1.本披露总体上涉及使用特异性结合人程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原-4(ctla-4)的双特异性抗体及其抗原结合片段用于治疗癌症(例如，肾细胞癌和非小细胞肺癌)的方法。
背景技术：
0、2.背景技术
1、癌症仍然是主要的全球健康负担。尽管在癌症的治疗方面有所进展，但对于更有效且毒性更小的疗法仍然存在未满足的医疗需求，尤其对于患有对现有治疗具有抗性的晚期疾病或癌症的患者更是如此。
2、免疫系统，特别是t细胞介导的细胞毒性在肿瘤控制中的作用是公认的。有越来越多的证据表明t细胞在癌症患者中控制肿瘤生长和存活，在所述疾病的早期和晚期阶段均如此。然而，肿瘤特异性t细胞应答很难在癌症患者中上升和维持。当与利用非特异性化学疗法和/或放射的疗法相比，刺激或增强对抗癌症的先天免疫应答的癌症免疫疗法的持续进展和成功使得这类疗法成为有吸引力的治疗选择。
3、已经鉴定了许多分子靶标的作为对抗癌症的免疫肿瘤学(io)疗法的潜在效用。一些分子靶标(正在研究其在免疫肿瘤学疗法领域的治疗潜力)包括细胞毒性t淋巴细胞抗原-4(ctla-4或cd152)、程序性死亡配体1(pd-l1或b7-h1或cd274)、程序性死亡-1(pd-1)、ox40(cd134或tnfrsf4)和t细胞抑制性受体t细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域-3(tim3)。虽然这些靶标中的一些在治疗上已经被成功地利用(例如，pd-1和ctla-4)，但是许多患者对已经开发的疗法无应答。并且，虽然可以考虑包括更高剂量和/或免疫疗法的组合的治疗方案，但是这类疗法可能与副作用的风险增加相关，其中副作用随着更高的剂量和累积暴露而增加，并且当与联合免疫疗法组合使用时似乎是加成的。一些常见的副作用包括下垂体炎、甲状腺炎、肾上腺功能不全、小肠结肠炎、皮炎、肺炎、肝炎、胰腺炎、运动和感觉神经病、以及关节炎。此外，由于免疫疗法典型地与高成本相关，因此包括免疫疗法组合的疗法对于患者来说可能是成本过高的。
4、因此，仍然需要继续鉴定io疗法的候选靶标，开发针对现有靶标的新疗法，并开发治疗策略以避免目前使用的免疫疗法的缺点，包括缺乏患者应答和增加的联合治疗涉及的副作用风险。对于靶标分子的组合是双特异性的io疗法(例如，结合蛋白)，特别是当与对单独的单特异性结合蛋白的组合的结合亲和力相比时对靶标分子展现出更大结合亲和力的那些，代表一类在治疗潜力方面特别令人希望的分子。
5、3.
技术实现要素：
6、在一些方面，本文披露了一种治疗受试者的肾细胞癌(rcc)的方法，该方法包括向该受试者施用约250mg至约1500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原-4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文披露了一种治疗受试者的肾细胞癌(rcc)的方法，该方法包括向该受试者施用约2.25mg至约2500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原-4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。
7、在一些方面，这些方法包括施用约500mg或约750mg双特异性抗体或其抗原结合片段。
8、在一些方面，这些方法进一步包括施用一种或多种酪氨酸激酶抑制剂。
9、在一些方面，这些方法进一步包括施用酪氨酸激酶抑制剂阿西替尼或乐伐替尼。
10、在一些方面，在施用双特异性抗体或其抗原结合片段之前，从第-7天至第一1天，以5mg的剂量每天两次口服施用阿西替尼。
11、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段在第1天施用。
12、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段以500mg或750mg的剂量每个治疗周期施用一次。
13、在一些方面，治疗周期是三周。
14、在一些方面，这些方法进一步包括维持给药双特异性抗体或其抗原结合片段和/或一个或多个剂量的化学治疗剂。
15、在一些方面，本文披露了一种治疗受试者的非小细胞肺癌(nsclc)的方法，该方法包括向该受试者施用约250mg至约1500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原-4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文披露了一种治疗受试者的非小细胞肺癌(nsclc)的方法，该方法包括向该受试者施用约2.25mg至约2500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原-4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。
16、在一些方面，本文披露了一种抑制受试者的非小细胞肺肿瘤生长的方法，该方法包括向该受试者施用约250mg至约1500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原-4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文披露了一种抑制受试者的非小细胞肺肿瘤生长的方法，该方法包括向该受试者施用约2.25mg至约2500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原-4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。
