本发明医药制备，涉及一种具有抗肾癌活性的化合物及其制备方法与应用。
背景技术：
1、肾癌是泌尿系统中恶性程度较高的肿瘤，在我国泌尿生殖系统肿瘤中占第二位，仅次于膀胱肿瘤。虽然肾癌仅占成人恶性肿瘤的2％～3％，但占小儿恶性肿瘤的20％左右。肾癌的发病率呈逐年增高趋势，随年龄增大而升高，高发年龄为40～55岁，男性发病率高于女性，肾癌体积小、生长速度慢，转移性肾癌的诊断与治疗给患者带来巨大的疾病负担，严重威胁人类健康。
2、肾癌的发生具有明确的遗传学背景，约70％肾癌发生的分子基础是vhl基因的缺失、突变导致的基因表达失活。vhl失活的肾癌细胞内hif持续活化，促进下游靶基因血管内皮生长因子(vegf)和血小板衍生生长因子(pdgf)的转录，而下游靶基因能够通过与血管内皮细胞上的受体vegfr或pdgfr结合，促进肿瘤血管生长。
3、
4、索拉非尼是最早上市用于治疗转移性肾癌的药物，通过抑制vegfr和pdgf受体而阻断肿瘤新生血管的形成，间接地抑制肿瘤细胞的生长。舒尼替尼为多靶点小分子酪氨酸激酶抑制剂，具有抗肿瘤血管生成与抑制肿瘤细胞增殖的双重抗肿瘤效应，用于治疗转移性肾癌。
5、pten以及tsc1/2等基因失活所引起的pi3k/mtor信号通路在肾癌发生发展中也十分重要，pi3k/mtor信号通路调控hif-α蛋白翻译的重要通路，其在肾癌细胞中持续活化，促进肿瘤血管的生成。
6、替西罗莫司(cci-779)作为一种mtor抑制剂，通过与蛋白结合形成的复合物，阻断mtor信号通路，抑制肿瘤细胞增殖、转化及肿瘤血管生成等过程。己有研究表明，对mskcc分级为高危的转移性肾癌患者或者非透明细胞肾癌患者可从替西罗莫司治疗中获益，依维莫司主要用于舒尼替尼等vegfr-tki治疗肾癌失败后的二线治疗。
技术实现思路
1、本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种具有抗肾癌活性的化合物及其制备方法与应用，提供一种能够很好的抑制肾癌细胞生长的化合物，可以用于制备治疗肾癌细胞相关疾病的药物。
2、为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
3、本发明公开了一种式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；
4、
5、进一步地，本发明公开了上述的抗肾癌活性的化合物的制备方法，包括如下步骤：
6、化合物1与1，1′-羰基二咪唑进行第一缩合反应，得到化合物2；化合物3与4-氨基苯硼酸类化合物在第一催化剂、第一碱的作用下进行回流反应，得到化合物4；化合物2与化合物4进行第二缩合反应，制得化合物i；
7、
8、在一些实施例中，所述化合物1与1，1′-羰基二咪唑的摩尔比为0.5～1.5∶0.8～2.0；所述第一缩合反应，反应温度为25～60℃；所述第一缩合反应在惰性气体保护下进行。
9、在一些实施例中，优选地，所述化合物1与1，1′-羰基二咪唑的摩尔比为1.0∶1.0；所述第一缩合反应，反应温度为50～60℃，进一步优选为55℃；所述惰性气体优选为氮气。
10、在一些实施例中，所述第一缩合反应中所用的溶剂包括但不限于二氯乙烷、三氯甲烷、dmf、dcm、乙腈、二氧六环和四氢呋喃中的任意一种或几种的组合，进一步优选为二氯乙烷；所述第一缩合反应中所用的溶剂用量无特殊要求，将原料溶解或分散均匀即可。
11、在一些实施例中，所述4-氨基苯硼酸类化合物为4-氨基苯硼酸或4-氨基苯硼酸频哪醇酯；所述第一催化剂为四三苯基膦钯、二(三叔丁基膦)钯、1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯、三(二亚苄基丙酮)二钯和醋酸钯中的任意一种或几种的组合；所述第一碱为碳酸钠、碳酸钾和碳酸氢钠中的任意一种或几种的组合；所述化合物3与4-氨基苯硼酸类化合物在第一催化剂、第一碱的摩尔比为0.50～1.20∶0.50～2.00∶0.04～0.20∶2.00～6.00；所述回流反应在惰性气体保护下进行。
12、在一些实施例中，优选地，所述4-氨基苯硼酸类化合物为4-氨基苯硼酸；所述第一催化剂为四三苯基膦钯；所述第一碱为碳酸钠；所述化合物3与4-氨基苯硼酸类化合物在第一催化剂、第一碱的摩尔比为1.00∶1.00∶0.08∶3.00；所述惰性气体优选为氮气。
13、在一些实施例中，所述回流反应中所用的溶剂包含但不限于二氧六环、水、dmf、乙醇、乙二醇二甲醚和甲苯中的任意一种或几种的组合，优选地，所述回流反应中所用的溶剂包含但不限于二氧六环和水的混合溶剂、dmf和水的混合溶剂、乙醇和水的混合溶剂、乙二醇二甲醚和水的混合溶剂或甲苯和水的混合溶剂，进一步优选地，所述回流反应中所用的溶剂为二氧六环和水任意比例的混合溶剂，更进一步优选地，所述回流反应中所用的溶剂为二氧六环和水体积比为2.0～10.0∶0.5～2.5的混合溶剂，最优选地，所述回流反应中所用的溶剂为二氧六环和水体积比为8.0∶2.0的混合溶剂。其中，所述回流反应中所用的溶剂用量无特殊要求，将原料溶剂或分散均匀即可。
