本发明涉及植物培养，具体涉及一种短萼仪花的组织培养方法。
背景技术：
1、短萼仪花(lysidice brevicalyx)为苏木科仪花属的常绿乔木，产于我国南部和西南部，主要分布在广东、广西、贵州以及云南等地，生长于海拔500～1000m的疏林或密林中，常见于山谷溪边，喜光及温暖湿润性气候，抗寒能力稍强，能耐轻微霜冻，对土壤酸碱度要求不严。该树种花多而艳丽，木材坚硬，根、茎、叶可入药，是华南地区极具开发潜力的乡土树种。
2、有关短萼仪花的研究目前主要集中在形态学研究、药用研究和生物群落多样性研究等内容上，而在繁殖育苗方面报道相对较少。其在生产上以播种育苗为主，扩繁速度慢，育苗效率低，良种选育薄弱，没有得到系统开发利用，市场的苗木数量少，质量参差不齐，未能充分开发该物种的价值。
3、短萼仪花主要以种子繁殖，但其种粒较大、种皮革质、外层被腊不易透水，存在种子吸水困难、发芽率低等问题。此外，其播种育苗扩繁速度慢，育苗效率低，后代优良性状遗传稳定性无法保证。
4、采用组织培养方式扩繁能在短时间内提供大量优质种苗，为其工厂化育苗和规模化开发利用提供科学指导，为其遗传改良、加快育种进程等科学研究提供技术支撑。
技术实现思路
1、本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种短萼仪花的组织培养方法，本发明通过探究短萼仪花的组培技术，以期弥补短萼仪花在育苗技术存在的空缺与不足，为短萼仪花的繁育带来新的途径，也能为其种质资源的收集保存及其大规模生产和进一步遗传转化研究提供技术支持和参考依据。
2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
3、一种短萼仪花的组织培养方法，包括以下步骤：
4、(1)将短萼仪花种子进行消毒；
5、(2)将短萼仪花种子用氯化汞溶液浸泡处理，再接种于ms培养基中诱导萌发出无菌苗；
6、(3)将无菌苗的带芽茎段接种于萌发培养基中进行萌发增殖；
7、(4)将萌发增殖后的叶片接种于诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养；
8、(5)将诱导出的愈伤组织用增殖培养基进行增殖培养；
9、(6)将增殖培养后的愈伤组织用分化培养基进行分化培养，得到无根苗；
10、(7)将无根苗用根诱导培养基进行根的诱导。
11、作为本发明的优选实施方案，所述短萼仪花种子为种实饱满、无病虫害的种子。
12、作为本发明的优选实施方案，将短萼仪花种子进行消毒具体为：将种子沿边剪口，剪口完成后用洗洁精清洗浸泡8～12min，而后用水冲洗20～40min，清洗完成后将种子在60～80％乙醇溶液中浸泡0.5～2min，用水冲洗2～4次，再用0.05～0.2％升汞浸泡8～12min，用水冲洗4～6次，再用水浸泡20～30h，浸泡完成后再用60～80％乙醇溶液浸泡20～40s，水冲洗2～4次，再用0.05～0.2％升汞浸泡5～15min，水冲洗4～6次。
13、其中，诱导萌发的条件为：温度：(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照12h/day。作为本发明的优选实施方案，所述萌发培养基包括：ms培养基、0.5～1.5mg/l 6-ba、0～0.3mg/l naa、0～0.4mg/l iba。
14、其中，萌发增殖的条件为：温度：(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照12h/day。
15、作为本发明的优选实施方案，所述诱导培养基包括：所述诱导培养基包括：ms培养基、0.5～2mg/l 6-ba、0.01～0.1mg/l iba、0.05～0.5mg/l 2,4-d。
16、其中，诱导培养的条件为：温度：(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照12h/day。
17、作为本发明的优选实施方案，所述增殖培养基包括：所述增殖培养基包括：ms培养基、1～3mg/l 6-ba、0.05～0.1mg/l iba、0.05～0.1mg/l 2,4-d、0～0.1g/l柠檬酸、0～1g/l pvp、0～1g/l活性炭。
18、其中，增殖培养的条件为：温度：(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照12h/day。
19、作为本发明的优选实施方案，所述增殖培养基包括：ms培养基、2mg/l 6-ba、0.1mg/l iba、0.1mg/l 2,4-d、0.1g/l柠檬酸。
20、作为本发明的优选实施方案，所述分化培养基包括：所述分化培养基包括：ms培养基、0.5～2mg/l 6-ba、0～0.5mg/l tdz、0.1～0.3mg/l iba、0.2g/l酸水解络蛋白。
21、其中，分化培养的条件为：温度：(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照12h/day。
