本发明属于食品、保健品和医药领域，涉及含有灵芝孢子油、灵芝多糖和灵芝醇提物的复方制剂，特别涉及含有灵芝孢子油、灵芝多糖和灵芝醇提物的磷酯酰丝氨酸脂肪乳复方制剂。
背景技术：
1、
2、到目前为止，已从灵芝中分离出近200多种化合物，有多糖类、核苷类、呋哺类、甾醇、生物碱类及氨基酸类。灵芝多糖主要有葡萄糖、阿拉伯半乳聚糖、肽多糖、杂多糖、甘露葡萄糖、半乳葡萄糖、葡聚糖。灵芝生物碱类和核苷类主要有含有腺嘌呤核苷、尿嘌呤核苷、灵芝苷、胆碱、甜菜碱、腺嘌呤、尿嘧啶、γ三甲氨基丁酸、灵芝碱甲、灵芝碱乙、灵芝嘌呤。灵芝所含氨基酸和蛋白质主要有天门冬氨酸、苏氨酸、谷氨酸、甘氨酸、胱氨酸、缬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸、免疫蛋白lz-8和多种酶。灵芝还含有钼、锌、镉、铅、钴、镍、锰、铁、磷、硼、镁、钙、铜、铬、钒、镧、铍、钇、镱、钡、锗及硒等多种微量元素和灵芝三萜类化合物。已从灵芝子实体、菌丝体、孢子粉中分离得100多种三萜类成分，主要是；灵芝酸，灵芝-22-烯酸，灵芝孢子酸，赤芝孢子内脂a、b，灵芝醇，丹芝醇a、b.环氧灵芝醇a、b、c，灵芝萜烯二醇，灵芝萜烯三醇，灵芝醛a、b，赤芝萜酮a、b、c，灵芝甾酮，麦角甾酮，麦角甾醇及其衍生物，麦角甾类化合物，羊角甾类化合物，胆甾类化合物，β-谷甾醇等。
3、按照提取的方法，已经应用在保健品中的灵芝的药用活性成分大致可以分为三类：灵芝孢子油、灵芝多糖和灵芝醇提物。这三种不同方法提取的原料含有的活性成分不同，其生物活性和保健作用也有很大差异。灵芝孢子油中富含三萜、脂肪酸等油溶性化合物，灵芝多糖是灵芝水溶性提取物的主要成分，而乙醇提取物包含了灵芝皂甙、甾醇、黄酮和异黄酮、少量的醇溶性萜类。三类提取物的溶解性的巨大差异，使得他们很难混合在一起，很难制备成同时包含灵芝多组分的单一制剂。
4、灵芝孢子油主要含有油溶性化合物，最多的是三萜类化合物和脂肪酸。灵芝三萜具有抗氧化、保肝、增强免疫力、抗肿瘤、降血脂血糖、防治心血管疾病、缓解哮喘等作用。芝三萜具有广谱的抗癌特性，主要包括抗癌细胞转移、抗增殖和抗癌病灶血管生成活力。灵芝有抗肿瘤双向免疫调节，多途径和靶向抑制杀死肿瘤细胞。杜国华等利用灵芝的三萜化合物对肿瘤靶点进行活性验证，发现灵芝能促进巨噬细胞和nk细胞活性，促进树突状细胞成熟、分化和抗原呈递功能，激活淋巴细胞，增强细胞毒性t细胞功能，抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，进而杀死肿瘤细胞。灵芝能对肿瘤细胞的形成、生长、迁移、转移和粘附进行抑制，使肿瘤缩小和消失，促进肿瘤细胞向正常细胞分化。灵芝的活性成分可以对肿瘤细胞中的端粒酶活性造成破坏，阻断肿瘤细胞分裂。灵芝通过影响细胞周期和细胞内钙信号传导来抑制肿瘤细胞的生长。灵芝可抑制血管内皮细胞增殖，控制肿瘤血管生成量，阻止肿瘤细胞营养供给，阻止肿瘤生长。闫征等将灵芝三萜类化合物用于抗肿瘤细胞的活性研究中，发现灵芝酸y对肺癌细胞h460表现出显著的抑制活性。
