本发明涉及酞菁染料ir700和egfr-结合抗体(诸如西妥昔单抗抗体)的偶联物及其医药组合物。在一些方面中，组合物含有egfr-结合抗体，诸如西妥昔单抗抗体，其通过在西妥昔单抗抗体的重链和/或轻链内的特定位置偶联至ir700染料而修饰。在一些方面中，此偶联物能够在照射偶联物之后杀死所靶向细胞。本发明还提供相关制造方法和使用方法，及包括用于治疗肿瘤和特定癌症适应症的用途。
背景技术：
1、各种疗法可用于治疗疾病，诸如癌症。举例而言，光免疫疗法(pit)为一种使用偶联至抗体或其他靶向分子的光敏剂以靶向细胞表面目标分子(例如细胞表面受体)的方法，以便允许靶向杀死特定细胞。在一些情况下，pit可选择性地靶向诸如肿瘤细胞的疾病细胞，且由此选择性地杀死此类细胞而不损伤健康细胞。需要经改良的策略以改良用于pit中的酞菁染料偶联物。提供满足此类需求的组合物和方法。
技术实现思路
1、本文提供偶联物，诸如抗体-酞菁染料偶联物，例如西妥昔单抗-ir700偶联物。在一些所提供实施方式中，偶联物包括至少两个ir700分子偶联至西妥昔单抗中的至少两个赖氨酸(k)位置，且其中该至少两个赖氨酸位置独立地选自下组：对应于该西妥昔单抗的轻链中的位置107的赖氨酸(k107)、对应于位置145的赖氨酸(k145)、对应于位置188的赖氨酸(k188)、对应于位置190的赖氨酸(k190)和对应于位置207的赖氨酸(k207)和对应于该西妥昔单抗的重链中的位置5的赖氨酸(k5)、对应于位置75的赖氨酸(k75)、对应于位置215的赖氨酸(k215)、对应于位置248的赖氨酸(k248)、对应于位置292的赖氨酸(k292)、对应于位置328的赖氨酸(k328)、对应于位置336的赖氨酸(k336)、对应于位置416的赖氨酸(k416)和对应于位置449的赖氨酸(k449)。
2、在一些实施方式中，偶联物包括至少三个ir700分子偶联至西妥昔单抗中的至少三个赖氨酸位置。在一些实施方式中，至少三个赖氨酸位置是独立地选自下组：轻链中的k107、k145、k188、k190和k207及重链中的k5、k75、k215、k248、k292、k328、k336、k416和k449。在一些实施方式中，偶联至ir700的赖氨酸位置中的至少一个是选自下组：轻链中的k145或重链中的k215、k416或k449。在一些实施方式中，至少一个ir700分子偶联至轻链中的赖氨酸，且至少一个ir700分子偶联至重链中的赖氨酸。
3、在一些实施方式中，偶联物能够通过波长在690nm±50nm之间的光照射而活化且由此在偶联物结合至细胞表面上的表位时展现细胞杀伤活性。
4、本文还提供组合物。在一些所提供的实施方式中，组合物含有本文所描述的偶联物中的任一种和医药学上可接受的赋形剂。
5、本文还提供组合物，其包括偶联物的群体，其中该群体中的偶联物包含ir700偶联至西妥昔单抗，其中至少或至少约50％、60％、70％、80％、90％或大于或大于约90％的这些偶联物包含至少两个ir700分子偶联至该西妥昔单抗中的至少两个赖氨酸(k)位置，且其中该两个赖氨酸位置独立地选自下组：对应于该西妥昔单抗的轻链中的位置107的赖氨酸(k107)、对应于位置145的赖氨酸(k145)、对应于位置188的赖氨酸(k188)、对应于位置190的赖氨酸(k190)和对应于位置207的赖氨酸(k207)和对应于该西妥昔单抗的重链中的位置5的赖氨酸(k5)、对应于位置75的赖氨酸(k75)、对应于位置215的赖氨酸(k215)、对应于位置248的赖氨酸(k248)、对应于位置292的赖氨酸(k292)、对应于位置328的赖氨酸(k328)、对应于位置336的赖氨酸(k336)、对应于位置416的赖氨酸(k416)和对应于位置449的赖氨酸(k449)。
6、在一些实施方式中，至少或至少约50％、60％、70％、80％、90％或大于或大于约90％的偶联物包含至少三个ir700分子偶联至西妥昔单抗中的至少三个赖氨酸位置。在一些实施方式中，至少三个赖氨酸位置是独立地选自下组：轻链中的k107、k145、k188、k190和k207及重链中的k5、k75、k215、k248、k292、k328、k336、k416和k449。
7、在一些实施方式中，至少或至少约50％、60％、70％、80％、90％或大于或大于约90％的偶联物包含至少一个ir700分子偶联至轻链中的k145或重链中的k215、k416或k449。在一些实施方式中，至少或至少约50％、60％、70％、80％、90％或大于或大于约90％的偶联物包含ir700分子偶联至轻链中的k145和ir700分子偶联至重链中的k215、k416或k449中的至少一个。
8、在一些实施方式中，ir700分子与西妥昔单抗的比率在约2：1至约4：1之间。在一些实施方式中，ir700分子与西妥昔单抗的比率为约2.5∶1、2.6∶1、2.7∶1、2.8∶1、2.9∶1、3.0∶1、3.1∶1、3.2∶1、3.3∶1或3.4∶1。在一些实施方式中，ir700分子与西妥昔单抗的比率在约2.7∶1至约3.2∶1之间。
9、在一些实施方式中，组合物中不超过或不超过约15％的西妥昔单抗分子未与ir700偶联。在一些实施方式中，组合物中小于或小于约10％的西妥昔单抗分子未与ir700偶联。
10、在一些实施方式中，游离染料在组合物中的百分比小于或小于约3％、小于或小于约2％、小于或小于约1％或小于或小于约0.5％。
11、本文还提供组合物，其包括西妥昔单抗-ir700偶联物的群体，其中该组合物中多种偶联物各包含ir700偶联至西妥昔单抗于西妥昔单抗的轻链或重链中选自下组的赖氨酸(k)：对应于该西妥昔单抗的轻链中的位置107的赖氨酸(k107)、对应于位置145的赖氨酸(k145)、对应于位置188的赖氨酸(k188)、对应于位置190的赖氨酸(k190)和对应于位置207的赖氨酸(k207)和对应于该西妥昔单抗的重链中的位置5的赖氨酸(k5)、对应于位置75的赖氨酸(k75)、对应于位置215的赖氨酸(k215)、对应于位置248的赖氨酸(k248)、对应于位置292的赖氨酸(k292)、对应于位置328的赖氨酸(k328)、对应于位置336的赖氨酸(k336)、对应于位置416的赖氨酸(k416)和对应于位置449的赖氨酸(k449)，且该组合物包含以下特征：(a)该组合物中的ir700分子与该群体中的西妥昔单抗分子的比率在约2：1与约3：5之间，(b)小于或小于约10％的西妥昔单抗分子未与ir700偶联，和(c)该组合物中的游离染料在该组合物中的所有染料分子中的百分比小于或小于约3％。
12、在一些实施方式中，多种偶联物包含西妥昔单抗在轻链的k145与ir700偶联。在一些实施方式中，多种偶联物包含西妥昔单抗在重链的k215、k416或k449与ir700偶联。在一些实施方式中，多种偶联物包含西妥昔单抗与至少三个ir700分子偶联。
13、在一些实施方式中，多种偶联物包含组合物中的至少或至少约51％、至少或至少约55％、至少或至少约60％、至少或至少约70％、至少或至少约75％或至少或至少约80％的偶联物。
14、在一些实施方式中，游离染料在组合物中的百分比小于或小于约2％、小于或小于约1％或小于或小于约0.5％。
15、在一些实施方式中，西妥昔单抗包含seq id no：1中所述的重链序列、seq id no：2中所述的轻链序列或其组合。
16、在一些实施方式中，在暗处或少光条件下储存6个月之后，游离染料在组合物中的百分比实质上未改变。在一些实施方式中，组合物包含至少或至少约95％、96％、97％或98％单体形式的偶联物。在一些实施方式中，组合物包含小于或小于约5％、4％或3％高分子量物质。
17、还提供关于本文所提供的偶联物或组合物中的任一种的方法。在一些实施方式中，所提供的方法包括杀死肿瘤或癌细胞的方法。在一些所提供的实施方式中，方法涉及在或接近肿瘤或癌细胞的部位给予包含本文中所描述的偶联物或组合物中的任一种的医药组合物；和在约600nm至约850nm的波长以由约25j cm-2至约400j cm-2或由约25j/cm光纤长度至约500j/cm光纤长度的剂量照射接近肿瘤或癌细胞的区结构域，由此杀死肿瘤或癌细胞。
18、还提供治疗个体中的疾病或病症的方法。在一些实施方式中，方法涉及在或接近肿瘤或癌细胞的部位给予包含本文中所描述的偶联物或组合物中的任一种的医药组合物；和在约600nm至约850nm的波长以由约25j cm-2至约400j cm-2或由约25j/cm光纤长度至约500j/cm光纤长度的剂量照射接近个体的病灶或肿瘤的区结构域，由此治疗该疾病或病症。
19、在一些实施方式中，照射步骤是在690±50nm的波长或在或约690±20nm的波长进行。在一些实施方式中，照射步骤是在约690nm的波长进行。
