【】本发明涉及基因药物，特别涉及lncrna-dapk1-it1作为脑卒中治疗靶点中的应用。
背景技术
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背景技术：
1、随着基因工程研究的深入，科学家对运用基因工程研制药物表现出浓厚的兴趣。长链非编码rna(long non-coding rna，lncrna)是一类存在于部分真核生物细胞转录组中，长度大于200核苷酸，不能够翻译为蛋白质的rna分子。大部分的lncrna缺少有效的开放阅读框，但是，它们可以进行剪接、加帽和聚腺苷酸化。lncrna作为rna聚合酶ⅱ转录的副产物，因为其无法翻译为蛋白质，起初被认为是基因转录的副产物，视其为多余的“噪音”。然而，在1991年证实了lncrnaxist参与x染色体失活的调控后，lncrna逐渐引起研究人员的注意，并受到了广泛关注。相继有许多研究表明lncrna直接或间接参与调控各种生物过程，例如细胞凋亡、分化、血管生成和增殖等，并且其在乳腺癌、肺癌、脑卒中、心力衰竭等不同疾病中发挥了重要作用。与它的一级结构相比，lncrna的二级和三级结构就相对保守一些，而lncrna发挥其广泛的生物学功能则有赖于转录后修饰所形成茎环和发卡等二级结构。lncrna通过与其他分子(dna、rna、蛋白质等)相互作用而发挥其功能性作用。科学家已证实，lncrna的核苷酸序列在不同物种间高度保守，突变率极低，其表达有基因簇集现象，时空及组织特异性。lncrna在转录后水平调控蛋白质的表达谱来决定细胞分化、胚胎发育等一系列重要生命活动的进程及多样性，为我们rna调控的角度揭示疾病发生机制提供理论基础，并为疾病诊断和治疗提供新的基因靶点和分子标记。
2、现有技术存在的缺点：脑卒中(cerebral stroke)是一种急性脑血管疾病，具体的发病机制起源于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑，引起脑组织损伤的一类疾病，俗称“中风”。世界卫生组织已经报道了脑卒中是全世界致死率居高不下的第二大因素，每年造成至600万人死亡。在发达国家，脑卒中也是造成永久性伤残的主要原因，导致了健康产业的经济缺失。预测截至2030年，脑卒中的致死率在全世界将超过12％。在我国，脑卒中也是造成永久性伤残的主要原因，导致了健康产业的经济缺失。脑卒中主要包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中两种，而缺血性脑卒中约占其中发病75％。当前，无论使用静脉药物溶栓还是动脉机械取栓等方法，即使在短时间内恢复脑血流供应，仍然无法避免脑缺血/再灌注损伤的发生。因此，寻找与研发确切有效的新的治疗药物迫在眉睫。而目前，并未有相关资料显示可将lncrna-dapk1-it1应用于制备治疗缺血性脑卒中药物中，更未见报道有验证lncrna-dapk1-it1是否能够作为药物开发的靶点，真正有利于缺血性脑卒中等脑血管疾病的治疗。
技术实现思路
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技术实现要素：
1、鉴于上述内容，有必要针对脑卒中进行新靶位点的研究，找出适合制备治疗缺血性脑卒中药物的新靶点，并对靶位点进行模型验证。
2、为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
3、lncrna-dapk1-it1作为脑卒中治疗靶点中的应用。
4、抑制lncrna-dapk1-it1的功能性表达的抑制剂在制备治疗脑卒中药物中的应用。
5、进一步的，所述lncrna-dapk1-it1的核酸序列如seq id no.1所示。
6、进一步的，所述抑制剂为shrna，shrna的正义链如seq id no.2所示，反义链如seqid no.3所示。其中，seq id no.2序列为：5’-gatccgaggtcctgagttgcctttattca agagatttaacaactcaggacctttttttggaaa-3’seq id no.3序列为：5’-agctttt ccaaaaaaggtcctgagatgtttaaatctcttgaaaataaacaactcaggacctcg-3’。
7、本发明具有如下有益效果：
8、1、本发明的lncrna-dapk1-it1为制备治疗缺血性脑卒中提供了一个新的靶点，通过对小鼠局灶性脑缺血再灌注模型分析发现：lncrna-dapk1-it1是一种新型的缺血再灌注诱导的lncrna靶点，lncrna-dapk1-it1在大脑中动脉闭塞/再灌注(mcao/r)小鼠脑组织和氧-葡萄糖剥夺/再氧合(ogd/r)处理的小鼠成神经瘤细胞n2a细胞中表达水平升高，结果提示，lncrna-dapk1-it1通过与mir-25-3p竞争性结合促进其降解，介导mir-25-3p负向调控hmgb1的激活，从而导致脑缺血再灌注时组织氧化应激损伤；此外，lncrna-dapk1-it1下调在ogd/r和mcao/r病理过程中作为hmgb1的抑制剂，提示lncrna-dapk1-it1下调对脑缺血再灌注损伤具有保护作用，以应用于制备治疗缺血性脑卒中药物，有利于避免脑缺血/再灌注损伤的发生，并具有很好的临床应用市场前景。lncrna-dapk1-it1通过调控mir-25-3p/hmgb1，在氧化应激损伤中发挥重要作用，是缺血性脑卒中的新治疗靶点。采用shrna对lncrna-dapk1-it1靶点进行沉默后可有效降低脑内mda、ros水平，并增加sod、gshpx表达，从而发挥对缺血性脑卒中的治疗作用，lncrna-dapk1-it1用于治疗的最佳使用时间是在治疗对象出现缺血性脑卒中症状之后施用。lncrna-dapk1-it1抑制剂可以应用于制备治疗缺血性脑卒中的口服类药物、注射类药物，以及其他治疗缺血性脑卒中的措施中。
1.lncrna-dapk1-it1作为脑卒中治疗靶点中的应用。
2.抑制lncrna-dapk1-it1的功能性表达的抑制剂在制备治疗脑卒中药物中的应用。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述lncrna-dapk1-it1的核酸序列如seqid no.1所示。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为shrna，shrna的正义链如seqid no.2所示，反义链如seq id no.3所示。