5、灵芝多糖是灵芝水溶提取物中的最大量、最主要化合物成分。灵芝多糖对多种癌细胞具有抑制作用。zhang等发现灵芝β-葡聚糖磷酸化衍生物对人慢性髓原白血病细胞株k562和小鼠白血病细胞株l1210均有抑制作用，且抗肿瘤活性强弱与取代度大小有关，取代度越大抗肿瘤活性越强。song等在灵芝孢子提取的多糖成分中加入巨噬细胞上清液后，能显著抑制肝癌h22细胞的增殖，表明多糖成分是激活巨噬细胞起到抗肿瘤活性的物质基础。灵芝多糖成分可以通过抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶信号通路，降低akt磷酸化水平，同时在mrna翻译后下调h22细胞中b淋巴细胞瘤-2(b-cell lymphoma-2，bcl-2)的表达，上调与bcl-2同源的水溶性相关蛋白的表达，调节肿瘤微环境中的m1和m2巨噬细胞比例，激活线粒体介导的凋亡信号通路中的基因和蛋白质，增加活性氧(reactive oxygen species，ros)的产生，达到激活免疫反应，诱导h22细胞周期停滞凋亡的效果[6]。chen发现灵芝孢子中提取的β-1,3-葡聚糖可以辅助吉西他滨抗肿瘤，研究中指出，β-1,3-葡聚糖能够显著降低乳腺癌和肺癌化疗引起的单核细胞型髓系来源抑制性细胞的增加，降低m2比例的同时增加m1的数量，促进具有杀伤肿瘤细胞作用的th1、抗肿瘤t细胞和细胞毒性t淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte，ctl)的增殖与分化，逆转吉西他滨引起的t细胞耗竭，进一步增强吉西他滨的抗肿瘤作用。综上，灵芝多糖可以通过直接介导肿瘤细胞、调节先天性免疫细胞介导肿瘤细胞以及间接激活适应性免疫反应等机制来达到抗肿瘤的目的，也可以作为“佐剂”与化疗药物联合使用，具有增强药效、降低毒副作用以及减少不良反应等优点。
6、灵芝醇提物是溶解在乙醇中的，极性介于油溶和水溶之间的一类化合物。是适时采收成熟的灵芝新鲜子实体，烘干后采用酒精提取、真空浓缩、喷雾干燥等工艺得到的灵芝浸膏粉。灵芝醇溶物是高倍浓缩而成的灵芝的溶解于乙醇中的部分有效活性成分。灵芝乙醇提物中含有丰富醇溶性化合物，比如灵芝皂甙、甾醇、黄酮和异黄酮、核苷、少量醇溶三萜、醇溶多糖等成分。而这些化合物在孢子油和水提物中相对很少，其药用活性未受到重视和研究。
7、灵芝孢子油、灵芝多糖以及灵芝醇提物都是不同方法提取的灵芝初级原料，每一类都仅仅包含了灵芝的部分活性成分，它们以其在不同极性溶剂中的溶解度而被提取精制。这三类灵芝初级提取原料依其本身化学结构的性质而分别能够溶解在植物油、乙醇和水中。诸多研究已证明，灵芝多糖和灵芝孢子油都有直接杀死癌细胞，和协助抗癌，阻断癌细胞转移的作用。两者的抗癌作用机制有类同点，也有区别，既协同又互补。灵芝孢子油和灵芝多糖单独开发的产品也都分别被用于抗癌和其它疾病防治领域，灵芝抗肿瘤功效已经获得科技界和临床医生的认可。灵芝的乙醇提取物研究的并不深入，但是皂甙类化合物、甾醇、黄酮和核苷都有很强的药用功效，很多天然植物的皂甙、甾醇、黄酮和核苷已经被证明在抗癌、消炎镇痛、提高免疫力、保肝护胆、抵御神经退化性病变、增强肌体抗疲劳等方面具有治疗功效，也被开发成为临床药品。目前灵芝的临床应用和保健品开仍然处于初级阶段，非常局限。保健品和药品多以单纯的水提取物、多糖、或者孢子油为原料单独开发成产品。这些灵芝局部部位的提取物仅仅含有部分药用有效成分，显然未充分发挥灵芝的整体功效(cn113876817a，cn113598356a，cn114848688a)。为了强化抗癌效果，研发人员尝试着用水提物、孢子粉与其它中药配伍制成复方。专利cn1001559084b采用灵芝醇水提取物与其它中药配伍，专利cn101380346b用赤芝、紫芝及其包子粉与其它中药配伍，不难发现这些发明也都仅仅限于灵芝的水提取物。