20、在一些实施方式中，疾病或病症为肿瘤或癌症。在一些实施方式中，肿瘤或癌细胞或疾病或病症为肿瘤，该肿瘤为膀胱癌、胰腺癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌、乳癌、胃癌、前列腺癌、子宫颈癌、食道癌或头颈癌。在一些实施方式中，肿瘤或癌细胞或疾病或病症为位于头颈部、乳房、肝脏、结肠、卵巢、前列腺、胰腺、大脑、子宫颈、骨、皮肤、眼睛、膀胱、胃、食道、腹膜或肺的癌症。在一些实施方式中，癌症为头颈癌。
21、还提供制造偶联物(诸如本文所描述的西妥昔单抗-ir700偶联物)的方法。在一些实施方式中，提供制造稳定偶联物的方法。在一些实施方式中，方法涉及a)使西妥昔单抗与ir700在产生西妥昔单抗-ir700偶联物的条件下接触，其中该偶联物包含至少两个偶联至ir700的赖氨酸(k)位置，该至少两个赖氨酸(k)位置独立地选自下组：对应于该西妥昔单抗的轻链中的位置107的赖氨酸(k107)、对应于位置145的赖氨酸(k145)、对应于位置188的赖氨酸(k188)、对应于位置190的赖氨酸(k190)和对应于位置207的赖氨酸(k207)和对应于该西妥昔单抗的重链中的位置5的赖氨酸(k5)、对应于位置75的赖氨酸(k75)、对应于位置215的赖氨酸(k215)、对应于位置248的赖氨酸(k248)、对应于位置292的赖氨酸(k292)、对应于位置328的赖氨酸(k328)、对应于位置336的赖氨酸(k336)、对应于位置416的赖氨酸(k416)和对应于位置449的赖氨酸(k449)；b)使该偶联物在偶联期间和/或之后经受一个步骤，该步骤实质上减少与该西妥昔单抗非特异性结合的ir700；c)在医药学上可接受的缓冲液中配制该偶联物，其中在步骤a)至c)中的每一个中，该染料和偶联物曝露的唯一光具有在约400nm至约650nm的范围内的波长或具有小于或小于约500勒克斯(lux)的强度。
22、在一些实施方式中，步骤b)包含在完成ir700与西妥昔单抗之间的偶联反应之后，使偶联物经甘氨酸淬灭反应。在一些实施方式中，淬灭反应进行过夜或大于或大于约6小时的持续时间。
23、还提供稳定偶联物。在一些实施方式中，稳定偶联物是通过本文所描述的制造偶联物的方法中的任一种制造。
24、本文还提供包含多种偶联物的组合物，其中这些偶联物包含ir700偶联至西妥昔单抗，其中该组合物经胰蛋白酶消化产生包含以下肽的群体：a)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置215的赖氨酸(k215)；b)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置292的赖氨酸(k292)；c)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置416的赖氨酸(k416)；和d)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置145的赖氨酸(k145)。
25、在一些实施方式中，肽的群体进一步包含：e)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置336的赖氨酸(k336)；和f)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置449的赖氨酸(k449)。
26、在一些实施方式中，肽的群体进一步包含：g)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置107的赖氨酸(k107)；h)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置190的赖氨酸(k190)；i)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置5的赖氨酸(k5)；和j)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置75的赖氨酸(k75)。
27、在一些实施方式中，肽的群体进一步包含以下中的一个或多个：k)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置248的赖氨酸(k248)；1)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置328的赖氨酸(k328)；m)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置188的赖氨酸(k188)；和n)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置207的赖氨酸(k207)。
28、还提供包括多种偶联物的组合物，其中这些偶联物包含ir700偶联至西妥昔单抗，其中该组合物经胰蛋白酶消化产生包含以下肽的群体：a)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置5的赖氨酸(k5)；b)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置75的赖氨酸(k75)；c)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置215的赖氨酸(k215)；d)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置248的赖氨酸(k248)；e)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置292的赖氨酸(k292)；f)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置328的赖氨酸(k328)；g)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置336的赖氨酸(k336)；h)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seqid no：1的位置416的赖氨酸(k416)；i)西妥昔单抗的重链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置449的赖氨酸(k449)；j)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置107的赖氨酸(k107)；k)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置145的赖氨酸(k145)；1)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置188的赖氨酸(k188)；m)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置190的赖氨酸(k190)；和n)西妥昔单抗的轻链的肽，其包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置207的赖氨酸(k207)。