17、在一些方面，该方法包括施用约500mg或约750mg双特异性抗体或其抗原结合片段。
18、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段每个治疗周期施用一次。
19、在一些方面，治疗周期是三周。
20、在一些方面，该方法包括施用一种或多种化学治疗剂。
21、在一些方面，nsclc或非小细胞肺肿瘤是非鳞状细胞肺癌。
22、在一些方面，nsclc或非小细胞肺肿瘤是鳞状细胞肺癌。
23、在一些方面，一种或多种化学治疗剂选自由卡铂、培美曲塞及其组合组成的组。
24、在一些方面，一种或多种化学治疗剂是卡铂和培美曲塞。在一些方面，nsclc或非小细胞肺肿瘤是非鳞状细胞肺癌，并且一种或多种化学治疗剂是卡铂和培美曲塞。
25、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段以500mg或750mg的剂量每三周施用一次，并且卡铂以auc 6mg/ml·min或auc 5mg/ml·min的剂量每三周施用一次。
26、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段以约2000mg的剂量施用，卡铂以auc5mg/ml·min的剂量施用，以及培美曲塞以500mg/m2的剂量施用。
27、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段以约1500mg的剂量施用，卡铂以auc5mg/ml·min的剂量施用，以及培美曲塞以500mg/m2的剂量施用，每三周一次，其中卡铂施用4剂，然后每三周一次维持给药双特异性抗体或其抗原结合片段，以及每三周一次维持给药培美曲塞。
28、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段以约500mg或约750mg的剂量施用，卡铂以auc 5mg/ml·min的剂量施用，以及培美曲塞以500mg/m2的剂量施用，每三周一次，其中卡铂施用4剂，然后每三周一次维持给药双特异性抗体或其抗原结合片段，以及每三周一次维持给药培美曲塞。
29、在一些方面，一种或多种化学治疗剂选自由卡铂、紫杉醇、nab-紫杉醇及其组合组成的组。
30、在一些方面，一种或多种化学治疗剂是卡铂和紫杉醇。
31、在一些方面，一种或多种化学治疗剂是卡铂和nab-紫杉醇。在一些方面，nsclc或非小细胞肺肿瘤是鳞状细胞肺癌，并且一种或多种化学治疗剂是卡铂和nab-紫杉醇。
32、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段以500mg或750mg的剂量每三周施用一次，卡铂以auc 6mg/ml·min的剂量每三周施用一次，以及紫杉醇以200mg/m2的剂量每三周施用一次。在一些方面，卡铂和紫杉醇施用4剂。
33、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段以500mg或750mg的剂量每三周施用一次，卡铂以auc 6mg/ml·min的剂量每三周施用一次，以及nab-紫杉醇在每个3周周期的第1、8和15天以100mg/m2体表面积(bsa)的剂量施用。在一些方面，卡铂和nab-紫杉醇施用4剂。
34、在一些方面，该方法进一步包括维持给药双特异性抗体或其抗原结合片段和/或一种或多种化学治疗剂。
35、在一些方面，受试者是人。
36、在一些方面，受试者患有进展性实体瘤。
37、在一些方面，施用导致靶病灶消失和/或其总和减少。
38、在一些方面，靶病灶消失和/或其总和减少通过测定肿瘤活检样品来确定。
39、在一些方面，样品是新鲜的或福尔马林固定石蜡包埋(ffpe)样品。
40、在一些方面，样品通过rt-pcr、原位杂交、rna酶保护、基于rt-pcr的测定、免疫组织化学(ihc)、酶联免疫吸附测定、体内成像或流式细胞术来测定。
41、在一些方面，双特异性抗体结合食蟹猴pd-1和ctla-4。
42、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段结合人pd-1和ctla-4。
43、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段是人源化双特异性抗体或其抗原结合片段。
44、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段是单价的。
45、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段是duetmab。
46、在一些方面，双特异性抗体或抗原结合片段包含igg重链恒定区。
47、在一些方面，恒定区包括在l234f、l235e和p331s处的突变。
48、在一些方面，恒定区包含杵突变和臼突变，任选地其中该杵突变在包含结合ctla-4的可变区的重链中，并且该臼突变在包含结合pd-1的可变区的重链中。
49、在一些方面，igg重链恒定区是igg1重链恒定区。
50、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段包含medi5752的序列的抗pd-1和抗ctla-4重链可变区(vh)cdr1、vh cdr2、vh cdr3、轻链可变区(vl)cdr1、vl cdr2、和vlcdr3。