目前对灵芝孢子粉的利用多为使用破壁后的灵芝孢子粉，比如cn101120977采用了破壁孢子粉中的水醇提物。也有利用灵芝孢子油与其他抗癌药物的联合使用的发明，专利cn101596225b采用灵芝孢子油与其它中药配伍。cn105079046a专利试图将灵芝孢子油、赤芝提取物、紫芝提取物、脱脂孢子粉提取物以物理方法全部混合在一起，采用蜂蜡作为助溶剂/助悬剂将上述物料机械混合固化，实质上这个方法也仅仅是在灵芝孢子油软胶囊的基础上添加了少量灵芝水提物。没有从根本上解决灵芝孢子油和灵芝油溶成分在水中的均匀分散溶解难题，也没有改变灵芝孢子油中的油溶活性成分的生物利用度低的问题，所以混合物的质量和保健效果很难控制。虽然该专利希望利用和发挥灵芝全药功效的想法非常合理，但是解决问题的方法过于简单，没有技术上的突破，很难达到美好的目标。
8、文献检索，未见灵芝孢子油、灵芝多糖和灵芝醇提物配伍的复方产品和专利的报道，究其原因：1)、是没有找到“如何将灵芝的油溶活性成分和水溶活性成分均匀有效的混合在一起的方法”；2)、一些灵芝活性成分，特别是含有多不饱和键的脂肪酸和三萜化合物的稳定性差，容易氧化分解。本发明针对灵芝产品开发中存在的问题，采用磷脂酰丝氨酸脂肪乳包裹灵芝孢子油，将灵芝孢子油ps脂肪乳与灵芝多糖和灵芝醇提物混合制备成稳定的《灵芝全药多活性组分复方脂肪乳制剂》。该发明发挥了灵芝全药的多化合物组分、多靶点特点，保健治疗效果更加有效。
9、本发明采用的磷酯酰丝氨酸是两亲性天然产物，能够作为乳化剂制备脂肪乳。磷脂酰丝氨酸除了作为制备脂肪乳的包材外，本身还具有确切的保健功效：1)、起到灵芝多糖、灵芝皂甙提高免疫力的佐剂的作用。2)、缓解压力，促进抗疲劳恢复体力。3)、帮助修复细胞，磷脂酰丝氨酸是细胞的主要成分之一，可营养和活化各种酶的活性，能减少化疗对机体的伤害，有助于修复、更新受损细胞和清除有害物质。
10、采用磷酯酰丝氨酸包裹的灵芝孢子油解决了孢子油在水中的溶解分散，显著提高了灵芝孢子油的药用和保健品功效，改善了口服产品的吸收和生物利用度。ps脂肪乳亦能够作为佐剂提高灵芝多糖和灵芝皂甙的免疫强化作用。本发明的方法首次将磷脂酰丝氨酸、灵芝孢子油、灵芝多糖和灵芝醇提物四类活性成分制备成了产品稳定、质量可控、疗效显著的脂肪乳制剂，发挥了灵芝全药活性成分的功效。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种含有灵芝孢子油的灵芝全药复方磷脂酰丝氨酸脂肪乳制剂。
2、本发明所述的脂肪乳制剂，由以下成分加工制成：
3、(1)灵芝孢子油，(2)灵芝多糖，(3)灵芝醇提物，(4)磷酯酰丝氨酸作为主要脂肪乳包材，(5)助乳化剂卵磷脂，(6)助乳化剂油酸，(7)抗氧化剂维生素e，(8)调味剂或者等渗调节剂。
4、具体的，本发明所述的脂肪乳制剂，由以下成分加工制成：
5、 名称 重量比(％) 灵芝孢子油 10-40 灵芝多糖 10-40 灵芝醇提物 2-10 磷酯酰丝氨酸 2-10 卵磷脂 0.1-0.3 油酸 0.1-0.5 维生素e 0.02-0.08 矫味剂 适量 注射用水 适量
6、优选的，本发明所述的脂肪乳制剂，由以下成分加工制成：
7、 名称 重量比(％) 灵芝孢子油 20-30 灵芝多糖 20-30 灵芝醇提物 3-8 磷酯酰丝氨酸 2-8 卵磷脂 0.2 油酸 0.3 维生素e 0.05 矫味剂 适量 注射用水 适量
