本发明涉及分离材料制备领域，具体地说是涉及一种用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱的制备方法及其应用。
背景技术：
1、高效液相色谱法以液体为流动相，采用高压输液系统，将不同极性的溶剂泵入具有固定相填料的色谱柱中，不同成分在色谱柱中分离，并流入检测器中进行分析，但是常见的色谱柱具有分离模式单一、柱压高、成本高等不足，且用来分析中药易造成色谱柱填料的损坏。
2、石斛始载于《神农本草经》，并列为上品，谓：“味甘、平，无毒。主伤中，除痹，下气，补五脏虚劳、羸弱、强阴。其药用价值丰富，药用历史距今已有两千多年，可以强健体魄、延年益寿，因此被传统中医列为滋补上品。流苏石斛益胃生津，生津止渴。用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明。流苏石斛中化学成分包括联苄及其衍生物类、菲类及其糖苷类、苯丙素及其衍生物类、芴酮类、小分子酚酸类、醌类、多糖类、甾体类等，其成分以糖苷类成分居多，在抗氧化活性等方面作用突出。有研究表明其浸膏有抗肿瘤作用，但对其具有抗肿瘤作用的成分研究较少，因此，需要寻找一种方法对其中具有抗肿瘤作用的有效成分进行富集纯化和筛选。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱的制备方法及其应用，以克服传统色谱固定相分离模式单一、操作时间长、流动相所需溶剂量大等缺点。
2、本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
3、一种用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱的制备方法，包括如下步骤：
4、（1）将偶氮二异丁腈、金属有机框架材料mip-202、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸十四酯、正十二醇、正丙醇、乙二醇二甲基丙烯酸酯依次混合，经超声振荡后得整体柱预聚溶液；
5、（2）将整体柱预聚溶液倒入一个一端密封一端开口的不锈钢空柱管中，密封开口端，于55-65℃下水浴10-12h，取出经冲洗即得用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱。
6、进一步的，所述偶氮二异丁腈、金属有机框架材料mip-202、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸十四酯、正十二醇、正丙醇及乙二醇二甲基丙烯酸酯的用量比为0.010-0.030g：0.005-0.006g：0.1-0.3ml：0.1-0.3ml：1.2-2.4ml：1.2-2.4ml：0.5-0.8ml。
7、进一步的，所述冲洗是将水浴后的不锈钢空柱管与高效液相系统相连，以100%甲醇为流动相，以1 ml/min的流速冲洗1.5 h。
8、一种用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的方法，采用前述用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱作为固相萃取吸附剂，与高效液相色谱联用，对流苏石斛中有效化学成分进行分离筛选。
9、其中，在对流苏石斛中有效化学成分进行初步分离时，首先，用流动相1平衡整体柱，注入一定量的流苏石斛提取液，采用流动相1将样品带入整体柱中，此时部分成分吸附在整体柱中，其余成分随流动相1馏出，得流动相1馏出液；然后，采用流动相2对吸附在整体柱上的成分进行洗脱，收集流动相2洗脱液；挥干流动相1馏出液和流动相2洗脱液中的溶剂，得初步分离洗脱液。
10、所述流动相1和流动相2均为乙腈和水的混合溶液；其中，流动相1中，乙腈和水的体积比为20∶80，流动相2中，乙腈和水的体积比为70∶30。
11、在对活性组分进一步分离与筛选时，将初步分离洗脱液经过反相半制备柱进行进一步分离，收集洗脱时间为16-18 min的洗脱液，通过cck-8法检测不同部分的洗脱液对人肝癌细胞hepg-2的细胞毒性来对流苏石斛中有效化学成分进行筛选。
12、本发明的有益效果在于：
13、采用本发明方法制备得到的混合模式整体柱，具有较好的机械强度和渗透性，通过调节流动相中有机相的比例，可实现疏水和亲水分离模式的转变。混合模式整体柱可以用于对流苏石斛中抗肿瘤活性成分的分离筛选。本发明方法新颖、系统简单、易操作、成本低、耗时短，在复杂样品分析中具有优势。
1.一种用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱的制备方法，其特征在于，所述偶氮二异丁腈、金属有机框架材料mip-202、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸十四酯、正十二醇、正丙醇及乙二醇二甲基丙烯酸酯的用量比为0.010-0.030g：0.005-0.006g：0.1-0.3ml：0.1-0.3ml：1.2-1.9ml：1.2-1.9ml：0.5-0.7ml。
3.根据权利要求1所述的用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱的制备方法，其特征在于，所述冲洗是将水浴后的不锈钢空柱管与高效液相系统相连，以100%甲醇为流动相，以1 ml/min的流速冲洗1.5 h。
4.一种用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的方法，其特征在于，采用权利要求1所述制备方法制备的用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱作为固相萃取吸附剂，与高效液相色谱联用，对流苏石斛中有效化学成分进行分离筛选。
5.根据权利要求4所述的用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的方法，其特征在于，首先，向所述用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的混合模式整体柱中注入流动相1和流苏石斛提取液，收集流动相1馏出液；然后，注入流动相2，收集流动相2洗脱液；挥干流动相1馏出液和流动相2洗脱液中的溶剂，得初步分离洗脱液。
6.根据权利要求5所述的用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的方法，其特征在于，所述流动相1和流动相2均为乙腈和水的混合溶液；其中，流动相1中，乙腈和水的体积比为20∶80，流动相2中，乙腈和水的体积比为70∶30。
7.根据权利要求5所述的一种用于流苏石斛中有效化学成分分离筛选的方法，其特征在于，将初步分离洗脱液经过反相半制备柱进行分离，收集洗脱时间为16-18 min的洗脱液，再经过正相半制备柱进行分离得到不同部分的洗脱液，通过cck-8法检测不同部分的洗脱液对人肝癌细胞hepg-2的细胞毒性来对流苏石斛中有效化学成分进行筛选。