22、作为本发明的优选实施方案，所述分化培养基包括：所述分化培养基包括：ms培养基、2mg/l 6-ba、0.5mg/l tdz、0.2mg/l iba、0.2g/l酸水解络蛋白。
23、作为本发明的优选实施方案，所述根诱导培养基包括：1/2ms培养基、0.1～0.5mg/lnaa、0～0.5mg/liba。
24、其中，根的诱导的条件为：温度：(25±2)℃，光照强度1500～2000lx，光照12h/day。
25、其中，在本技术中，所提到的6-ba为6-苄氨基嘌、tdz指的是细胞分裂素噻苯隆、naa指的是萘乙酸、iba指的是吲哚乙酸、2,4-d指的是二氯苯氧乙酸、pvp指的是聚乙烯吡咯烷酮，这些物质均为常规市售产品。
26、其中，本发明的培养基的成为指的是在培养基中添加相对应浓度的物质。
27、例如分化培养基包括：ms培养基、0.5～2mg/l 6-ba、0～0.5mg/l tdz、0.1～0.3mg/l iba、0.1～0.3g/l酸水解络蛋白。即分化培养基指的是在ms培养基中添加0.5～2mg/l 6-ba、0～0.5mg/l tdz、0.1～0.3mg/l iba、0.1～0.3g/l酸水解络蛋白。
28、根诱导培养基指的是在1/2ms培养基中添加0.1～0.5mg/lnaa、0～0.5mg/liba、10～30g/l蔗糖。
29、本发明的有益效果在于：(1)本发明通过探究短萼仪花的组培技术，以期弥补短萼仪花在育苗技术存在的空缺与不足，为短萼仪花的繁育带来新的途径，也能为其种质资源的收集保存及其大规模生产和进一步遗传转化研究提供技术支持和参考依据；(2)本发明采用酒精与升汞配合使用对种子进行消毒处理，能够有效灭菌，同时降低褐伤率，并在一定程度上促进种子萌发，通过采用使用短萼仪花种子无菌苗的带芽茎段通过以芽繁芽途径进行芽增殖，对短萼仪花种子通过切除子叶促进萌发，可有效提高种子发芽率和发芽速度通过愈伤组织再分化实现植株的再生，可为遗传转化研究提供技术支持，通过激素配比诱导生根，通过探究短萼仪花愈伤组织诱导及再生过程适宜的外植体、培养基类型和激素配比，为其遗传转化体系的建立奠定基础，具有广泛的应用前景。
1.一种短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，所述短萼仪花种子为种实饱满、无病虫害的种子。
3.根据权利要求1所述的短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，将短萼仪花种子进行消毒具体为：将种子沿边剪口，剪口完成后用洗洁精清洗浸泡8～12min，而后用水冲洗20～40min，清洗完成后将种子在60～80％乙醇溶液中浸泡0.5～2min，用水冲洗2～4次，再用0.05～0.2％升汞浸泡8～12min，用水冲洗4～6次，再用水浸泡20～30h，浸泡完成后再用60～80％乙醇溶液浸泡20～40s，水冲洗2～4次，再用0.05～0.2％升汞浸泡5～15min，水冲洗4～6次。
4.根据权利要求1所述的短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，所述萌发培养基包括：ms培养基、0.5～1.5mg/l 6-ba、0～0.3mg/l naa、0～0.4mg/liba。
5.根据权利要求1所述的短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，所述诱导培养基包括：ms培养基、0.5～2mg/l 6-ba、0.01～0.1mg/l iba、0.05～0.5mg/l2,4-d。
6.根据权利要求1所述的短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养基包括：ms培养基、1～3mg/l 6-ba、0.05～0.1mg/l iba、0.05～0.1mg/l2,4-d、0～0.1g/l柠檬酸、0～1g/l pvp、0～1g/l活性炭。
7.根据权利要求1所述的短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养基包括：ms培养基、2mg/l 6-ba、0.1mg/l iba、0.1mg/l 2,4-d、0.1g/l柠檬酸。
8.根据权利要求1所述的短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，所述分化培养基包括：ms培养基、0.5～2mg/l 6-ba、0～0.5mg/l tdz、0.1～0.3mg/liba、0.2g/l酸水解络蛋白。
9.根据权利要求1所述的短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，所述分化培养基包括：ms培养基、2mg/l 6-ba、0.5mg/l tdz、0.2mg/l iba、0.2g/l酸水解络蛋白。
10.根据权利要求1所述的短萼仪花的组织培养方法，其特征在于，所述根诱导培养基包括：1/2ms培养基、0.1～0.5mg/lnaa、0～0.5mg/liba。
