本发明涉及生物医药，更具体地，涉及一种碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1及其制备方法和应用。
背景技术：
1、前列腺癌严重威胁男性的生命健康，其发病率和死亡率分别居世界男性的第二位和第五位。早期前列腺癌或局限性前列腺癌的主要治疗手段是根治性手术及雄激素剥夺治疗(androgen deprivation therapy，adt)，往往可以达到治愈的效果。但随着前列腺癌的进一步发展，几乎所有疾病早期对雄激素剥夺治疗敏感的前列腺癌患者都将产生激素抵抗，即去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer，crpc)。相关研究指出，由于前列腺癌起病隐匿，早期症状缺乏特异性，且目前我国尚缺乏针对前列腺癌有效的筛查项目，大部分患者自觉不适就医时乃至确诊时已发展至前列腺癌晚期，错失了手术治疗的最佳时机。因此临床上急需开发出新的治疗手段来治疗前列腺癌。
2、放射治疗是前列腺癌治疗过程中不可或缺的一种手段，大部分的前列腺癌患者均需行放射治疗，其中就包括了外放射治疗与内放射治疗(internal radiation therapy，irt)。irt是利用了放射性核素或是其标记的化合物能够在病变组织中靶向聚集的特性，将放射性核素带入人体内，利用放射性核素所发出的α、β射线，在病灶中产生足量的电离辐射生物效应，进而起到对病变区域组织的抑制或破坏作用，导致病变的组织细胞代谢紊乱、繁殖能力丧失、细胞衰老甚至凋亡。放射性核素所发出的α、β射线能量高、射程短，其治疗的关键是通过最大限度地损伤肿瘤，同时保护健康组织，从而达到较高的治疗效果。
3、核医学发展至今，已研究出了许多种成熟的放射性药物用于治疗，包括131i-治疗甲状腺癌，89sr治疗骨转移瘤、缓解骨痛，32p治疗真红细胞增多症，131i-mibg治疗嗜铬细胞瘤，211at-他莫昔芬治疗乳腺癌等。近年来，放射性核素标记多肽成为热门趋势，其优势是能迅速从血浆中清除并在靶组织中富集，从而使其骨髓毒性也较低。例如以生长抑素的类似物奥曲肽为基础的111in-dtpa-奥曲肽可用于多种奥曲肽受体阳性的肿瘤的治疗。
4、自然界来源的宿主防御肽(host defense peptides，hdps)，尤其是抗菌肽(antimicrobial peptides，amps)备受关注。抗菌肽通过破坏细菌、病毒和真菌的膜完整性或抑制某些细胞功能来抗细菌、抗病毒、抗真菌及抗癌。值得关注的是，在关于amps的2981个数据库中，以两栖动物为宿主的就有超过1000个，而以人类为宿主的仅200个。在两栖动物，如澳大利亚树蛙和蟾蜍的皮肤腺体分泌物中分离出多种宿主防御肽，这些多肽中的大部分都具有抗肿瘤和抗菌的作用。从澳大利亚树蛙(litoria属)腺体分泌物中分离得到的宿主防御肽caerin 1.1和caerin 1.9多肽已被证明具有多种生物活性，如抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗癌及免疫调节等。发明人研究团队前期研究已经证明了在一定浓度下，caerin1.1多肽及caerin1.9多肽对宫颈癌细胞、乳腺癌细胞及甲状腺未分化癌细胞等人类的多种肿瘤细胞均具有抑制作用，而关于caerin1.1多肽、caerin1.9多肽及其碘-131标记物：131i-caerin1.1和131i-caerin1.9对前列腺癌的作用目前还未见报道。另外，开发挖掘更多自然界来源的具有抗肿瘤作用的宿主防御肽具有重要意义。
技术实现思路
1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种小分子多肽tcmp-y1。
2、本发明的第二个目的在于提供一种碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1。
3、本发明的第三个目的在于提供所述碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1的制备方法。
4、本发明的第四个目的在于提供所述碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
5、本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
6、前期研究证明caerin1.1多肽、caerin1.9多肽对肺癌、黑素瘤等多种肿瘤有抑制作用，并且碘-131标记的131i-caerin1.1多肽、131i-caerin1.9多肽抗肿瘤活性更强，caerin1.1多肽、caerin1.9多肽及其碘-131标记物：131i-caerin1.1和131i-caerin1.9对前列腺癌的作用目前还未见报道。tcmp-y1多肽是从蟾蜍皮肤分泌物中分离和鉴定出来的小分子多肽，与caerin1.1、caerin1.9同为两栖动物来源的多肽。本发明通过研究和比较131i-caerin1.1、131i-caerin1.9和131i-tcmp-y1在前列腺癌细胞(du145)移植瘤中的治疗作用。从而探讨并比较131i-caerin1.1、131i-caerin1.9和131i-tcmp-y1在体外对前列腺癌细胞du145的增殖抑制作用及在体内对前列腺癌的治疗价值。
