单克隆抗体可以阻断猪肺炎支原体与猪肺泡巨噬细胞的粘附定殖。
16、单克隆抗体免疫活性好，效价高达108。
17、杂交瘤细胞株(hybridoma cell line)mhp_lppb-3e8传代稳定。
1. 一株杂交瘤细胞株（hybridoma cell line）mhp_lppb-3e8，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no:c2024161。
2.权利要求1所述杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8分泌的单克隆抗体。
3.权利要求1所述杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8或分泌的单克隆抗体在制备猪肺炎支原体检测试剂盒中的应用。
4.权利要求1所述杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8或分泌的单克隆抗体在制备猪肺炎支原体抗原检测试剂盒中的应用。
5.权利要求1所述杂交瘤细胞株mhp_lppb-3e8或分泌的单克隆抗体在制备猪肺炎支原体阻断制剂中的应用。
