本发明涉及生物，尤其是涉及一种用于肝癌检测的标志物组合物、肝癌检测试剂盒和装置。
背景技术：
1、如下陈述仅提供与本发明有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。
2、原发性肝癌是目前我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因，其主要包括肝细胞癌（hcc）、肝内胆管癌（icc）和混合型肝细胞癌-胆管癌（chcc-cca）三种不同的病理学类型。我国肝癌患者的五年生存率较低，只有12.1%，主要原因在于我国肝癌的早期确诊率低（低于30%），且晚期肝癌患者生存期只有半年到一年半。因此对肝癌高危人群的筛查和检测，有助于肝癌的“早发现、早诊断、早治疗”，能有效改善肝癌患者预后，提升肝癌患者生存期。依据《原发性肝癌诊疗指南（2024年版）》，我国肝癌高危人群主要包括具有乙型肝炎病毒和/或丙型肝炎病毒感染、过度饮酒、肝脂肪变性或代谢功能障碍相关性肝病、饮食中黄曲霉毒素b1的暴露、其他原因引起的肝硬化以及有肝癌家族史等人群，尤其是年龄大于40岁的男性。
3、目前指南推荐的首选肝癌筛查技术为腹部超声影像（us）联合血清甲胎蛋白（afp）检测，其对所有阶段及早期hcc的检测灵敏度分别为97%和63%。作为目前临床最常用的肝癌生物标志物，afp是一种单链糖蛋白，其水平与肝癌病灶大小及血管侵袭程度有关，但临床上afp的漏诊率高达30-40%。腹部us对于所有分期hcc的整体灵敏度达84%，但对早期hcc的整体灵敏度仅为47%，另外腹部us容易受到仪器性能、人为操作及医师主观判断的影响。因此，寻找新的肝癌标志物组合，并据此建立一套准确、便捷且经济的肝癌早期诊断方法便具有重要的价值和意义。
4、有鉴于此，特提出本发明。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种用于肝癌检测的标志物组合物，以缓解目前肝癌检测方面的不足。
2、为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
3、第一方面，提供了一种用于肝癌检测的标志物组合物，包括dna甲基化标志物，所述dna甲基化标志物包括第一dna甲基化标志物、第二dna甲基化标志物和第三dna甲基化标志物中的一个、两个或三个；
4、所述第一dna甲基化标志物定位于dab2ip基因chr9: 124460983- 124461369；
5、所述第二dna甲基化标志物定位于tspyl5基因chr8: 98290089- 98290315；
6、所述第三dna甲基化标志物定位于znf783基因chr7: 148982158-148982459。
7、第二方面，还提供了第一方面的标志物组合物的物质在制备肝癌筛查和/或诊断产品中的应用。
8、第三方面，还提供了一种肝癌检测试剂盒，所述肝癌检测试剂盒用于检测第一方面所述的标志物组合物；所述肝癌检测试剂盒包括引物探针组合物，所述引物探针组合物包括第一引物探针组合物、第二引物探针组合物和第三引物探针组合物中的一种、两种或三种；
9、所述第一引物探针组合物用于检测所述第一dna甲基化标志物，包括（a1）~（a3）中的一种或多种：
10、（a1）引物对dab2ip-f1和dab2ip-r1，dab2ip-f1如seq id no.7所示，dab2ip-r1如seq id no.8所示；和，核苷酸序列如seq id no.9所示的探针dab2ip-p1；
11、（a2）引物对dab2ip-f2和dab2ip-r2，dab2ip-f2如seq id no.10所示，dab2ip-r2如seq id no.11所示；和，核苷酸序列如seq id no.12所示的探针dab2ip-p2；
12、（a3）引物对dab2ip-f3和dab2ip-r3，dab2ip-f3如seq id no.13所示，dab2ip-r3如seq id no.14所示；和，核苷酸序列如seq id no.15所示的探针dab2ip-p3；
13、所述第二引物探针组合物用于检测所述第二dna甲基化标志物，包括（b1）~（b3）中的一种或多种：
14、（b1）引物对tspyl5-f1和tspyl5-r1，tspyl5-f1如seq id no.16所示，tspyl5-r1如seq id no.17所示；和，核苷酸序列如seq id no.18所示的探针tspyl5-p1；
15、（b2）引物对tspyl5-f2和tspyl5-r2，tspyl5-f2如seq id no.19所示，tspyl5-r2如seq id no.20所示；和，核苷酸序列如seq id no.21所示的探针tspyl5-p2；
16、（b3）引物对tspyl5-f3和tspyl5-r3，tspyl5-f3如seq id no.22所示，tspyl5-r3如seq id no.23所示；和，核苷酸序列如seq id no.24所示的探针tspyl5-p3；
17、所述第三引物探针组合物用于检测所述第三dna甲基化标志物，包括（c1）~（c3）中的一种或多种：
18、（c1）引物对znf783-f1和znf783-r1，znf783-f1如seq id no.25所示，znf783-r1如seq id no.26所示；和，核苷酸序列如seq id no.27所示的探针znf783-p1；
19、（c2）引物对znf783-f2和znf783-r2，znf783-f2如seq id no.28所示，znf783-r2如seq id no.29所示；和，核苷酸序列如seq id no.30所示的探针znf783-p2；
20、（c3）引物对znf783-f3和znf783-r3，znf783-f3如seq id no.31所示，znf783-r3如seq id no.32所示；和，核苷酸序列如seq id no.33所示的探针znf783-p3。