14、其中，所述回流反应，反应温度由所用的溶剂决定，反应温度使得所用溶剂回流即可。
15、在一些实施例中，所述化合物2与化合物4的摩尔比为1.0～3.0∶0.5～1.5；所述第二缩合反应，反应温度为25～70℃；所述第二缩合反应在惰性气体保护下进行。
16、在一些实施例中，优选地，所述化合物2与化合物4的摩尔比为2.0∶1.0；所述第二缩合反应，反应温度为40～60℃，进一步优选为50℃；所述惰性气体优选为氮气。
17、在一些实施例中，所述第二缩合反应中所用的溶剂包括但不限于氯仿、dmf、dcm、乙腈和二氯乙烷中的任意一种或几种的组合，优选为氯仿；所述第二缩合反应中所用的溶剂用量无特殊要求，将原料溶解或分散均匀即可。
18、更进一步地，本发明公开了一种药物组合物，包含上述的式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药中的任意一种，以及一种或多种药学上可接受的载体。
19、具体地，所述药物组合物剂型为皮下注射剂、皮内注射剂、喷雾剂、粉雾剂、外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、液体制剂中的一种或几种。
20、上述的式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，或者上述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用也在本发明的保护范围之内。
21、上述的式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，或者上述的药物组合物在制备治疗肾癌药物中的应用也在本发明的保护范围之内。
22、上述的式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，或者上述的药物组合物在制备治疗与肾癌相关疾病药物中的应用也在本发明的保护范围之内。
23、具体地，所述肾癌相关疾病为人肾透明细胞腺癌。
24、除非有说明，本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指由药学可接受的无毒碱或酸制备的盐。当本发明的化合物是酸性时，其相应的盐可以容易地由无机碱或有机碱制备。衍生自这种无机碱的盐包括铝、铵、钙、铜(铜和亚铜)、铁、亚铁、锂、镁、锰(锰和亚锰)、钾、钠、锌等盐。优选的为铵、钙、镁、钾和钠等盐。由有机碱制备的盐包括来源于天然和合成来源的伯胺、仲胺和叔胺。可以形成盐的药学可接受的有机无毒碱包括精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、n，n′-二苄基亚乙基二胺、二乙基胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、二环己基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明的化合物是碱性时，其相应的盐可以容易地由无机酸或有机酸制备。这种酸包括例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。
25、术语“溶剂化物”是指由溶质(即式i化合物)或其药学可接受的盐和不妨碍溶质生物活性的溶剂形成的可变化学计量的复合物。溶剂的实例包括但不限于水、乙醇和乙酸。当溶剂是水时，该溶剂化物称为水合物。水合物包括但不限于半、一、一倍半、二和三水合物。
26、在药物组合物中，术语“组合物”包括包含活性成分和组成载体的惰性成分(药学可接受的赋形剂)的产品，以及任何由两种或多种成分的组合、络合或者聚集、或一种或多种成分的分解、或由一种或多种成分的其它类型反应或相互作用直接或间接地得到的产品。因此，本发明的药物组合物包括任何通过混合式i化合物、其它活性成分和药学可接受的赋形剂制备的组合物。
27、本发明的药物组合物包含作为活性成分的式i所示的化合物(或其药学可接受的盐或溶剂化物)、药学可接受的载体和任选的其它治疗性成分或佐剂。药物组合物包括适合口服、直肠、局部和胃肠外(包括皮下、肌内和静脉内)给药的组合物，虽然在任何特定的情况下最合适的途径取决于特定的主体、对其给予活性成分的病症的性质和严重度。药物组合物可以通过药剂学领域公知的任何方法制备。
