本申请涉及药物分析检测,具体是一种马源性特征肽及其检测方法与应用。
背景技术:
1、阿胶,为马科动物驴equus asinus l.的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。其具有广泛的药理作用,如补血活血、优化免疫应答、改善阿尔兹海默症、抗氧化、抗疲劳、保护肺损伤、延缓衰老、治疗妇科疾病等。阿胶在中国已有2000多年的历史,应用广泛,《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)2020版收载的相关成方制剂有阿胶、味生化颗粒、孕康口服液、再造生血片等。
2、随着人们保健意识的增强,以养血滋补功效著称的阿胶越发受到关注。但是由于驴并不是主要的家畜,对阿胶需求的增加必然会导致原料的短缺,目前存在使用价格相对较低廉的马皮代替驴皮熬制阿胶,或者在驴皮中掺杂部分马皮来熬制阿胶的情况。由于马和骡与驴的物种亲缘关系较近,现有技术中所提供的阿胶定性鉴别方法往往存在以下技术缺陷:①特征肽的专属性差,例如,《中国药典》2015年版所记载的阿胶鉴别特征离子实际上为驴马共有,并非阿胶(驴皮)专属特征肽;②目前阿胶造假原料为马皮和骡皮时,由于物种亲缘关系近,胶原蛋白同源性极高,不容易检测出区别,也不容易确定是否为掺杂马皮。
3、因此急需一种专属性强、灵敏度高的方法用于阿胶或其他产品中马源性成分的检测,能够对产品中是否含有马源性成分进行鉴别。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的上述技术问题,本申请提供一种马源性特征肽及其检测方法与应用,具体如下:
2、一种马源性特征肽,所述的特征肽段为:
3、特征肽段1:gpsgepgkpgdk。
4、权利要求1所述的马源性特征肽的检测方法,包括以下步骤:
5、(1)将权利要求1所述的马源性特征肽配成对照品溶液;
6、(2)采用超高效液相色谱串联质谱(uplc-ms/ms)技术对待测样品和对照品进行测定;
7、(3)如与对照品溶液中相应的保留时间位置上,呈现保留时间一致的色谱峰,则检测出该马源性特征肽;如在与对照品溶液相应的位置上均无相应的色谱峰,则未检测出该马源性特征肽。
8、进一步的,所述对照品溶液,是将该马源性特征肽溶于1%碳酸氢铵溶液中得到的对照品溶液。
9、进一步的,所述超高效液相色谱串联质谱技术,具体是采用waters beh c18(2.1mm×50mm,1.7μm)柱;保护柱为waters van guard beh c18(2.1mm×5mm,1.7μm)柱;柱温40℃;流动相:0.2%甲酸水(a)-0.2%甲酸乙腈(b),梯度洗脱(0~0.5min,5%b;0.5~3.0min,5%~30%b;3.0~3.5min,30%~95%b;3.5~4.0min,95%b);流速0.3ml/min,进样体积为5μl;采用电喷雾离子化(esi)正离子模式下多反应监测(mrm),毛细管电压3.0kv,离子源温度150℃,喷雾气与反吹气:n2,去溶剂气流速1000l/h,去溶剂气温度500℃,质谱数据采集及处理软件为masslynxv4.1工作站。
10、进一步的,所述特征肽的离子对及其质谱条件如下:
11、
12、所述的马源性特征肽在检测鉴别马源性成分中的应用。
13、进一步的,所述检测鉴别马源性成分,是检测阿胶中是否含有马源性成分。尤其是检测鉴别是否含有马皮成分。可以用于阿胶或其他产品中马源性成分的检测,能够对产品中是否含有马源性成分进行鉴别,尤其是将阿胶与用马皮制成的“掺假阿胶”区别开来,同时还可以特异性地将马皮掺假与猪皮、羊皮、骆驼皮和牛皮等的掺假区分开来。
14、一种检测鉴别是否含有马源性成分的方法,采用上述的马源性特征肽检测方法对待测样品进行检测,如检测出该马源性特征肽,测样品含有马源性成分;如未检测出该马源性特征肽,则样品不含马源性成分。
15、与现有技术相比,本申请创造的技术效果体现在:
16、(1)本申请借助蛋白质组学方法寻找到一条马源性特征肽:gpsgepgkpgdk,用于阿胶或其他产品中马源性成分掺假的检查,并且可以特异性地将阿胶中的马皮掺假与猪皮、羊皮、骆驼皮和牛皮掺假区分开来。且目前未有该特征肽的相关内容公开。
17、(2)本申请同时基于该特征肽以及uplc-ms/ms mrm方法,建立了一种可以用于阿胶或其他产品中马源性成分的检测的方法,同时拟定该特征肽在阿胶中的检出限度,为阿胶的真伪鉴定和优劣评价提供快速简便、灵敏度高、专属性强的方法,提升阿胶的品质,保障该产品的质量安全。
1.一种马源性特征肽,其特征在于,所述的特征肽段为:
2.权利要求1所述的马源性特征肽的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
3.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,所述对照品溶液,是将该马源性特征肽溶于1%碳酸氢铵溶液中得到的对照品溶液。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,所述超高效液相色谱串联质谱技术,具体是采用waters beh c18(2.1mm×50mm,1.7μm)柱;保护柱为waters van guardbeh c18(2.1mm×5mm,1.7μm)柱;柱温40℃;流动相:0.2%甲酸水(a)-0.2%甲酸乙腈(b),梯度洗脱:0~0.5min,5%b;0.5~3.0min,5%~30%b;3.0~3.5min,30%~95%b;3.5~4.0min,95%b;流速0.3ml/min,进样体积为5μl;采用电喷雾离子化正离子模式下多反应监测,毛细管电压3.0kv,离子源温度150℃,喷雾气与反吹气:n2,去溶剂气流速1000l/h,去溶剂气温度500℃,质谱数据采集及处理软件为masslynxv4.1工作站。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述特征肽的离子对及其质谱条件如下:
6.权利要求1所述的马源性特征肽在检测鉴别马源性成分中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述检测鉴别马源性成分,是检测阿胶中是否含有马源性成分。
8.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述检测鉴别马源性成分,是检测鉴别是否含有马皮成分。
9.一种检测鉴别是否含有猪源性成分的方法,其特征在于,采用如权利要求2所述的检测方法对待测样品进行检测,如检测出该马源性特征肽,测样品含有马源性成分;如未检测出该马源性特征肽,则样品不含马源性成分。