29、在一些实施方式中，肽通过正离子模式质谱法来检测。在一些实施方式中，当针对由正离子模式质谱法检测的肽产生提取离子层析图(eic)时：对应于a)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于a)的这些肽的eic峰积分面积的总和的3％或约3％与5％或约5％之间；对应于b)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于b)的这些肽的eic峰积分面积的总和的3％或约3％与5％或约5％之间；对应于c)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于c)的这些肽的eic峰积分面积的总和的8％或约8％与11％或约11％之间；对应于d)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于d)的这些肽的eic峰积分面积的总和的0.5％或约0.5％与2.5％或约2.5％之间；对应于e)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于e)的这些肽的eic峰积分面积的总和的8％或约8％与12％或约12％之间；对应于f)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于f)的这些肽的eic峰积分面积的总和的0.2％或约0.2％与2.5％或约2.5％之间；对应于g)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于g)的这些肽的eic峰积分面积的总和的4.5％或约4.5％与7％或约7％之间；对应于h)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于h)的这些肽的eic峰积分面积的总和的9.5％或约9.5％与13％或约13％之间；对应于i)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于i)的这些肽的eic峰积分面积的总和的6％或约6％与10％或约10％之间；对应于j)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于j)的这些肽的eic峰积分面积的总和的2％或约2％与5％或约5％之间；对应于k)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于k)的这些肽的eic峰积分面积的总和的7％或约7％与11％或约11％之间；对应于l)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于l)的这些肽的eic峰积分面积的总和的0.5％或约0.5％与4％或约4％之间；对应于m)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于m)的这些肽的eic峰积分面积的总和的1.5％或约1.5％与5％或约5％之间；和对应于n)的肽的eic峰积分面积是在对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于n)的这些肽的eic峰积分面积的总和的0.5％或约0.5％与4％或约4％之间。
30、在一些实施方式中，对应于a)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于a)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约3.8±1％；对应于b)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于b)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约3.5±1％；对应于c)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于c)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约10.0±1％；对应于d)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于d)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约1.7±1％；对应于e)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于e)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约10.2±1％；对应于f)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于f)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约1.3±1％；对应于g)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于g)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约5.9±1％；对应于h)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于h)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约11.2±1％；对应于i)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于i)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约7.6±1％；对应于j)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于i)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约3.4±1％；对应于k)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于k)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约9.3±1％；对应于l)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于l)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约2.1±1％；对应于m)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于m)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约3.5±1％；和对应于n)的肽的eic峰积分面积是对应的未经修饰肽的eic峰积分面积和对应于n)的这些肽的eic峰积分面积的总和的约2.0±1％。
31、在一些所提供的实施方式中，a)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：1的氨基酸1-38；b)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：1的氨基酸72-81；c)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：1的氨基酸213-216；d)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：1的氨基酸225-250；e)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：1的氨基酸291-294；f)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：1的氨基酸325-336；g)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：1的氨基酸329-340；h)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：1的氨基酸412-418；i)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：1的氨基酸442-449；j)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：2的氨基酸104-108；k)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：2的氨基酸143-149；l)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：2的氨基酸184-190；m)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：2的氨基酸189-207；和n)的肽的氨基酸序列对应于seq id no：2的氨基酸191-211。