7、具体为：(1)利用mtt实验探究caerin1.1多肽、caerin1.9多肽及tcmp-y1多肽对前列腺癌细胞(du145)细胞的抑制作用并测定半抑制浓度(median inhibitionconcentration，ic50)；使用平板克隆形成实验验证caerin1.1多肽、caerin1.9多肽的抗肿瘤作用。
8、(2)采用氯胺-t(chloramine-t，ch-t)标记法制备131i-caerin1.1多肽、131i-caerin1.9多肽及131i-tcmp-y1多肽，测定其标记率、脂水分配系数及稳定性。
9、(3)通过细胞摄取及洗脱实验，比较前列腺癌细胞du145能否摄取131i-caerin1.1、131i-caerin1.9和131i-tcmp-y1以及它们在细胞内的滞留情况。进一步采用cck8细胞增殖毒性实验验证131i-caerin1.1、131i-caerin1.9和131i-tcmp-y1在体外对前列腺癌细胞du145的杀伤作用差异。
10、(4)建立前列腺癌细胞(du145细胞株)荷瘤裸鼠模型，通过131i-caerin1.1、131i-caerin1.9、131i-tcmp-y1、caerin1.1多肽、caerin1.9多肽及tcmp-y1多肽瘤内注射治疗，比较它们在体内抗肿瘤作用的差异。
11、结果显示：(1)caerin1.1多肽和caerin1.9多肽均对前列腺癌细胞有明显抑制增殖的作用，并且该作用对浓度增加而增强，两种多肽的ic50分别为10.87μg/ml及14.50μg/ml；而tcmp-y1多肽对前列腺癌细胞则无明显增殖抑制作用。
12、(2)利用氯胺-t标记法，得到的碘-131标记产物标记率均大于90％；且131i-caerin1.1、131i-caerin1.9为脂溶性，而131i-tcmp-y1则为水溶性，三者在体外不同环境下仍具有较高的稳定性，且131i-caerin1.1、131i-caerin1.9的稳定性更高。
13、(3)细胞摄取及洗脱实验证明131i-caerin1.1、131i-caerin1.9、131i-tcmp-y1都可以被du145细胞摄取并较稳定滞留在细胞内。在体内或体外条件下，与单纯多肽比较，131i-caerin1.1、131i-caerin1.9、131i-tcmp-y1均有更好的抗肿瘤细胞增殖和抑制肿瘤生长能力。
14、本发明研究表明131i-caerin1.1多肽、131i-caerin1.9多肽和131i-tcmp-y1多肽均可与前列腺癌细胞结合并稳定滞留，同时对前列腺癌细胞在体内体外均有抑制肿瘤细胞增殖和肿瘤生长的作用，同时呈水溶性的131i-tcmp-y1主要通过肾脏泌尿系统排泄，从而可减少放射性肝损伤的风险。本发明提供了caerin1.1多肽、caerin1.9多肽及其碘-131标记的131i-caerin1.1多肽、131i-caerin1.9多肽在前列腺癌治疗中的新用途，同时也提供了一种新的具有小分子多肽tcmp-y1。
15、具体地，所述小分子多肽tcmp-y1的氨基酸序列为yfkawgwpiddattehl-nh2，如seqid no.1所示，在获知氨基酸序列的基础上，本领域技术人员可通过本领域常规的多肽合成技术制备得到。
16、进一步地，所述碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1，为seq id no.1所示小分子多肽tcmp-y1的氨基酸基团上结合有放射性标记碘-131。
17、本发明还提供所述碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1的制备方法，为采用氯胺-t法，将小分子多肽tcmp-y1溶液、na-131i溶液与氯胺-t溶液室温震荡混匀，再利用层析法分离出131i标记的小分子多肽tcmp-y1，即得。
18、进一步地，所述tcmp-y1与na-131i的比例为40μg：1mci，该比例下131i标记率最高。
19、进一步地，所述tcmp-y1溶液质量浓度为1mg/ml，所述na-131i溶液的电离辐射为1mci(3.7×107bq)；所述氯胺-t溶液需现配现用，质量浓度为1mg/ml。
20、本发明还提供所述碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1在制备治疗肿瘤的药物中的应用，具体为碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1在制备肿瘤内照射治疗药物中的应用。
21、优选地，所述肿瘤包括但不限于前列腺癌。
22、本发明还提供一种肿瘤治疗药物，所述药物含有碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1。