21、第四方面，还提供了一种肝癌检测装置，所述肝癌检测装置包括数据采集模块和数据分析模块，所述数据采集模块用于获取第一方面所述的用于肝癌检测的标志物组合物的测量值，所述数据分析模块执行诊断模型，并输出诊断结果。
22、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
23、本发明提供的用于肝癌检测的标志物组合物作为诊断肝癌的标靶具有较高的灵敏度和特异性，基于该肝癌的标志物组合物的肝癌检测检测装置通过检测个体样本中的dna甲基化标志物水平，进行肝癌检测和模型分析，并根据输出的模型分数判断个体是否患有肝癌。本发明提供的肝癌检测试剂盒和检测装置有助于实现无创检测，具有较高的灵敏度和特异性，且使用流程简便，试剂成本低廉，因此为早期肝癌的筛查和诊断提供了新的策略和途径。
1.用于肝癌检测的标志物组合物，其特征在于，包括dna甲基化标志物，所述dna甲基化标志物包括第一dna甲基化标志物、第二dna甲基化标志物和第三dna甲基化标志物中的一个、两个或三个；
2.根据权利要求1所述的标志物组合物，其特征在于，所述标志物组合物还包括蛋白标志物，所述蛋白标志物包括afp蛋白和/或dcp蛋白。
3.检测权利要求1或2所述的标志物组合物的物质在制备肝癌筛查和/或诊断产品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，检测所述标志物组合物的物质包括检测试剂和/或检测设备；所述检测试剂和/或检测设备用于实现检测dna甲基化标志物和/或用于实现检测蛋白标志物；
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括dna甲基化标志物检测试剂，dna甲基化标志物检测试剂包括用于dna重亚硫酸盐转化的甲基化前处理试剂、用于多核苷酸扩增的试剂、用于多核苷酸扩增产物检测的试剂、用于测序文库构建的试剂和用于测序的试剂中的一种或多种。
6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述检测试剂还包括特异性结合afp蛋白的抗体和/或特异性结合dcp蛋白的抗体；
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述用于分离和/或富集受试者样本的试剂包括用于分离和/或富集细胞外游离dna。
8.肝癌检测试剂盒，其特征在于，所述肝癌检测试剂盒用于检测权利要求1或2所述的标志物组合物；所述肝癌检测试剂盒包括引物探针组合物，所述引物探针组合物包括第一引物探针组合物、第二引物探针组合物和第三引物探针组合物中的一种、两种或三种；
9.根据权利要求8所述的肝癌检测试剂盒，其特征在于，所述第一引物探针组合物、所述第二引物探针组合物和所述第三引物探针组合物中的探针分别独立的标记有发光基团和淬灭基团。
10.根据权利要求8所述的肝癌检测试剂盒，其特征在于，所述引物探针组合物包括第一引物探针组合物，所述第一引物探针组合物包括引物对dab2ip-f1和dab2ip-r1，和探针dab2ip-p1；第二引物探针组合物，所述第二引物探针组合物包括引物对tspyl5-f1和tspyl5-r1，和探针tspyl5-p1；和第三引物探针组合物，所述第三引物探针组合物包括引物对znf783-f1和znf783-r1，和探针znf783-p1。
11. 根据权利要求8所述的肝癌检测试剂盒，其特征在于，所述引物探针组合物还包括用于检测内参基因的引物探针组合物，所述内参基因包括b2m，所述用于检测内参基因的引物探针组合物包括核苷酸序列分别如seq id no.34和35所示的引物对，和seq id no.36所示的探针。
12. 根据权利要求8~11任一项所述的肝癌检测试剂盒，其特征在于，所述引物探针组合物中各引物的工作浓度分别独立的为0.1-0.8 μm，和/或，各探针的工作浓度分别独立的为0.1-0.4 μm。
13. 根据权利要求8~11任一项所述的肝癌检测试剂盒，其特征在于，所述肝癌检测试剂盒包括引物探针混合试剂、qpcr mix和无核酸酶的水；
14.根据权利要求8~11任一项所述的肝癌检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括蛋白标志物检测试剂，所述蛋白标志物检测试剂包括免疫检测的试剂，所述免疫检测包括酶联免疫法、化学发光免疫法、电化学发光免疫法和免疫比浊法中至少一种；
15.肝癌检测装置，其特征在于，包括数据采集模块和数据分析模块，所述数据采集模块用于获取权利要求1或2所述的用于肝癌检测的标志物组合物的测量值，所述数据分析模块执行诊断模型，并输出诊断结果。
16.根据权利要求15所述的肝癌检测装置，其特征在于，所述用于肝癌检测的标志物组合物的测量值包括从受试者中获取的dna样本经重亚硫酸盐转化后，对所述dna甲基化标志物所在片段进行扩增后，每个dna甲基化标志物对应的扩增反应的ct值；和/或，所述用于肝癌检测的标志物组合物的测量值包括各蛋白标志物在受试者样本中的浓度。
17.根据权利要求15所述的肝癌检测装置，其特征在于，所述标志物组合物的测量值使用权利要求8~14任一项所述的肝癌检测试剂盒获得。
18.根据权利要求15所述的肝癌检测装置，其特征在于，所述诊断模型包括逻辑回归、决策树、注册向量机或线性感知机模型。
19. 根据权利要求18所述的肝癌检测装置，其特征在于，诊断模型为逻辑回归模型，逻辑回归公式为：score = 1/(1+e-z)；其中score为逻辑回归分数，e为自然底数，z为各项标志物测量值数据乘以对应权重之和加上偏置项所得值，当score大于或等于阈值时，判定受试者为肝癌阳性，当score小于阈值时，判定受试者为肝癌阴性。