32、本文还提供包括多种偶联物的组合物，其中这些偶联物包含ir700偶联至西妥昔单抗，且其中该组合物经胰蛋白酶消化产生肽，这些肽产生包含对应于以下的提取离子层析图(eic)峰的质谱：包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置215的赖氨酸(k215)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约9％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置292的赖氨酸(k292)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约8％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置416的赖氨酸(k416)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约8％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置145的赖氨酸(k145)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约8％。
33、在一些实施方式中，组合物的胰蛋白酶消化进一步产生包含对应于以下中的一个或多个的提取离子层析图(eic)峰的质谱：包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置449的赖氨酸(k449)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约5％；和/或包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置336的赖氨酸(k336)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约3.5％。在一些实施方式中，组合物的胰蛋白酶消化进一步产生包含对应于以下中的一个或多个的提取离子层析图(eic)峰的质谱：包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置5的赖氨酸(k5)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约2％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置75的赖氨酸(k75)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约2％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置248的赖氨酸(k248)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约0.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置328的赖氨酸(k328)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约0.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置107的赖氨酸(k107)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约2％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置188的赖氨酸(k188)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约0.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置190的赖氨酸(k190)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约2％；和/或包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置207的赖氨酸(k207)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约0.5％。
34、本文还提供包括多种偶联物的组合物，其中这些偶联物包含ir700偶联至西妥昔单抗，且其中该组合物经胰蛋白酶消化产生肽，这些肽产生包含对应于以下的提取离子层析图(eic)峰的质谱：包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置5的赖氨酸(k5)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约2.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置75的赖氨酸(k75)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约2.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置215的赖氨酸(k215)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约9％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置248的赖氨酸(k248)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约0.5％；和/或包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置292的赖氨酸(k292)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约8.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置328的赖氨酸(k328)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约0.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置336的赖氨酸(k336)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约4.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置416的赖氨酸(k416)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约9％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置449的赖氨酸(k449)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约7％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置107的赖氨酸(k107)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约2.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置145的赖氨酸(k145)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约8.5％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置188的赖氨酸(k188)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约1％；包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置190的赖氨酸(k190)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约2.5％；和包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置207的赖氨酸(k207)的肽，其中偶联eic峰的面积百分比是对应的经修饰和未经修饰的多肽的eic峰总面积的至少或至少约1％。
