本公开涉及l-苏氨酸输出蛋白变体和使用其生产l-苏氨酸的方法。
背景技术：
1、棒状杆菌属(corynebacterium)的微生物是广泛用于生产l-氨基酸的革兰氏阳性微生物。在l-氨基酸中，l-苏氨酸尤其是一种必需氨基酸，用于动物饲料、人类药物和化妆品工业，并通过使用棒状杆菌菌株发酵来生产。
2、已经进行了许多尝试来改进使用棒状杆菌菌株生产l-氨基酸的方法。其中，已经进行了研究以通过使用重组dna技术破坏或削弱特定基因来改良生产l-氨基酸的棒状杆菌菌株。此外，已经进行了许多尝试来研究与每种l-氨基酸的生物合成相关的基因的扩增对l-氨基酸生产的影响，并改进生产l-氨基酸的棒状杆菌菌株。
3、此外，在某些情况下，可能会引入来自其他细菌的外源基因。然而，仍然需要开发具有提高的l-苏氨酸生产率的菌株，即使该方法遵循上述常规方法。
4、同时，特定氨基酸输出基因的表达有助于提高微生物中相应氨基酸的生产率。l-赖氨酸输出基因(lyse)在棒状杆菌属微生物中的增强表达导致了赖氨酸生产率的提高(wo1997-023597)。此外，ep 1016710 b1公开了l-赖氨酸、l-丙氨酸、l-谷氨酸、l-苏氨酸、l-组氨酸、l-缬氨酸、l-精氨酸、l-脯氨酸和l-异亮氨酸的生产率通过增强功能尚未确定的大肠杆菌基因(即yeas、yahn、yfik和ygga基因)而得到提高。
技术实现思路
1、[技术问题]
2、本发明人鉴定了l-苏氨酸输出蛋白的变体，并证实了培养表达l-苏氨酸输出蛋白变体的微生物，与具有野生型输出蛋白的微生物相比，产生了高产率的l-苏氨酸，从而完成了本公开。
3、[技术方案]
4、本公开提供了l-苏氨酸输出蛋白变体，其中对应于seq id no:1的氨基酸序列中第143位的氨基酸被另一个氨基酸取代。
5、本公开提供了编码本公开的l-苏氨酸输出蛋白变体的多核苷酸。
6、本公开提供了一种微生物，其包括本公开的l-苏氨酸输出蛋白变体；或编码其的多核苷酸。
7、本公开提供了生产l-苏氨酸的方法，该方法包括培养微生物，该微生物包括本公开的l-苏氨酸输出蛋白变体；或在培养基中编码其的多核苷酸。
8、本公开提供了用于生产l-苏氨酸的组合物，其包含l-苏氨酸输出蛋白变体；编码其的多核苷酸；包含该多核苷酸的载体；包含l-苏氨酸输出蛋白变体或编码其的多核苷酸的微生物；培养该微生物的培养物；或者其中两种或多种的组合。
9、本公开提供了l-苏氨酸输出蛋白变体；编码其的多核苷酸；包含该多核苷酸的载体；或包含该l-苏氨酸输出蛋白变体或编码其的多核苷酸的微生物用于生产l-苏氨酸的用途。
10、[有益效果]
11、当培养具有本公开的l-苏氨酸输出蛋白变体的l-苏氨酸生产微生物时，与具有现有野生型输出蛋白的微生物相比，可能以更高的产量生产l-苏氨酸。
1.一种l-苏氨酸输出蛋白变体，其中对应于seq id no:1的第143位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
2.根据权利要求1所述的l-苏氨酸输出蛋白变体，其中所述另一种氨基酸选自由以下组成的组：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和脯氨酸。
3.根据权利要求2所述的l-苏氨酸输出蛋白变体，其中所述另一种氨基酸是异亮氨酸。
4.根据权利要求1所述的l-苏氨酸输出蛋白变体，其中所述l-苏氨酸输出蛋白变体与seq id no:1的氨基酸序列具有至少70％且小于100％的序列同一性。
5.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1至4中任一项所述的l-苏氨酸输出蛋白变体。
6.一种微生物，其包含l-苏氨酸输出蛋白变体，或编码所述l-苏氨酸输出蛋白变体的多核苷酸，所述l-苏氨酸输出蛋白变体中对应于seq id no:1的第143位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
7.根据权利要求6所述的微生物，其中与包含具有seq id no:1的氨基酸序列的野生型l-苏氨酸输出蛋白或编码其的多核苷酸的棒状杆菌属微生物相比，所述微生物具有增加的l-苏氨酸生产率。
8.根据权利要求6所述的微生物，其中所述微生物是棒状杆菌属的微生物。
9.根据权利要求8所述的微生物，其中所述棒状杆菌属的微生物是谷氨酸棒状杆菌。
10.一种生产l-苏氨酸的方法，其包括在培养基中培养包含l-苏氨酸输出蛋白变体或编码所述l-苏氨酸输出蛋白变体的多核苷酸的微生物，所述l-苏氨酸输出蛋白变体中对应于seq id no:1的第143位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
11.一种用于生产l-苏氨酸的组合物，其包含l-苏氨酸输出蛋白变体；编码其的多核苷酸；包含所述多核苷酸的载体；包含l-苏氨酸输出蛋白变体或编码其的多核苷酸的微生物；培养过所述微生物的培养物；或者其中两种或多种的组合，所述l-苏氨酸输出蛋白变体中对应于seq id no:1的第143位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
12.l-苏氨酸输出蛋白变体；编码其的多核苷酸；包含所述多核苷酸的载体；或