51、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段包含：(a)含有seq id no：8的氨基酸序列的vh cdr1、含有seq id no：9的氨基酸序列的vh cdr2、含有seq id no：10的氨基酸序列的vh cdr3、含有seq id no：5的氨基酸序列的vl cdr1、含有seq id no：6的氨基酸序列的vl cdr2、和含有seq id no：7的氨基酸序列的vl cdr3；以及(b)含有seq id no：14的氨基酸序列的vh cdr1、含有seq id no：15的氨基酸序列的vh cdr2、含有seq id no：16的氨基酸序列的vh cdr3、含有seq id no：11的氨基酸序列的vl cdr1、含有seq id no：12的氨基酸序列的vl cdr2、和含有seq id no：13的氨基酸序列的vl cdr3。
52、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段包含：(a)含有seq id no：2中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：1中列出的氨基酸序列的轻链；以及(b)含有seq idno：4中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：3中列出的氨基酸序列的轻链。
53、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段是全长抗体。
54、在一些方面，双特异性抗体是medi5752。
55、在一些方面，双特异性抗体或其抗原结合片段是抗原结合片段。
56、在一些方面，抗原结合片段包括fab、fab'、f(ab')2、单链fv(scfv)、二硫化物连接的fv、v-nar结构域、ignar、胞内抗体、双特异性胞内抗体、iggδch2、迷你抗体、f(ab′)3、四体抗体、三体抗体、双体抗体、单一结构域抗体、dvd-ig、fcab、mab2、(scfv)2或scfv-fc。
57、在一些方面，本文提供了一种治疗受试者的晚期肾细胞癌的方法，该方法包括每三周一次向该受试者施用约750mg特异性结合pd-1和ctla-4的双特异性抗体，并且该双特异性抗体包含：(a)含有seq id no：2中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：1中列出的氨基酸序列的轻链；以及(b)含有seq id no：4中列出的氨基酸序列的重链和含有seqid no：3中列出的氨基酸序列的轻链。
58、在一些方面，本文提供了一种治疗受试者的晚期肾细胞癌的方法，该方法包括每三周一次向该受试者施用约500mg特异性结合pd-1和ctla-4的双特异性抗体，并且该双特异性抗体包含：(a)含有seq id no：2中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：1中列出的氨基酸序列的轻链；以及(b)含有seq id no：4中列出的氨基酸序列的重链和含有seqid no：3中列出的氨基酸序列的轻链。
59、在一些方面，本文提供了一种治疗受试者的非小细胞肺癌的方法，该方法包括向该受试者施用：(1)每三周一次约750mg或约500mg特异性结合pd-1和ctla-4的双特异性抗体，并且该双特异性抗体包括：(a)含有seq id no：2中列出的氨基酸序列的重链和含有seqid no：1中列出的氨基酸序列的轻链；以及(b)含有seq id no：4中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：3中列出的氨基酸序列的轻链；(2)以auc 5mg/ml·min的剂量的卡铂，每三周一次，持续4个周期；以及(3)以500mg/m2的剂量的培美曲塞，每三周一次，持续多个周期，然后维持给药双特异性抗体和培美曲塞。
60、在一些方面，本文提供了一种治疗受试者的非小细胞肺癌的方法，该方法包括向该受试者施用：(1)每三周一次约750mg或约500mg特异性结合pd-1和ctla-4的双特异性抗体，并且该双特异性抗体包括：(a)含有seq id no：2中列出的氨基酸序列的重链和含有seqid no：1中列出的氨基酸序列的轻链；以及(b)含有seq id no：4中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：3中列出的氨基酸序列的轻链；和(2)以auc 6mg/ml·min的剂量的卡铂，每三周一次；和(3)每三周一次以200mg/m2的剂量的紫杉醇，或(4)在每三周周期的第1、8和15天以100mg/m2体表面积的剂量的nab-紫杉醇，持续4个周期，和(5)维持给药双特异性抗体。
61、在一些方面，非小细胞肺癌和/或肾细胞癌包含约≥50％的表达pd-l1的肿瘤细胞。在一些方面，非小细胞肺癌和/或肾细胞癌包含约1％-49％的表达pd-l1的肿瘤细胞。在一些方面，非小细胞肺癌和/或肾细胞癌包含约＜1％的表达pd-l1的肿瘤细胞。在一些方面，非小细胞肺癌和/或肾细胞癌包含约0％的表达pd-l1的肿瘤细胞。