35、在一些实施方式中，对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置5的赖氨酸(k5)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约3.8±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置75的赖氨酸(k75)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约3.5±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置215的赖氨酸(k215)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约10.0±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置248的赖氨酸(k248)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约1.7±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seqid no：1的位置292的赖氨酸(k292)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约10.2±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置328的赖氨酸(k328)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约1.3±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置336的赖氨酸(k336)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约5.9±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seqid no：1的位置416的赖氨酸(k416)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约11.2±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：1的位置449的赖氨酸(k449)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约7.6±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置107的赖氨酸(k107)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约3.4±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seqid no：2的位置145的赖氨酸(k145)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约9.3±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置188的赖氨酸(k188)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约2.1±1％；对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置190的赖氨酸(k190)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约3.5±1％；和对于包含ir700分子偶联至对应于seq id no：2的位置207的赖氨酸(k207)的肽，偶联eic峰的面积百分比为约2±1％。
36、在一些实施方式中，包含ir700分子偶联至赖氨酸的肽包含一或多个选自以下中的氨基酸序列：对应于seq id no：1的氨基酸1-38、氨基酸72-81、氨基酸213-216、氨基酸225-250、氨基酸291-294、氨基酸325-336、氨基酸329-340、氨基酸412-418和氨基酸442-449的氨基酸序列；对应于seq id no：2的氨基酸104-108、氨基酸143-149、氨基酸184-190、氨基酸189-207和氨基酸191-211的氨基酸序列。
37、本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体的偶联物，其中至少一个ir700分子连接至西妥昔单抗抗体的轻链中的赖氨酸(k)。在一个方面中，至少一个ir700分子可在选自下组的位置处连接至赖氨酸：轻链中的k107、k145、k188、k190和k207。在所提供的实施方式中的任一种中，至少一个ir700分子可连接至轻链中的k145。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的一条或两条轻链中的两个或更多个赖氨酸位置处连接至ir700。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的一条或两条轻链中的k145处连接至ir700。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的轻链中的k145处和西妥昔单抗抗体的轻链或重链中的至少一个其他赖氨酸位置处连接至ir700。
38、本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体的偶联物，其中至少一个ir700分子连接至西妥昔单抗抗体的重链中的赖氨酸(k)。在一个方面中，至少一个ir700分子可在选自下组的位置处连接至赖氨酸：重链中的k5、k75、k215、k248、k292、k328、k336、k416和k449。在所提供的实施方式中的任一种中，至少一个ir700分子可在选自下组的位置处连接至赖氨酸：重链中的k215、k292、k336、k416和k449。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的一条或两条重链中的两个或更多个赖氨酸位置处连接至ir700。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的一条或两条重链中的三个或更多个赖氨酸位置处连接至ir700。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的一条或两条重链中的k215、k292、k336、k416和/或k449处连接至ir700。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的重链中的k215、k292、k336、k416和/或k449处和西妥昔单抗抗体的轻链或重链中的至少一个其他赖氨酸位置处连接至ir700。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的一条或两条轻链中的k145处连接至ir700。
39、本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体的偶联物，其中至少一个ir700分子连接至西妥昔单抗抗体的轻链中的赖氨酸(k)，且至少一个ir700分子连接至西妥昔单抗抗体的重链中的赖氨酸(k)。在一个方面中，轻链中的赖氨酸可选自下组：k107、k145、k188、k190和k207。在所提供的实施方式中的任一种中，重链中的赖氨酸可选自下组：k5、k75、k215、k248、k292、k328、k336、k416和k449。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的一条或两条轻链中的k145处连接至ir700。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的一条或两条重链中的k215、k292、k336、k416和/或k449处连接至ir700。在所提供的实施方式中的任一种中，西妥昔单抗抗体可在西妥昔单抗抗体的一条或两条轻链中的k145处和在西妥昔单抗抗体的一条或两条重链中的k215、k292、k416和k449处连接至ir700。
40、在所提供的实施方式中的任一种中，偶联物的ir700分子与西妥昔单抗抗体的比率可为1∶1、2∶1、3∶1或4∶1。在所提供的实施方式中的任一种中，偶联物能够通过波长在约600nm与约850nm(例如，690nm±50nm)之间的辐射而经活化且由此获得细胞杀伤活性。