28、活性成分可以以固体剂型或液体剂型口服给药，所述固体剂型例如胶囊、片剂、锭剂、糖锭剂、颗粒和粉剂，所述液体剂型例如酏剂、糖浆剂、乳剂、分散体和混悬液。活性成分还可以以无菌液体剂型例如分散体、混悬液或溶液胃肠外给药。可以用于将活性成分进行给药的其它剂型还有用于局部给药的皮下注射剂、皮内注射剂、外用溶液剂、洗剂、搽剂、糊剂、软膏、乳膏、滴剂、经皮贴剂或粉剂；用于眼睛给药的眼用溶液或混悬液形式，即滴眼液；用于吸入或鼻内给药的喷雾剂或粉末组合物，或用于直肠或阴道给药的乳膏、软膏、喷雾剂或栓剂。明胶胶囊包含活性成分和粉状载体，例如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。可以使用类似的稀释剂来制备压制片剂。片剂和胶囊都可以被制备成缓释产品以在数小时内提供药物的持续释放。压制片剂可以包糖衣或包膜衣以掩盖任何令人不愉快的味道和保护该片剂不受空气影响，或者可以包肠溶衣用于在胃肠道内选择性崩解。用于口服给药的液体剂型可包含着色剂和矫味剂以增加患者的接受性。一般而言，水、合适的油、盐水、右旋糖(葡萄糖)水溶液、以及相关的糖溶液和二醇类如丙二醇或聚乙二醇是合适的胃肠外溶液的载体。用于胃肠外给药的溶液优选包含活性成分的水溶性盐、合适的稳定剂和根据需要使用的缓冲物质。抗氧化剂例如单独或组合的亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸是合适的稳定剂。还可以使用柠檬酸及其盐和edta钠。此外，胃肠外溶液还可以包含防腐剂，例如苯扎氯铵、尼泊金甲酯或尼泊金丙酯和氯丁醇。对于吸入给药而言，本发明的化合物可以方便地从加压包装或喷雾器中以喷雾剂形式递送。该化合物还可以以进行配制的粉末形式递送，该粉末组合物可以在吹入粉末吸入器装置的帮助下吸入。优选的用于吸入的递送系统是定量吸入(mdi)气雾剂，其可以配制成式i、ii的化合物在合适的推进剂中的混悬液或溶液，所述推进剂例如碳氟化合物或烃。对于眼睛给药而言，眼用制剂可以用式i化合物在合适眼用载体中的合适重量百分比的溶液或混悬液进行配制，从而保持化合物与眼睛表面接触足够的时间以使化合物渗透到眼睛的角膜和内部区域。
29、用于给予本发明化合物的有用的药物剂型包括但不限于硬和软明胶胶囊、片剂、胃肠外注射液和口服混悬液。
30、当本发明的化合物逐步给药或与其它治疗剂结合给药时，可以使用和前述相同的剂型。当药物以物理组合给药时，剂型和给药途径应根据组合药物的相容性选择。本发明的化合物可以作为唯一活性成分或与第二活性成分组合给药，所述第二活性成分包括其己知可用于提高患者促红细胞生成素水平的活性成分。
31、有益效果：
32、本发明提供的1-(5-叔丁基异恶唑-3-基)-3-(4-(4-氨基-1-异丙基-1h-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基)脲(化合物i)对人肾癌细胞具有较强的抑制活性，其抑制活性是现在己上市药物索拉非尼的10倍，有望开发成治疗人肾癌细胞的药物。
1.一种式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；
2.权利要求1所述的抗肾癌活性的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化合物1与1，1′-羰基二咪唑的摩尔比为0.5～1.5：0.8～2.0；所述第一缩合反应，反应温度为25～60℃；所述第一缩合反应在惰性气体保护下进行。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述4-氨基苯硼酸类化合物为4-氨基苯硼酸或4-氨基苯硼酸频哪醇酯；所述第一催化剂为四三苯基膦钯、二(三叔丁基膦)钯、1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯、三(二亚苄基丙酮)二钯和醋酸钯中的任意一种或几种的组合；所述第一碱为碳酸钠、碳酸钾和碳酸氢钠中的任意一种或几种的组合；所述化合物3与4-氨基苯硼酸类化合物在第一催化剂、第一碱的摩尔比为0.50～1.20：0.50～2.00：0.04～0.20：2.00～6.00；所述回流反应在惰性气体保护下进行。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化合物2与化合物4的摩尔比为1.0～3.0：0.5～1.5；所述第二缩合反应，反应温度为25～70℃；所述第二缩合反应在惰性气体保护下进行。
6.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药中的任意一种，以及一种或多种药学上可接受的载体。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物剂型为皮下注射剂、皮内注射剂、喷雾剂、粉雾剂、外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、液体制剂中的一种或几种。
8.权利要求1所述的式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，或者权利要求6所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.权利要求1所述的式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，或者权利要求6所述的药物组合物在制备治疗肾癌药物中的应用。
10.权利要求1所述的式i所示的抗肾癌活性的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，或者权利要求6所述的药物组合物在制备治疗与肾癌相关疾病药物中的应用。