62、在一些方面，本披露还提供了一种在有需要的受试者中扩增t细胞的方法，该方法包括施用特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原-4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段，该抗体包含：(a)含有seq id no：8的氨基酸序列的vhcdr1、含有seq id no：9的氨基酸序列的vh cdr2、含有seq id no：10的氨基酸序列的vhcdr3、含有seq id no：5的氨基酸序列的vlcdr1、含有seq id no：6的氨基酸序列的vlcdr2、和含有seq id no：7的氨基酸序列的vl cdr3；以及(b)含有seq id no：14的氨基酸序列的vh cdr1、含有seq id no：15的氨基酸序列的vh cdr2、含有seq id no：16的氨基酸序列的vh cdr3、含有seq id no：11的氨基酸序列的vl cdr1、含有seq id no：12的氨基酸序列的vl cdr2、和含有seq id no：13的氨基酸序列的vl cdr3。在一些方面，双特异性抗体包含：(a)含有seq id no：2中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：1中列出的氨基酸序列的轻链；以及(b)含有seq id no：4中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：3中列出的氨基酸序列的轻链。在一些方面，双特异性抗体以约225mg至约1,500mg的剂量施用。在一些方面，双特异性抗体以约750mg q3w的剂量施用。在一些方面，双特异性抗体每三周施用一次。在一些方面，受试者患有非小细胞肺癌或肾细胞癌。在一些方面，与施用前的t细胞克隆的数量相比，新扩增的t细胞克隆的比例高出约50％、约60％、约70％或约75％。在一些方面，双特异性抗体是medi5752。
技术实现思路
1.一种治疗受试者的肾细胞癌(rcc)的方法，该方法包括向该受试者施用约250mg至约1500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原_4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。
2.一种抑制受试者的肾细胞癌(rcc)肿瘤生长的方法，该方法包括向该受试者施用约250mg至约1500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原_4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。
3.如权利要求1或2所述的方法，该方法包括施用约500mg或约750mg该双特异性抗体或其抗原结合片段。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，该方法进一步包括施用一种或多种酪氨酸激酶抑制剂。
5.如权利要求1_4中任一项所述的方法，该方法进一步包括施用该酪氨酸激酶抑制剂阿西替尼或乐伐替尼。
6.如权利要求5所述的方法，其中在施用该双特异性抗体或其抗原结合片段之前，从第一7天至第一1天，以5mg的剂量每天两次口服施用阿西替尼。
7.如权利要求6所述的方法，其中在第1天施用该双特异性抗体或其抗原结合片段。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段以500mg或750mg的剂量每个治疗周期施用一次。
9.如权利要求8所述的方法，其中该治疗周期为三周。
10.如权利要求4-9中任一项所述的方法，该方法进一步包括维持给药该双特异性抗体或其抗原结合片段和/或一个或多个剂量的化学治疗剂。
11.一种治疗受试者的非小细胞肺癌(nsclc)的方法，该方法包括向该受试者施用约250mg至约1500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原_4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。
12.一种抑制受试者的非小细胞肺肿瘤生长的方法，该方法包括向该受试者施用约250mg至约1500mg特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原_4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段。
13.如权利要求11或12所述的方法，该方法包括施用约500mg或约750mg该双特异性抗体或其抗原结合片段。
14.如权利要求11-13中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段每个治疗周期施用一次。
15.如权利要求14所述的方法，其中该治疗周期为三周。
16.如权利要求11-15中任一项所述的方法，该方法进一步包括施用一种或多种化学治疗剂。
17.如权利要求11-16中任一项所述的方法，其中该nsclc或非小细胞肺肿瘤是非鳞状细胞肺癌。
18.如权利要求11-16中任一项所述的方法，其中该nsclc或非小细胞肺肿瘤是鳞状细胞肺癌。
19.如权利要求11-17中任一项所述的方法，其中该一种或多种化学治疗剂选自由卡铂、培美曲塞及其组合组成的组。
20.如权利要求19所述的方法，其中该一种或多种化学治疗剂是卡铂和培美曲塞。