41、在一些实施方式中，本文提供一种组合物，其包含前述实施方式中的任一种的偶联物和医药学上可接受的赋形剂。在一些实施方式中，本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子具有至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的轻链中的赖氨酸(k)。在一个方面中，至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子可具有至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的一条或两条轻链中的k107、k145、k188、k190和/或k207。在所提供的实施方式中的任一种中，群体中偶联至ir700的主要轻链赖氨酸位置可为k145。在所提供的实施方式中的任一种中，当西妥昔单抗抗体分子通过改性质谱法分析时，在轻链k145处含有ir700偶联的肽可比含有偶联至其他轻链赖氨酸位置的ir700的肽更丰富。
42、在一些实施方式中，本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子具有至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的重链中的赖氨酸(k)。在一个方面中，至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子可具有至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的一条或两条重链中的k5、k75、k215、k248、k292、k328、k336、k416和/或k449。在所提供的实施方式中的任一种中，群体中偶联至ir700的主要重链赖氨酸位置可为k215、k292、k336、k416和k449中的一个或多个。在所提供的实施方式中的任一种中，当西妥昔单抗抗体分子通过质谱法分析时，含有在重链k215、k292、k336、k416或k449处偶联的ir700的肽可比含有偶联至其他重链赖氨酸位置的ir700的肽更丰富。在所提供的实施方式中的任一种中，至少70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子可具有至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的一条或两条重链中的两个或更多个赖氨酸。
43、在所提供的实施方式中的任一种中，不超过约20％的西妥昔单抗抗体分子可未与ir700偶联。在所提供的实施方式中的任一种中，小于10％的西妥昔单抗抗体分子可未与ir700偶联，且/或游离染料在组合物中的百分比可小于3％。在所提供的实施方式中的任一种中，组合物中的ir700分子与群体中的西妥昔单抗抗体分子的比率可为约2∶1、约2.5∶1或约3∶1。
44、在一些实施方式中，本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子具有至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的轻链或重链中的赖氨酸(k)。在一个方面中，至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子可具有至少一个ir700分子连接至一条或两条轻链中的k107、k145、k188、k190和/或k207或连接至各西妥昔单抗抗体分子的一条或两条重链中的k5、k75、k215、k248、k292、k328、k336、k416和/或k449。在一个方面中，至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子可具有至少一个ir700分子连接至一条或两条轻链中的k145或连接至各西妥昔单抗抗体分子的一条或两条重链中的k215、k292、k336、k416或k449。
45、在一些实施方式中，本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子具有至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的轻链中的赖氨酸(k)和至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的重链中的赖氨酸。在一个方面中，至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子可具有至少一个酞菁ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的一条或两条轻链中的k107、k145、k188、k190和/或k207和至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的一条或两条重链中的k5、k75、k215、k248、k292、k328、k336、k416和/或k449。在一个方面中，至少50％、60％、70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子可具有至少一个酞菁ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的一条或两条轻链中的k145和至少一个ir700分子连接至各西妥昔单抗抗体分子的一条或两条重链中的k215、k292、k336、k416或k449。
46、本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中不超过约20％的西妥昔单抗抗体分子在西妥昔单抗抗体分子的轻链或重链中的赖氨酸(k)处未与ir700偶联。在一个方面中，小于15％的西妥昔单抗抗体分子可未与ir700偶联。在一个方面中，小于10％的西妥昔单抗抗体分子可未与ir700偶联。在所提供的实施方式中的任一种中，组合物中的游离染料在组合物中的所有染料分子中的百分比可小于3％、约2％、约1％或约0.5％。在所提供的实施方式中的任一种中，组合物中的ir700分子与群体中的西妥昔单抗抗体分子的比率可为约2∶1、约2.5∶1或约3∶1。
47、本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中一或多个西妥昔单抗抗体分子在一或多个西妥昔单抗抗体分子的轻链或重链中的赖氨酸(k)处与ir700偶联，组合物中的ir700分子与群体中的西妥昔单抗抗体分子的比率为约2∶1、约2.5∶1或约3∶1，小于10％的西妥昔单抗抗体分子未与ir700偶联，且组合物中的游离染料在组合物中的所有染料分子中的百分比小于约0.5％。
48、本文提供一种包含seq id no：1的组合物，其中seq id no：1的赖氨酸145偶联至ir700。本文提供一种包含seq id no：2的组合物，其中seq id no：2的赖氨酸215、赖氨酸292、赖氨酸416和/或赖氨酸449偶联至ir700。
49、本文提供一种包含seq id no：1和seq id no：2的组合物，其中seq id no：1的赖氨酸145偶联至ir700且seq id no：2的赖氨酸215、赖氨酸292、赖氨酸416和/或赖氨酸449偶联至ir700。在一个方面中，组合物可在相同分子中包含seq id no：1和seq id no：2，其中seq id no：1的赖氨酸145可偶联至ir700且seq id no：2的赖氨酸215、赖氨酸292、赖氨酸416和/或赖氨酸449可偶联至ir700。在所提供的实施方式中的任一种中，组合物可在不同的分子中包含seq id no：1和seq id no：2，其中seq id no：1的赖氨酸145可偶联至ir700且seq id no：2的赖氨酸215、赖氨酸292、赖氨酸416和/或赖氨酸449可偶联至ir700。
50、本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中小于15％的西妥昔单抗抗体分子未与ir700偶联，组合物包含小于3％游离ir700，且游离染料在组合物中的百分比在储存约6个月之后实质上未改变。
51、本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子与ir700偶联的群体的组合物，其中组合物包含小于或小于约0.6％、小于或小于约0.5％、小于或小于约0.4％，或小于或小于约0.3％游离染料。在一个方面中，组合物可包含至少或至少约95％、96％、97％或98％单体。在一个方面中，组合物可包含小于或小于约5％、4％或3％高分子量物质。在所提供的实施方式中的任一种中，组合物可包含小于或小于约30％、20％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％或5％未偶联抗体。
