本发明属于分子生物学检测,尤其涉及一种抗病力强的藏绵羊分子标记辅助选育方法。
背景技术:
1、青藏高原地区的特点为:海拔高、气压低、紫外线强、缺氧等,该地区的环境恶劣,需要更高抗病力的藏绵羊来适应这样的环境。因此,筛选高抗病力的藏绵羊亟需解决。
2、从抗病力的遗传基础出发,筛选抗性基因,从分子水平开展抗病育种,从遗传上提高藏绵羊对疾病的抗性,增强免疫力可以提高藏绵羊的抗病能力。
3、免疫指标可以反映动物的抗病力。免疫指标包括抗体水平、免疫细胞数量和功能等。抗体是由b细胞产生的蛋白质分子,能特异性地结合或中和病原体,增强免疫反应。免疫细胞的数量和功能也是反映免疫系统状态的指标。当免疫系统受到挑战时,免疫细胞会被活化并开始增殖,防止病原体的入侵。免疫细胞会分化为更多的效应细胞,如巨噬细胞和细胞毒性t细胞等,以消灭病原体。
4、由此可知,免疫指标可以作为评估动物抗病能力和健康状况的参考。通过监测免疫指标的变化,可以及时发现动物的免疫问题,并采取相应的措施来提高其抗病能力,预防和治疗疾病。
5、随着分子标记技术的迅猛发展,为人们在分子水平上研究藏绵羊抗病能力的遗传机理鉴定了基础,筛选获得相应的分子标记以便于更高效的用于藏绵羊抗病育种中,是本领域的一种重要问题。现有技术中与藏绵羊免疫力相关的分子标记进行抗病力相关的分子标记辅助选择并不多,因此提供一种与藏绵羊免疫性状相关的分子标记,从而用于藏绵羊分子标记辅助育种中,显得尤为重要。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种抗病力强的藏绵羊分子标记辅助选育方法。
2、为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
3、本发明提供了一种用于辅助选育抗病力强的藏绵羊的分子标记,所述分子标记位于绵羊参考基因组oar_v4.0版本第3号染色体上第164719075个碱基处,突变碱基为t或c。
4、优选的,突变碱基为t的藏绵羊的基因型为tt或tc;
5、突变碱基为c的藏绵羊的基因型为cc;
6、基因型为cc的藏绵羊个体中免疫球蛋白a和免疫球蛋白g的含量显著高于基因型为tc或tt的藏绵羊个体;
7、基因型为tc的藏绵羊个体中免疫球蛋白a和免疫球蛋白g的含量显著高于基因型为tt的藏绵羊个体;
8、基因型为tc的藏绵羊个体或基因型为cc的藏绵羊个体中的免疫球蛋白m的含量显著高于基因型为tt的藏绵羊个体;
9、基因型为tc的藏绵羊个体和基因型为cc的藏绵羊个体中的免疫球蛋白m的含量差异不显著。
10、本发明还提供了所述的分子标记在制备辅助选育抗病力强的藏绵羊的产品中的应用。
11、本发明还提供了扩增所述的分子标记的引物对,所述引物对如seq id no.1~2所示。
12、本发明还提供了所述的引物对在制备辅助选育抗病力强的藏绵羊的产品中的应用。
13、本发明还提供了一种抗病力强的藏绵羊分子标记辅助选育方法,包括如下步骤:
14、(1)提取藏绵羊基因组dna;
15、(2)以步骤(1)得到的基因组dna为模板,利用所述的引物对进行扩增,得到pcr扩增产物;
16、(3)对pcr扩增产物进行基因型分析,得到不同基因型的藏绵羊,将藏绵羊的基因型与免疫球蛋白关联,筛选免疫球蛋白含量高的藏绵羊,得到抗病力强的藏绵羊;
17、分子标记位点为t的藏绵羊的基因型为tt或tc;
18、分子标记位点为c的藏绵羊的基因型为cc。
19、优选的,步骤(2)所述扩增的体系为:金牌mix(green)21~23μl,上、下游引物各0.8~1.2μl,模板0.8~1.2μl。
20、优选的,步骤(2)所述扩增的程序为:98℃2min;98℃10s,56.5℃10s,72℃10s,共40个循环;72℃延伸2min。
21、本发明还提供了所述的藏绵羊分子标记辅助选育方法在筛选高抗病力的藏绵羊中的应用。
22、本发明还提供了一种辅助选育高抗病力的藏绵羊的试剂盒,包括所述的分子标记或所述的引物对。
23、本发明提供了一种抗病力强的藏绵羊分子标记辅助选育方法。本发明涉及一种用于辅助选育抗病力强的藏绵羊的分子标记,所述分子标记位于绵羊参考基因组oar_v4.0版本第3号染色体上第164719075个碱基处,突变碱基为t或c。第164719075个碱基处为t时,基因型为tt或tc;第164719075个碱基处为c时,基因型为cc;通过不同基因型与免疫球蛋白a、免疫球蛋白g、免疫球蛋白m含量的关联分析,发现,基因型为cc的藏绵羊个体中免疫球蛋白a和免疫球蛋白g的含量显著高于基因型为tc或tt的藏绵羊个体(p<0.05);基因型为tc的藏绵羊个体中免疫球蛋白a和免疫球蛋白g的含量显著高于基因型为tt的藏绵羊个体(p<0.05);基因型为tc的藏绵羊个体或基因型为cc的藏绵羊个体中的免疫球蛋白m的含量显著高于基因型为tt的藏绵羊个体(p<0.05);基因型为tc的藏绵羊个体和基因型为cc的藏绵羊个体中的免疫球蛋白m的含量差异不显著。本发明还设置得到可以扩增第164719075个碱基处基因片段的引物对,利用该引物对以及本发明藏绵羊分子标记辅助选育方法来检测藏绵羊第3号染色体上第164719075个核苷酸位点的碱基,能够得出藏绵羊个体的免疫球蛋白a、免疫球蛋白g和免疫球蛋白m的含量,为非诊断目的的藏绵羊免疫性状标记辅助选择提供了新的分子标记资源。为高免疫力和高抗病力的藏绵羊育种提供依据。
1.一种用于辅助选育抗病力强的藏绵羊的分子标记,其特征在于,所述分子标记位于绵羊参考基因组oar_v4.0版本第3号染色体上第164719075个碱基处,突变碱基为t或c。
2.根据权利要求1所述的分子标记,其特征在于,突变碱基为t的藏绵羊的基因型为tt或tc;
3.权利要求1或2所述的分子标记在制备辅助选育抗病力强的藏绵羊的产品中的应用。
4.扩增权利要求1或2所述的分子标记的引物对,其特征在于,所述引物对如seq idno.1~2所示。
5.权利要求4所述的引物对在制备辅助选育抗病力强的藏绵羊的产品中的应用。
6.一种抗病力强的藏绵羊分子标记辅助选育方法,其特征在于,包括如下步骤:
7.根据权利要求6所述的藏绵羊分子标记辅助选育方法,其特征在于,步骤(2)所述扩增的体系为:金牌mix(green)21~23μl,上、下游引物各0.8~1.2μl,模板0.8~1.2μl。
8.根据权利要求7所述的藏绵羊分子标记辅助选育方法,其特征在于,步骤(2)所述扩增的程序为:98℃2min;98℃10s,56.5℃10s,72℃10s,共40个循环;72℃延伸2min。
9.权利要求6~8任意一项所述的藏绵羊分子标记辅助选育方法在筛选高抗病力的藏绵羊中的应用。
10.一种辅助选育高抗病力的藏绵羊的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1~2任意一项所述的分子标记或权利要求4所述的引物对。