21.如权利要求16所述的方法，其中该nsclc或非小细胞肺肿瘤是非鳞状细胞肺癌，并且其中该一种或多种化学治疗剂是卡铂和培美曲塞。
22.如权利要求11-16和19中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段以500mg或750mg的剂量每三周施用一次，并且该卡铂以auc 6mg/ml.min或auc 5mg/ml.min的剂量每三周施用一次。
23.如权利要求20所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段以约2000mg的剂量施用，该卡铂以auc 5mg/ml.min的剂量施用，以及该培美曲塞以500mg/m2的剂量施用。
24.如权利要求20所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段以约1500mg的剂量施用，该卡铂以auc 5mg/ml.min的剂量施用，以及该培美曲塞以500mg/m2的剂量施用，共4剂，每三周一次，然后每三周一次维持给药双特异性抗体或其抗原结合片段，以及每三周一次维持给药培美曲塞。
25.如权利要求20所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段以约500mg或约750mg的剂量施用，该卡铂以auc 5mg/ml.min的剂量施用，以及该培美曲塞以500mg/m2的剂量施用，共4剂，每三周一次，然后每三周一次维持给药双特异性抗体或其抗原结合片段，以及每三周一次维持给药培美曲塞。
26.如权利要求11-16和18中任一项所述的方法，其中该一种或多种化学治疗剂选自由卡铂、紫杉醇、nab-紫杉醇及其组合组成的组。
27.如权利要求26所述的方法，其中该一种或多种化学治疗剂是卡铂和紫杉醇。
28.如权利要求26所述的方法，其中该一种或多种化学治疗剂是卡铂和nab-紫杉醇。
29.如权利要求16所述的方法，其中该nsclc或非小细胞肺肿瘤是鳞状细胞肺癌，并且其中该一种或多种化学治疗剂是卡铂和nab-紫杉醇。
30.如权利要求27所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段以500mg或750mg的剂量每三周施用一次，该卡铂以auc 6mg/ml.min的剂量每三周施用一次，以及该紫杉醇以200mg/m2的剂量每三周施用一次。
31.如权利要求28所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段以500mg或750mg的剂量每三周施用一次，该卡铂以auc 6mg/ml.min的剂量每三周施用一次，以及该nab-紫杉醇在每个3周周期的第1、8和15天以100mg/m2体表面积(bsa)的剂量施用。
32.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中施用进行四个3周周期。
33.如权利要求4-10和16-32中任一项所述的方法，该方法进一步包括维持给药该双特异性抗体或其抗原结合片段和/或该一种或多种化学治疗剂。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中该受试者是人。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中该受试者患有进展性实体瘤。
36.如权利要求1-35中任一项所述的方法，其中该施用导致靶病灶消失和/或其总和减少。
37.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中该靶病灶消失和/或其总和减少通过测定肿瘤活检样品来确定。
38.如权利要求37所述的方法，其中该样品是新鲜的或福尔马林固定石蜡包埋(ffpe)样品。
39.如权利要求36或37中任一项所述的方法，其中该样品通过rt-pcr、原位杂交、rna酶保护、基于rt-pcr的测定、免疫组织化学(ihc)、酶联免疫吸附测定、体内成像或流式细胞术来测定。
40.如权利要求1-39中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体结合食蟹猴pd-1和ctla-4。
41.如权利要求1_40中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段结合人pd-1和ctla-4。
42.如权利要求1_41中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是人源化双特异性抗体或其抗原结合片段。
43.如权利要求1_42中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是单价的。
44.如权利要求1_43中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是duetmab。
45.如权利要求1_44中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或抗原结合片段包含igg重链恒定区。
46.如权利要求45所述的方法，其中该恒定区包括在l234f、l235e和p331s处的突变。
47.如权利要求45或46所述的方法，其中该恒定区包含杵突变和臼突变，任选地其中该杵突变在包含结合ctla-4的可变区的重链中，并且该臼突变在包含结合pd-1的可变区的重链中。
