本技术属于细胞系领域，具体涉及一种人非小细胞肺癌细胞系及其应用。
背景技术：
1、非小细胞肺癌(nsclc)是全球最常见的肺癌类型，占所有肺癌病例的大约85％。其中，携带eml4-alk融合基因的nsclc患者，由于特定的遗传变异，对靶向治疗显示出不同的反应。布格替尼(brigatinib)，作为一种新型alk抑制剂，已被用于治疗alk阳性的非小细胞肺癌。brigatinib通过靶向eml4-alk融合蛋白，抑制肿瘤细胞的生长和扩散。尽管brigatinib在初期治疗中效果显著，但长期使用后，部分患者可能会发展出对药物的耐药性。这种耐药性的出现，限制了brigatinib的治疗效果，使得研究和开发新的治疗策略变得尤为重要。为了深入研究brigatinib的耐药机制，并探索新的治疗方法，构建对brigatinib耐药的非小细胞肺癌细胞株显得非常必要。这种耐药细胞株不仅可以帮助科学家们理解药物耐药的分子机制，还可以用于筛选和评估新的抗肿瘤药物，从而为开发更有效的治疗方案提供支持。通过这种方式，我们不仅能够提高对现有药物作用机理的理解，还能为未来的药物开发和治疗策略的优化提供实验基础。这对于提高非小细胞肺癌患者的生存率和生活质量具有重要意义。耐药细胞株构建方法主要包括大剂量冲击法和逐步增加药物浓度持续诱导法。不同方法建立的耐药细胞株发生耐药机制有所不懂，但相较于大剂量冲击法，浓度梯度持续诱导刺激方法建立的耐药细胞更接近临床患者获得性耐药，更适合用于研究逆转肿瘤耐药药物。
技术实现思路
1、本发明要解决的技术问题是针对现有的适用于研究逆转肿瘤耐药药物的人非小细胞肺癌细胞系较少，与临床上肺癌的生物学性状相差较大的不足，而提供一种人非小细胞肺癌细胞系及其应用。本发明的人非小细胞肺癌细胞系能多次稳定传代、具有高成瘤性、良好的brigatinib耐药性，可以制备肺癌动物模型，可以用来分析体外、体内耐药逆转特性进而建立体外、体内两个相关联的耐药逆转候选药物筛选平台。本发明提供的以浓度梯度持续诱导刺激方法建立的人非小细胞肺癌细胞系更接近于临床的获得性耐药患者生物学特性，适合用于研究逆转肿瘤耐药药物。
2、本发明通过以下技术方案解决上述技术问题。
3、本发明第一方面提供一种人非小细胞肺癌细胞系，所述人非小细胞肺癌细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:c2024237。
4、本发明第二方面提供一种衍生自第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系的子代细胞系。
5、本发明第三方面提供一种如第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系和如第二方面所述的子代细胞系在研究肿瘤耐药机制中的应用。
6、本发明一些实施方案中，所述耐药为耐alk抑制剂。
7、本发明一些具体的实施方案中，所述alk抑制剂为brigatinib。
8、本发明第四方面提供一种如第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系或如第二方面所述的子代细胞系在评价药物抗肿瘤活性的应用。
9、本发明第五方面提供一种如第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系或如第二方面所述的子代细胞系在筛选和开发肿瘤的耐药逆转药物中的应用。
10、本发明一些实施方案中，所述耐药为耐alk抑制剂。
11、本发明一些具体的实施方案中，所述alk抑制剂为brigatinib。
12、本发明第六方面提供一种如第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系或如第二方面所述的子代细胞系在构建肿瘤耐药模型中的应用；所述肿瘤耐药模型为非人类的哺乳动物模型。
13、本发明一些实施方案中，所述耐药为耐alk抑制剂。
14、本发明一些具体的实施方案中，所述alk抑制剂为brigatinib。
15、本发明第七方面提供一种如第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系或如第二方面所述的子代细胞系在筛选、制备抗肿瘤药物中的应用。
16、如第三方面至第七方面中任一项所述的应用，所述肿瘤为肺癌，例如为非小细胞肺癌。
17、本发明第八方面提供一种筛选和开发肺癌耐药逆转候选药物的体内实验方法，所述体内实验方法包括以下步骤：使用如第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系或如第二方面所述的子代细胞系制备肿瘤耐药模型，将测试化合物施用于所述肿瘤耐药模型，施用后导致肺癌症状改善或治愈的测试化合物为肺癌耐药逆转候选药物，所述肿瘤耐药模型为非人类的哺乳动物模型。