52、在所提供的实施方式中的任一种中，在暗处或少光条件下储存组合物6个月之后，游离染料的百分比实质上未改变。在所提供的实施方式中的任一种中，至少70％、80％、90％或大于90％的西妥昔单抗抗体分子可具有至少一个ir700分子偶联至各西妥昔单抗抗体分子的轻链中的赖氨酸(k)。在所提供的实施方式中的任一种中，群体中偶联至ir700的主要轻链赖氨酸位置可为k145。在所提供的实施方式中的任一种中，至少70％、80％、90％或大于90％的群体可具有至少一个ir700分子偶联至各西妥昔单抗抗体分子的重链中的赖氨酸(k)。在所提供的实施方式中的任一种中，群体中偶联至ir700的主要重链赖氨酸位置可为k215、k292、k336、k416和k449中的一个或多个。
53、本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中约9％与约10％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在轻链赖氨酸145(k145)处含有ir700偶联的肽。本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中约9％与约11％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸215(k215)处含有ir700偶联的肽。本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中约9％与约11％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸292(k292)处含有ir700偶联的肽。本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中约10％与约12％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸416(k416)处含有ir700偶联的肽。本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中约7％与9％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸449(k449)处含有ir700偶联的肽。本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中约5％与7％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸336(k336)处含ir700有偶联的肽。本文提供一种包含西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中约9％与11％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在轻链赖氨酸145(k145)处含有ir700偶联的肽；约9％与11％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸215(k215)处含有ir700偶联的肽；约9％与11％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸292(k292)处含有ir700偶联的肽；约10％与12％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸416(k416)处含有ir700偶联的肽；约7％与9％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸449(k449)处含有ir700偶联的肽；且/或约5％与7％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽为在重链赖氨酸336(k336)处含有ir700的肽。在所提供的实施方式中的任一种中，约3％与4％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽可为在轻链赖氨酸107(k107)处含有ir700偶联的肽；约1％与3％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽可为在轻链赖氨酸188(k188)处含有ir700偶联的肽；约3％与4％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽可为在轻链赖氨酸190(k190)处含有ir700偶联的肽；约1％与3％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽可为在轻链赖氨酸207(k207)处含有ir700偶联的肽；约3％与4％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽可为在重链赖氨酸5(k5)处含有ir700偶联的肽；约3％与4％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽可为在重链赖氨酸75(k75)处含有ir700偶联的肽；约1％与2％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽可为在重链赖氨酸248(k248)处含有ir700偶联的肽；和/或约1％与2％之间的通过质谱法分析的西妥昔单抗抗体分子的总肽可为在重链赖氨酸328(k328)处含有ir700偶联的肽。
54、本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中：在轻链中的赖氨酸145(k145)与重链中的赖氨酸215(k215)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；在轻链中的赖氨酸145(k145)与重链中的赖氨酸292(k292)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；在轻链中的赖氨酸145(k145)与重链中的赖氨酸336(k336)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；在轻链中的赖氨酸145(k145)与重链中的赖氨酸416(k416)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；和/或在轻链中的赖氨酸145(k145)与重链中的赖氨酸449(k449)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1。本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中在重链中的赖氨酸215(k215)与重链中的赖氨酸292(k292)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；在重链中的赖氨酸215(k215)与重链中的赖氨酸336(k336)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；在重链中的赖氨酸215(k215)与重链中的赖氨酸416(k416)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；和/或在重链中的赖氨酸215(k215)与重链中的赖氨酸449(k449)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1。本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中在重链中的赖氨酸292(k292)与重链中的赖氨酸336(k336)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；在重链中的赖氨酸292(k292)与重链中的赖氨酸416(k416)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；和/或在重链中的赖氨酸292(k292)与重链中的赖氨酸449(k449)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1。本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中在重链中的赖氨酸336(k336)与重链中的赖氨酸416(k416)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1；和/或在重链中的赖氨酸336(k336)与重链中的赖氨酸449(k449)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1。本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中在重链中的赖氨酸416(k416)与重链中的赖氨酸449(k449)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约2∶1至约1∶2，任选地约1∶1。
