本发明属于化学检测，涉及一种跌打镇痛膏中黄芩苷的提取方法、含量测定方法和应用。
背景技术：
1、跌打镇痛膏是一种中成药，由中药马钱子、土鳖虫、生草乌、大黄、降香、两面针、黄芩、黄柏和虎杖粉碎成细粉，再与冰片、薄荷素油、樟脑、水杨酸甲酯、薄荷脑和基质混合，再与合适的衬材结合，制成的橡胶膏剂。跌打镇痛膏具有活血止痛，散瘀消肿，祛风胜湿的功效，用于缓解急、慢性扭挫伤带来的疼痛，慢性腰腿痛及风湿关节痛等症状。
2、黄芩，又名腐肠(《本经》)，黄文、妒妇、虹胜、经芩、印头、内虚(《吴普本草》)，葿(《广雅》)，空肠(《别录》)，子芩、宿芩(陶弘景)，尾芩(《新修本草》)，条芩(《纲目》)，元芩、土金茶根(《东北药用植物志》)，山茶根。中药黄芩为唇形科黄芩属植物黄芩的根。原植物黄芩scutellaria baicalensis georgi。中医认为黄芩苦、寒，归肺、心、肝、胆、大肠经。黄芩清热泻火，燥湿解毒，止血安胎，主治肺热咳嗽，热病高热神昏，肝火头痛，目赤肿痛，湿热黄疸，泻痢热淋，吐衄崩漏，胎热不安，痈肿疔疮。现代医学显示，黄芩及其煎剂具有抗微生物、调节细胞免疫、降低血压、利尿、降血脂、对缺血再灌注损伤保护、抗血小板聚集、抗氧化及抗肿瘤等作用。
3、黄芩苷是中药黄芩中有效成分之一，属于生物黄酮类物质。黄芩苷的化学结构式如下：
4、
5、《黄芩苷对类风湿关节炎模型小鼠的治疗作用和机制》一文(山东大学，博士学位论文，王春晓，2019年3月16日)中记载，黄芩苷能够有效降低类风湿关节炎模型小鼠外周血tnf-α、il-1β和il-6的水平，具有缓解类风湿关节炎疾病状态的作用；黄芩苷能够抑制类风湿关节炎小鼠滑膜及滑液中inos和cox-2表达，促进单核细胞的凋亡，同时能够降低类风湿关节炎小鼠滑膜及滑液中基质金属蛋白酶mmp-2和mmp-9的表达，减轻对关节软骨的降解作用。
6、《黄芩苷经tlr2/nf-κb途径减轻类风湿关节炎大鼠滑膜炎》一文(中国药理学通报，网络出版时间2017年10月10日，33(11)：1569-73)中记载，30mg/kg或60mg/kg剂量的黄芩苷均能明显减弱大鼠滑膜组织中成纤维细胞的增殖及炎性损伤程度，明显降低滑膜组织tlr2及myd88 mrna的表达，明显减弱tlr2、myd88及nf-κb p65蛋白的表达，证明了黄芩苷具有良好的抗类风湿关节滑膜炎的作用，其可能是通过抑制tlr2-nf-κb信号通路的活化来实现的。可见，跌打镇痛膏原料中黄芩的有效成分黄芩苷是跌打镇痛膏起效的重要成分之一。
7、《中华人民共和国药典》2020年版一部中记载了“跌打镇痛膏”及其质量标准，然而，该标准仅对药材进行鉴别检验，并未记载有效成分黄芩苷的含量检测方法。
8、中国专利申请201711364411.9提供了一种ase-hplc法测定黄芩中黄芩苷含量的方法。该技术采用ase法对黄芩进行提取：将黄芩样品粉碎，过筛，与硅藻土混合，装入萃取池中，使用70％的甲醇进行萃取，离心取上清液，得到的上清液使用hplc进行黄芩苷的含量测定，得黄芩苷含量。该方法提取效果好、重复性高，检测精度高。然而，由于跌打镇痛膏中除了黄芩还含有大量其他药物和基质，该方法不能提供跌打镇痛膏中黄芩苷含量的检测方法。
9、中国专利申请201610452980.8提供了一种跌打镇痛膏质量标准及其检验方法，包括鉴别项、检查项、挥发油项以及含量测定项。所述鉴别项包括显微鉴别和挥发油鉴别，所述检查项包括对士的宁的定性检查、乌头碱的定性检查、含膏量测定；所述挥发油项为挥发油总量的测定；所述含量测定项为以气相色谱法对樟脑进行定量检测。然而，该质量标准未涉及黄芩苷含量的检验。
10、综上，现有技术均不能提供一种跌打镇痛膏中黄芩苷含量检测方法，也不能提供一种基于黄芩苷含量检测的跌打镇痛膏质量标准。
技术实现思路
1、有鉴于此，针对现有技术均不能提供一种跌打镇痛膏中黄芩苷含量检测方法，也不能提供一种基于黄芩苷含量的跌打镇痛膏质量标准的瓶颈问题，本发明的目的是提供一种跌打镇痛膏中黄芩苷的提取方法、含量测定方法和应用。
2、为实现上述发明目的，一方面，本发明提供一种跌打镇痛膏中黄芩苷的提取方法，包括以下步骤：
3、取跌打镇痛膏与乙醇水溶液混合，回流提取，滤过得滤液和滤渣，洗涤容器和所述滤渣，得到的洗液过滤后与所述滤液合并，得提取液。
4、优选地，所述跌打镇痛膏与乙醇水溶液混合之前，将跌打镇痛膏剪成尺寸为0.5-1.5cm2的小块，除去盖衬。
5、更优选地，且作为本发明的实例，所述跌打镇痛膏与乙醇水溶液混合之前，将跌打镇痛膏剪成尺寸为1.0cm2的小块，除去盖衬。
6、优选地，所述跌打镇痛膏与所述乙醇水溶液的用量比例为10：10-100(cm2：ml)。
7、更优选地，所述跌打镇痛膏与所述乙醇水溶液的用量比例为10：25-50(cm2：ml)。
8、再优选地，且作为本发明的实例，所述跌打镇痛膏与所述乙醇水溶液的用量比例为10：50(cm2：ml)。
9、优选地，所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为30％-70％。
10、更优选地，所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为30％。
11、优选地，所述回流提取的时间为0.5-1.5h。
12、更优选地，所述回流提取的时间为1h。
13、另一方面，本发明提供一种跌打镇痛膏中黄芩苷的含量测定方法，包括以下步骤：