8、其中，灵芝孢子油：灵芝多糖：灵芝醇提物三者的比例范围可以是：1：3:0.1—3:1:0.1；最好是：1:2:0.1—2:1:0.1。
9、其中，磷酯酰丝氨酸为：大豆磷酯酰丝氨酸、葵花籽磷酯酰丝氨酸、棉花籽磷酯酰丝氨酸、花生籽磷酯酰丝氨酸、松籽磷酯酰丝氨酸、蛋黄磷酯酰丝氨酸、合成磷酯酰丝氨酸的一种或几种，亦可以是几种不同磷酯酰丝氨酸以任意比例的混合物。
10、其中，卵磷脂助乳化剂为：大豆磷脂、蛋黄磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、合成卵磷脂中的一种或几种，亦可以是几种不同磷脂以任意比例的混合物。
11、其中，油酸助乳化剂为：油酸或者油酸钠。
12、其中，灵芝孢子油应该经过精制提纯，其灵芝酸含量不低于2％。
13、其中，矫味剂为药品、食品领域中常用的矫味剂。
14、其中，灵芝醇提物，可以在市场上购买到或者根据常规方法制备得到，以下列举一种灵芝醇提物的制备方法。
15、灵芝醇提物的制备方法：
16、灵芝粉碎，加75％乙醇回流提取二次，每次1小时，滤过，合并滤液，黏度为1.36～1.38(60～70℃)的稠膏，真空烘干，粉碎，备用。
17、根据实施例之一，本发明所述的脂肪乳制剂，由以下成分加工制成：
18、 名称 重量比(％) 投料量(g) 灵芝孢子油 30 300 灵芝多糖 30 300 灵芝醇提物 3 30 磷酯酰丝氨酸 8 80 卵磷脂 0.2 2 油酸 0.2 2 维生素e 0.05 0.5 矫味剂 适量 适量 注射用水 适量 适量
19、原辅料在处方中的作用：
20、 辅料名称 辅料处方作用 灵芝孢子油 富含三萜类化合物，提高免疫力、抗癌、保肝护肝、抗衰 灵芝多糖 灵芝多糖类化合物，提高免疫、抗癌 灵芝醇提物 灵芝皂甙、甾醇、黄酮，抗癌、提高免疫、消炎 磷酯酰丝氨酸 免疫佐剂、神经保护、保护细胞、乳化剂、营养剂 卵磷脂 助乳化剂 油酸 助乳化剂 维生素e 抗氧化剂 矫味剂 改善制剂的口感
21、本发明的另一个目的在于提供脂肪乳制剂的制备方法，包括以下步骤：
22、1)按配方备料；
23、2)将灵芝孢子油加入反应釜中，在氮气保护下加热至油温达30-70℃
24、后，将磷酯酰丝氨酸、油酸、ve加入油中，在搅拌下使加入的物质完全溶解；
25、3)将灵芝醇提物溶解在少量乙醇，加入卵磷脂(醇提物与卵磷脂形成复合物，增加溶解性)，在适量的纯净水中加入灵芝多糖，然后与乙醇溶液混合，制备成水溶液备用；
26、4)在搅拌并氮气保护下，将预先制备的灵芝孢子油溶液缓慢加入水溶液中，可以使用均质机、微射流泵等设备进行整粒以控制粒径；
27、5)加入余量的纯净水达到规定容量，搅拌,加入矫味剂；
28、6)灌装，高温灭菌，即得含有灵芝孢子油、灵芝多糖和灵芝醇提物的磷酯酰丝氨酸脂肪乳复方制剂。
29、整个生产过程在氮气保护下进行。
30、取处方量精制灵芝孢子油、加入磷酯酰丝氨酸、油酸和抗氧化剂维生素e，加热搅拌10min使之完全溶解。取少量乙醇溶解灵芝醇提物和卵磷脂，另取注射用水，加入灵芝多糖、缓冲剂，并于乙醇灵芝醇提物溶液混合。在氮气保护的条件下，将灵芝孢子油溶液缓慢的加入用剪切机高速搅拌(3000r/min)的灵芝多糖/灵芝醇提物水溶液中，在氮气保护的条件下继续搅拌30min，即得初乳溶液。经高压均质机均质数次，压力为100mpa，至脂肪乳的粒径范围在180-300nm，调节ph 7.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封，121℃灭菌15min，最终产品应该是均匀的乳状溶液，没有沉淀、分层和飘油现象。灯检合格后，包装。在25℃以下贮藏。如果是固体制剂，在定溶、分装后，冻干。加入其它辅料制备成各种口服制剂。本发明的工艺流程图参见图2。