55、本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中在轻链中的赖氨酸145(k145)、重链中的赖氨酸215(k215)、重链中的赖氨酸292(k292)和重链中的赖氨酸416(k416)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约1∶1∶1∶1。
56、本文提供一种包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体分子的群体的组合物，其中在轻链中的赖氨酸145(k145)、重链中的赖氨酸215(k215)、重链中的赖氨酸292(k292)、重链中的赖氨酸336(k336)、重链中的赖氨酸416(k416)和重链中的赖氨酸449(k449)位置之间，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率为约1∶1∶1∶1∶1∶1。
57、在所提供的实施方式中的任一种中，偶联至赖氨酸的ir700在西妥昔单抗抗体分子的群体中的比率可由质谱法量测。
58、本文提供一种杀死肿瘤或癌细胞的方法，其包含在或接近该肿瘤或癌细胞的部位给予包含前述实施方式中的任一种的偶联物或组合物的医药组合物；和在约600nm至约850nm的波长以由约25jcm-2至约400j cm-2或由约25j/cm光纤长度至约500j/cm光纤长度的剂量照射接近该肿瘤细胞的区结构域，由此杀死该肿瘤或癌细胞。本文提供一种治疗个体中的疾病或病症(例如肿瘤或癌症)的方法，其包含向对象给予包含前述实施方式中的任一种的偶联物或组合物的医药组合物；和在约600nm至约850nm的波长以由约25j cm-2至约400j cm-2或由约25j/cm光纤长度至约500j/cm光纤长度的剂量照射接近对象中的病灶(例如，由肿瘤或癌症所致的病灶)的区结构域，由此治疗该疾病或病症。在所提供的实施方式中的任一种中，方法可进一步包含在给予步骤之前提供医药组合物。在所提供的实施方式中的任一种中，照射步骤可在690±50nm的波长或在或约690±20nm的波长进行。在所提供的实施方式中的任一种中，照射步骤可在约690nm的波长进行。在所提供的实施方式中的任一种中，肿瘤可为膀胱癌、胰腺癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌、乳癌、胃癌、前列腺癌、子宫颈癌、食道癌或头颈癌。在所提供的实施方式中的任一种中，癌症可位于头颈部、乳房、肝脏、结肠、卵巢、前列腺、胰腺、大脑、子宫颈、骨、皮肤、眼睛、膀胱、胃、食道、腹膜或肺。在所提供的实施方式中的任一种中，癌症可为位于头颈部的癌症。
59、本文提供一种制造稳定偶联物的方法，其包含a)使西妥昔单抗抗体与ir700在产生偶联物的条件下接触，该偶联物包含连接至一或多个选自下组的西妥昔单抗抗体的赖氨酸的ir700：k145(轻链)、k215(重链)、k292(重链)、k336(重链)、k416(重链)和k449(重链)；b)使该偶联物在偶联期间和/或之后经受一个步骤，该步骤实质上减少与该西妥昔单抗抗体非特异性结合的ir700；c)在医药学上可接受的缓冲液中配制该偶联物，其中在步骤a)至c)中的每一个中，该染料和偶联物曝露的唯一光具有在约400nm至约650nm的范围内的波长或具有小于500勒克斯的强度。在一个方面中，步骤b)可包含使偶联物经受淬灭反应。在所提供的实施方式中的任一种中，步骤b)可包含在完成ir700与西妥昔单抗抗体之间的偶联反应之后，使偶联物经甘氨酸淬灭反应。在所提供的实施方式中的任一种中，淬灭反应可进行过夜或大于约6小时的持续时间。
60、在一些实施方式中，本文提供由前述实施方式中的任一种制造的稳定偶联物。在所提供的实施方式中的任一种中，偶联物可包含偶联至ir700的西妥昔单抗抗体分子的群体，其中在轻链中的赖氨酸145(k145)、重链中的赖氨酸215(k215)、重链中的赖氨酸292(k292)和重链中的赖氨酸416(k416)位置之间，偶联至西妥昔单抗抗体分子的赖氨酸的ir700在群体中的比率可为约1∶1∶1∶1。
1.一种偶联物，其包含至少两个ir700分子偶联至西妥昔单抗中的至少两个赖氨酸(k)位置，且其中所述至少两个赖氨酸位置独立地选自下组：对应于该西妥昔单抗的轻链中的位置107的赖氨酸(k107)、对应于位置145的赖氨酸(k145)、对应于位置188的赖氨酸(k188)、对应于位置190的赖氨酸(k190)和对应于位置207的赖氨酸(k207)和对应于该西妥昔单抗的重链中的位置5的赖氨酸(k5)、对应于位置75的赖氨酸(k75)、对应于位置215的赖氨酸(k215)、对应于位置248的赖氨酸(k248)、对应于位置292的赖氨酸(k292)、对应于位置328的赖氨酸(k328)、对应于位置336的赖氨酸(k336)、对应于位置416的赖氨酸(k416)和对应于位置449的赖氨酸(k449)。
2.如权利要求1所述的偶联物，其包含至少三个ir700分子偶联至该西妥昔单抗中的至少三个赖氨酸位置。
3.如权利要求2所述的偶联物，其中所述至少三个赖氨酸位置独立地选自下组：轻链中的k107、k145、k188、k190和k207及重链中的k5、k75、k215、k248、k292、k328、k336、k416和k449。
4.如权利要求1至3中任一项所述的偶联物，其中偶联至ir700的这些赖氨酸位置中的至少一个是选自下组：轻链中的k145或重链中的k215、k416或k449。
5.如权利要求1至4中任一项所述的偶联物，其中至少一个ir700分子偶联至轻链中的赖氨酸，且至少一个ir700分子偶联至重链中的赖氨酸。
6.如权利要求1至5中任一项所述的偶联物，其中该偶联物能够通过波长在690nm±50nm之间的光照射而活化且由此在该偶联物结合至细胞表面上的表位时展现细胞杀伤活性。
7.一种组合物，其包含如权利要求1至6中任一项所述的偶联物和医药学上可接受的赋形剂。
8.一种组合物，其包含偶联物的群体，其中所述群体中的偶联物包含ir700偶联至西妥昔单抗，其中至少或至少约50％、60％、70％、80％、90％或大于或大于约90％的这些偶联物包含至少两个ir700分子偶联至该西妥昔单抗中的至少两个赖氨酸(k)位置，且其中该两个赖氨酸位置独立地选自下组：对应于该西妥昔单抗的轻链中的位置107的赖氨酸(k107)、对应于位置145的赖氨酸(k145)、对应于位置188的赖氨酸(k188)、对应于位置190的赖氨酸(k190)和对应于位置207的赖氨酸(k207)和对应于该西妥昔单抗的重链中的位置5的赖氨酸(k5)、对应于位置75的赖氨酸(k75)、对应于位置215的赖氨酸(k215)、对应于位置248的赖氨酸(k248)、对应于位置292的赖氨酸(k292)、对应于位置328的赖氨酸(k328)、对应于位置336的赖氨酸(k336)、对应于位置416的赖氨酸(k416)和对应于位置449的赖氨酸(k449)。
9.如权利要求7或8所述的组合物，其中至少或至少约50％、60％、70％、80％、90％或大于或大于约90％的这些偶联物包含至少三个ir700分子偶联至该西妥昔单抗中的至少三个赖氨酸位置。
10.如权利要求9所述的组合物，其中该至少三个赖氨酸位置独立地选自下组：轻链中的k107、k145、k188、k190和k207及重链中的k5、k75、k215、k248、k292、k328、k336、k416和k449。