18、本发明一些实施方案中，所述耐药为耐alk抑制剂；和/或，所述肺癌为非小细胞肺癌。
19、本发明一些具体的实施方案中，所述alk抑制剂为brigatinib。
20、本发明第九方面提供一种筛选和开发肺癌耐药逆转候选药物的体外实验方法，所述体外实验方法包括以下步骤：将测试化合物直接施用于如第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系或如第二方面所述的子代细胞系，根据增殖抑制效果，判断测试化合物对肺癌的耐药逆转能力。
21、本发明一些实施方案中，测试化合物以10倍、5倍或2倍浓度进行稀释，以适用于如第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系或如第二方面所述的子代细胞系。
22、本发明一些实施方案中，所述耐药为耐alk抑制剂；和/或，所述肺癌为非小细胞肺癌。
23、本发明一些具体的实施方案中，所述alk抑制剂为brigatinib。
24、本发明第十方面提供一种制备肺癌耐药模型的方法，其特征在于，所述方法包括将如第一方面所述的人非小细胞肺癌细胞系或如第二方面所述的子代细胞系施用于动物中。
25、本发明一些实施方案中，所述肺癌为非小细胞肺癌；和/或，所述动物为非人哺乳动物。
26、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
27、本发明所用试剂和原料均市售可得。
28、本发明的积极进步效果在于：本发明通过细胞形态学、生长曲线测定、细胞周期测定和细胞毒性测定，评价人非小细胞肺癌耐药细胞株的生物学特性，以具有eml4-alk融合基因的非小细胞肺癌细胞nci-h2228为对象，通过梯度增加药物浓度持续刺激方法来建立brigatinib耐药细胞株，成功建立nci-h2228/br耐药株。获得的人非小细胞肺癌细胞株能多次稳定传代、具有高成瘤性、良好的brigatinib耐药性，最大耐药浓度为12.49μm。本发明的人非小细胞肺癌细胞株可用于为多种研究提供耐药肿瘤细胞模型，包括但不限于研究耐药肿瘤细胞形态学及生物学特点、研究brigatinib获得性耐药机制、开发肿瘤耐药逆转药物、研发更有效的肿瘤治疗方法。
29、生物材料保藏信息
30、本发明的人非小细胞肺癌细胞系，于2024年7月16日保藏在中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏地址中国武汉武汉大学，邮编430072，保藏编号为cctcc no:c2024237，培养物名称为：人非小细胞肺癌耐药细胞nci-h2228/br。
1.一种人非小细胞肺癌细胞系，其特征在于，所述人非小细胞肺癌细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:c2024237。
2.一种衍生自如权利要求1所述的人非小细胞肺癌细胞系的子代细胞系。
3.如权利要求1所述的人非小细胞肺癌细胞系或如权利要求2所述的子代细胞系在研究肿瘤耐药机制中的应用；
4.如权利要求1所述的人非小细胞肺癌细胞系或如权利要求2所述的子代细胞系在评价药物抗肿瘤活性的应用。
5.如权利要求1所述的人非小细胞肺癌细胞系或如权利要求2所述的子代细胞系在筛选和开发肿瘤的耐药逆转药物中的应用；
6.如权利要求1所述的人非小细胞肺癌细胞系或如权利要求2所述的子代细胞系在构建肿瘤耐药模型中的应用；所述肿瘤耐药模型为非人类的哺乳动物模型；
7.如权利要求1所述的人非小细胞肺癌细胞系或如权利要求2所述的子代细胞系在筛选、制备抗肿瘤药物中的应用。
8.如权利要求3-7任一项所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肺癌，例如为非小细胞肺癌。
9.一种筛选和开发肺癌耐药逆转候选药物的体内实验方法，其特征在于，所述体内实验方法包括以下步骤：使用如权利要求1所述的人非小细胞肺癌细胞系或如权利要求2所述的子代细胞系制备肿瘤耐药模型，将测试化合物施用于所述肿瘤耐药模型，施用后导致肺癌症状改善或治愈的测试化合物为肺癌耐药逆转候选药物，所述肿瘤耐药模型为非人类的哺乳动物模型；
10.一种筛选和开发肺癌耐药逆转候选药物的体外实验方法，其特征在于，所述体外实验方法包括以下步骤：将测试化合物直接施用于如权利要求1所述的人非小细胞肺癌细胞系或如权利要求2所述的子代细胞系，根据增殖抑制效果，判断测试化合物对肺癌的耐药逆转能力；
11.一种制备肺癌耐药模型的方法，其特征在于，所述方法包括将如权利要求1所述的人非小细胞肺癌细胞系或如权利要求2所述的子代细胞系施用于动物中；