31、本发明所述的脂肪乳制剂可以是，口服液、糖浆剂、冻干粉、冻干粉胶囊、冻干粉冲剂、片剂。
32、本发明的另一个目的在于提供脂肪乳制剂在制备抗氧化、抗疲劳、保肝、增强免疫力、抗肿瘤、帮助睡眠、安神镇静、缓解老年痴呆症状、降血脂血糖、防治心血管疾病、改善骨质疏松的药物中的应用。
33、本发明针对灵芝产品开发的技术需求：油溶物质不能与水混溶、生物利用度低、一些化合物容易氧化分解、不能同时利用灵芝不同方法提取的活性成分制备成单一制剂等问题。采用本发明技术和工艺，达到了以下重要目标：1)、以磷脂酰丝氨酸脂肪乳技术将灵芝孢子油(含有油溶性活性成分)制备成了稳定的液体；卵磷脂辅助提高了醇提物在脂肪乳和水中的溶解性，可以实现脂肪乳包裹的灵芝孢子油与灵芝多糖和醇提物均匀混合；2)、ps脂肪乳能够促进油溶活性成分、皂甙和甾醇化合物的吸收和提高生物利用度。能够作为佐剂强化灵芝多糖、皂甙的免疫活性；3)、发挥了磷脂酰丝氨酸、灵芝孢子油、灵芝多糖和灵芝醇提物中的化合物的协同、互补保健治疗作用。有效实现了灵芝全药多组分活性成分的组方，丰富和强化了灵芝全药多成分形成单一脂肪乳制剂的临床药用，见图1。
34、该脂肪乳复方制剂包含的灵芝孢子油，具有免疫调节作用、抗肿瘤作用、保肝护肝作用、营养神经、改善睡眠作用以及增强体力和抗疲劳作用。包含的灵芝多糖，具有抗衰老、治疗老年痴呆、治疗帕金森、神经保护、提高免疫力的功效、辅助抗癌作用。醇提物中含有的灵芝萜类、皂甙、甾醇、核苷具有广泛的保健治疗作用。含有的磷酯酰丝氨酸，兼具乳化剂和免疫佐剂、健脑、抗衰、和神经保护的药效。含有上述磷脂酰丝氨酸、灵芝孢子油、灵芝多糖和醇提物的复方脂肪乳很好的解决了灵芝孢子油的水溶性，提高了灵芝孢子油的稳定性，实现了灵芝孢子油、灵芝多糖和醇提物的均匀混合，能够保证灵芝全药多活性成分配伍。含有灵芝孢子油、灵芝多糖和灵芝醇提物的磷脂酰丝氨酸复方脂肪乳发挥了灵芝孢子油、灵芝多糖、灵芝醇提物和磷酯酰丝氨酸的协同保健治疗作用。
1.一种含有灵芝孢子油的复方制剂，其特征在于，由以下成分按照重量百分比制成：
2.根据权利要求1所述的复方制剂，其特征在于，由以下成分按照重量百分比制成：
3.根据权利要求1所述的复方制剂，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的复方制剂，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的复方制剂，其特征在于，
6.根据权利要求1所述的复方制剂，其特征在于，复方制剂为磷酯酰丝氨酸脂肪乳。
7.根据权利要求1所述的复方制剂，其特征在于，由以下成分按照重量百分比制成：
8.权利要求1所述的复方制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.权利要求1所述的复方制剂在制备抗氧化、抗疲劳、保肝、增强免疫力、抗肿瘤、帮助睡眠、安神镇静、缓解老年痴呆症状、降血脂血糖、防治心血管疾病、改善骨质疏松的药物中的应用。