48.如权利要求45-47中任一项所述的方法，其中该igg重链恒定区是igg1重链恒定区。
49.如权利要求1_48中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段包含medi5752的序列的抗pd-1和抗ctla-4重链可变区(vh)cdr1、vh cdr2、vh cdr3、轻链可变区(vl)cdr1、vl cdr2、和vl cdr3。
50.如权利要求1_49中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段包含：
51.如权利要求1-50中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段包含：
52.如权利要求1-51中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是全长抗体。
53.如权利要求1-52中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体是medi5752。
54.如权利要求1-50中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是抗原结合片段。
55.如权利要求54所述的方法，其中该抗原结合片段包含fab、fab'、f(ab')2、单链fv(scfv)、二硫化物连接的fv、v-nar结构域、ignar、胞内抗体、双特异性胞内抗体、iggδch2、迷你抗体、f(ab′)3、四体抗体、三体抗体、双体抗体、单一结构域抗体、dvd-ig、fcab、mab2、(scfv)2或scfv-fc。
56.一种治疗受试者的晚期肾细胞癌的方法，该方法包括每三周一次向该受试者施用约750mg特异性结合pd-1和ctla-4的双特异性抗体，并且该双特异性抗体包含：(a)含有seqid no：2中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：1中列出的氨基酸序列的轻链；以及(b)含有seq id no：4中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：3中列出的氨基酸序列的轻链。
57.一种治疗受试者的晚期肾细胞癌的方法，该方法包括每三周一次向该受试者施用约500mg特异性结合pd-1和ctla-4的双特异性抗体，并且该双特异性抗体包含：(a)含有seqid no：2中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：1中列出的氨基酸序列的轻链；以及(b)含有seq id no：4中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：3中列出的氨基酸序列的轻链。
58.一种治疗受试者的非小细胞肺癌的方法，该方法包括向该受试者施用：(1)每三周一次约750mg或约500mg特异性结合pd-1和ctla-4的双特异性抗体，并且该双特异性抗体包括：(a)含有seq id no：2中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：1中列出的氨基酸序列的轻链；以及(b)含有seq id no：4中列出的氨基酸序列的重链和含有seq id no：3中列出的氨基酸序列的轻链；(2)以auc 5mg/ml.min的剂量的卡铂，每三周一次，持续4个周期；以及(3)以500mg/m2的剂量的培美曲塞，每三周一次，持续多个周期，然后维持给药该双特异性抗体和培美曲塞。
59.一种治疗受试者的非小细胞肺癌的方法，该方法包括向该受试者施用：
60.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该非小细胞肺癌和/或肾细胞癌包含约≥50％的表达pd-l1的肿瘤细胞。
61.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该非小细胞肺癌和/或肾细胞癌包含约1％-49％的表达pd-l1的肿瘤细胞。
62.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该非小细胞肺癌和/或肾细胞癌包含约＜1％的表达pd-l1的肿瘤细胞。
63.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该非小细胞肺癌和/或肾细胞癌包含约0％的表达pd-l1的肿瘤细胞。
64.一种在有需要的受试者中扩增t细胞的方法，该方法包括施用特异性结合程序性细胞死亡-1(pd-1)和细胞毒性t淋巴细胞相关抗原_4(ctla-4)的双特异性抗体或其抗原结合片段，该抗体包含：
65.如权利要求64所述的方法，其中该双特异性抗体包含：
66.如权利要求64或65所述的方法，其中该双特异性抗体以约225mg至约1,500mg的剂量施用。
67.如权利要求64至66所述的方法，其中该双特异性抗体以约750mg q3w的剂量施用。
68.如权利要求66所述的方法，其中该双特异性抗体每三周施用一次。
69.如权利要求64至68中任一项所述的方法，其中该受试者患有非小细胞肺癌或肾细胞癌。
70.如权利要求64至69中任一项所述的方法，其中与施用前的t细胞克隆的数量相比，新扩增的t细胞克隆的比例高出约50％、约60％、约70％或约75％。
71.如权利要求64至70中任一项所述的方法，其中该双特异性抗体是medi5752。