14、s1、采用上述的提取方法，对跌打镇痛膏中的黄芩苷进行提取，得提取液；
15、s2、将黄芩苷对照品溶于甲醇，制得黄芩苷对照品溶液；
16、s3、将步骤s2得到的黄芩苷对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，计算校正因子f值，对步骤s1得到的提取液注入高效液相色谱仪检测，根据校正因子f值计算跌打镇痛膏中黄芩苷含量。
17、其中，步骤s3中，对步骤s2得到的黄芩苷对照品溶液和对步骤s1得到的提取液注入高效液相色谱仪检测的色谱条件相同。
18、优选地，步骤s2中所述高效液相色谱的色谱条件包括：
19、色谱柱：c18色谱柱；
20、流速：0.9-1.1ml/min；
21、洗脱方式：等度洗脱；
22、柱温：30-40℃；
23、流动相：甲醇-磷酸水溶液；
24、检测波长：190-400nm。
25、更优选地，步骤s2中所述高效液相色谱的色谱条件还包括：
26、色谱仪：赛默飞ultimate 3000高效液相色谱仪或安捷伦1260高效液相色谱仪；
27、检测器：dad检测器或vwd检测器。
28、更优选地，所述c18色谱柱选自shimnex cs c18柱(250mm×4.6mm，5μm)、agilentzorbax sb-c18(4.6mm×250mm，5μm)、月旭ultimate ods-3c18柱(4.6mm×250mm，5μm)。
29、再优选地，所述c18色谱柱为shimnex cs c18柱(250mm×4.6mm，5μm)。
30、更优选地，所述甲醇-磷酸水溶液中甲醇和磷酸水溶液的体积比为40：60～50：50。
31、更优选地，所述甲醇-磷酸水溶液中甲醇和磷酸水溶液的体积比为47：53～44：56。
32、再优选地，所述甲醇-磷酸水溶液中甲醇和磷酸水溶液的体积比为44：56。
33、更优选地，所述流速为1.000ml/min；所述柱温为35℃。
34、更优选地，所述磷酸水溶液中磷酸的质量分数为0.1％-0.5％。
35、再优选地，所述磷酸水溶液中磷酸的质量分数为0.2％。
36、更优选地，所述黄芩苷的检测波长为278nm。
37、再一方面，本发明提供了上述提取方法或上述的含量测定方法在跌打镇痛膏中黄芩苷含量检测中的应用。
38、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
39、(1)本发明提供了一种从成分复杂的跌打镇痛膏中提取黄芩苷的方法。该方法能够充分地提取跌打镇痛膏中的黄芩苷。
40、(2)本发明基于跌打镇痛膏中黄芩苷的高效提取方法，提供了一种跌打镇痛膏中黄芩苷的高效检测方法，具有良好的专属性、精密度、稳定性、重复性，回收率可达97.59％-102.80％，同时具有良好的耐用性。
41、(3)本发明提供的跌打镇痛膏中黄芩苷的含量测定方法可以应用于跌打镇痛膏质量标准的制定，填补了相关标准的空白。
1.一种跌打镇痛膏中黄芩苷的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述跌打镇痛膏与乙醇水溶液混合之前，将跌打镇痛膏剪成尺寸为0.5-1.5cm2的小块，除去盖衬。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述跌打镇痛膏与所述乙醇水溶液的用量比例为10：10-100(cm2：ml)。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为30％-70％。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述回流提取的时间为0.5-1.5h。
6.一种跌打镇痛膏中黄芩苷的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的含量测定方法，其特征在于，步骤s2中所述高效液相色谱的色谱条件包括：
8.根据权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于，步骤s2中所述高效液相色谱的色谱条件还包括：
9.根据权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于，所述c18色谱柱选自shimnex csc18柱250mm×4.6mm,5μm、
10.根据权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于，所述甲醇-磷酸水溶液中甲醇和磷酸水溶液的体积比为40：60～50：50。
11.根据权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于，所述流速为1.000ml/min；所述柱温为35℃。
12.根据权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于，所述磷酸水溶液中磷酸的质量分数为0.1％-0.5％。
13.根据权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于，所述黄芩苷的检测波长为278nm。
14.权利要求1-5中任意一项所述的提取方法或权利要求6-13中任意一项所述的含量测定方法在跌打镇痛膏中黄芩苷含量检测中的应用。