23、进一步地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
24、本发明的药物的给药剂量取决于许多因素，例如所要治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。剂量水平须根据具体的给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史等来选定。但应认识到，本发明的药物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，给药的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
25、本发明还提供caerin1.1多肽或碘-131标记的caerin1.1多肽在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述caerin1.1多肽的氨基酸序列为gllsvlgsvakhvlphvlphvvpviaehl-nh2，碘-131标记的caerin1.1多肽为caerin1.1多肽的氨基酸基团上结合有放射性标记碘-131。
26、本发明还提供caerin1.9多肽或碘-131标记的caerin1.9多肽在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述caerin1.9多肽的氨基酸序列为glfgvlgsiakhvlphvvpviaekl-nh2，碘-131标记的caerin1.9多肽为在caerin1.9多肽的氨基酸基团上结合有放射性标记碘-131。
27、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
28、本发明提供了一种新的小分子多肽tcmp-y1，所述tcmp-y1多肽是从蟾蜍皮肤分泌物中分离和鉴定出来的，与caerin1.1、caerin1.9同为两栖动物来源的多肽。本发明研究表明131i-caerin1.1多肽、131i-caerin1.9多肽和131i-tcmp-y1多肽均可与前列腺癌细胞结合并稳定滞留，对前列腺癌细胞在体内体外均有抑制肿瘤细胞增殖和肿瘤生长的作用，同时呈水溶性的131i-tcmp-y1主要通过肾脏泌尿系统排泄，从而可减少放射性肝损伤的风险。本发明提供的新的具有抗肿瘤活性的小分子多肽tcmp-y1，为肿瘤治疗提供更多选择。同时本发明拓展了caerin1.1多肽、caerin1.9多肽、131i-caerin1.1多肽和131i-caerin1.9多肽的适用范围。
1.一种小分子多肽tcmp-y1，其特征在于，其氨基酸序列为yfkawgwpiddattehl-nh2。
2.一种碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1，其特征在于，所述小分子多肽tcmp-y1的氨基酸序列为yfkawgwpiddattehl-nh2，其氨基酸基团上结合有放射性标记碘-131。
3.权利要求2所述碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1的制备方法，其特征在于，为采用氯胺-t法，将小分子多肽tcmp-y1溶液、na-131i溶液与氯胺-t溶液室温震荡混匀，再利用层析法分离出131i标记的小分子多肽tcmp-y1，即得。
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，所述tcmp-y1与na-131i的比例为40μg：1mci。
5.权利要求2所述碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述肿瘤为前列腺癌。
7.一种肿瘤治疗药物，其特征在于，含有权利要求2所述碘-131标记的小分子多肽tcmp-y1。
8.根据权利要求7所述药物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料。
9.caerin1.1多肽或碘-131标记的caerin1.1多肽在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述caerin1.1多肽的氨基酸序列为gllsvlgsvakhvlphvlphvvpviaehl-nh2，碘-131标记的caerin1.1多肽为caerin1.1多肽的氨基酸基团上结合有放射性标记碘-131。
10.caerin1.9多肽或碘-131标记的caerin1.9多肽在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述caerin1.9多肽的氨基酸序列为glfgvlgsiakhvlphvvpviaekl-nh2，碘-131标记的caerin1.9多肽为在caerin1.9多肽的氨基酸基团上结合有放射性标记碘-131。
