本公开涉及治疗个体中的眼部新生血管性疾病和病症的方法，所述方法包括向个体的眼睛施用单一单位剂量的编码抗vegf剂(例如，阿柏西普(aflibercept))的重组腺相关病毒(raav)颗粒。
背景技术：
1、年龄相关性黄斑变性(amd)是一种影响黄斑的退行性眼部疾病，黄斑是视网膜中心中的一块光敏感的小区域，其负责阅读和精细视觉。影响黄斑的病状降低中央视力，同时保持周边视力完整。在严重的情况下，所述疾病可能导致中枢性失明。amd是美国65岁及以上人群视力丧失的一个重要原因，并且40岁以上人群中任何amd的估计的患病率为大约6.5％(klein等人,(2011)arch ophthalmol,129(1):75-80)。新生血管性或渗出性或湿性amd(namd、wamd或nwamd)是amd的一种晚期形式。wamd的标志是脉络膜新血管形成(cnv)，即来自下层脉络膜层的异常血管在视网膜中的浸润，其导致视网膜细胞损伤和中枢性失明。这种异常的血管生成过程受生长因子特别是血管内皮生长因子(vegf)的调节。wamd的标准护理是一类与vegf结合并隔离vegf的分子，诸如雷珠单抗(lucentis)和阿柏西普(eylea)。
2、糖尿病性视网膜病变(dr)是糖尿病的主要并发症，并且是工作年龄群体视力丧失的首要原因。dr可能是非增殖性的(npdr)，没有新的血管生长，或可能是增殖性dr(pdr)，视网膜或脉络膜内有新的异常血管生长。糖尿病性黄斑水肿(dme)是dr的并发症，并且是影响黄斑的另一种眼部疾病的实例。dme影响多至10％的糖尿病患者，并且是由黄斑中液体积聚引起的。dme是dr患者视力丧失的最常见原因。用于治疗dme的可用疗法包括激光和抗血管内皮生长因子(抗vegf)药物，诸如阿柏西普。
3、阿柏西普是一种重组融合蛋白，其充当血管内皮生长因子亚型a和b(vegf-a和vegf-b)和胎盘生长因子(pgf)的诱饵受体。通过结合这些配体，阿柏西普能够阻止它们与血管内皮生长因子受体(vegfr)vegfr-1和vegfr-2结合，以抑制新血管形成并且降低血管通透性。阿柏西普由与igg1的fc片段融合的vegfr-1的结构域2和vegfr-2的结构域3组成。
4、目前的标准护理抗vegf剂(诸如阿柏西普)需要每4至8周经由玻璃体内(ivt)注射重新施用，以实现最佳治疗结果并维持视敏度。遵守此种方案对患者、他们的护理人员和医疗保健系统来说都是繁重的，并且大多数患者随着时间的推移不再遵守最佳方案，这与视力丧失相关(khanani am等人)。此外，还存在并发症，包括眼内炎、视网膜脱离、外伤性白内障和眼内压(iop)升高；这些并发症的风险可能随着重复ivt注射而增加(falavarjani等人,(2013)eye(lond),27(7):787-794)。
5、因此，本领域需要有效、降低副作用的风险并适合高长期患者依从性的用于眼部新生血管性疾病诸如wamd、dr或dme的疗法。
技术实现思路
1、在一个方面，本文提供了一种用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法，所述方法包括向个体的一只眼睛施用单位剂量的约6×1011个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其中个体为人，并且其中raav颗粒包含：(a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seq id no:35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列；和(b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lgettrp(seq id no:14)或由其组成，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，所述方法包括减少个体眼睛中的视网膜液。
2、在另一方面，本文提供了一种用于减少患有眼部新生血管性疾病的个体的眼睛中的视网膜液的方法，所述方法包括向个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒，其中个体为人，并且其中raav颗粒包含：(a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seq id no:35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列；和(b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lgettrp(seq idno:14)或由其组成，其中氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，个体在施用单位剂量的raav颗粒之前约最近12周内已接受过至少一次抗vegf剂治疗。在一些实施方案中，个体的一只眼睛中的视网膜液的量或存在是使用抗vegf剂的先前治疗难治的。在一些实施方案中，抗vegf剂为阿柏西普。在一些实施方案中，一只眼睛中的视网膜液减少了至少约60％。在一些实施方案中，与向个体施用raav之前个体的一只眼睛中的视网膜液水平相比，所述一只眼睛中的视网膜液减少了约80％。在一些实施方案中，视网膜液为视网膜下液(srf)或视网膜内液(irf)。在一些实施方案中，raav颗粒的单位剂量为约6×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)或更少。
3、在另一方面，本文提供了一种用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法，所述方法包括：(a)向个体的一只眼睛施用抗vegf剂；和(b)在施用抗vegf剂之后向个体的一只眼睛施用单位剂量的约6×1011个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其中个体为人，并且其中raav颗粒包含：(i)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seq id no:35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列，和(ii)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lgettrp(seq id no:14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，所述方法包括在施用抗vegf剂之后约1周或约7天向个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，所述方法包括在施用抗vegf剂之后约1周至约2周向个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，所述方法包括在施用抗vegf剂之后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天或约15天向个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，所述方法包括在第1天向个体的一只眼睛施用抗vegf剂，和在第8天向个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，抗vegf剂包括阿柏西普。在一些实施方案中，阿柏西普以约2mg的剂量通过玻璃体内注射施用。在一些实施方案中，所述方法还包括施用局部类固醇治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约四周，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一周，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一周，以及随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一周；从施用抗vegf剂开始和之后计时。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约一个月，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一个月，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一个月，以及随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一个月；从施用抗vegf剂开始和之后计时。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约一个月，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一个月，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一个月，以及随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一个月；从施用raav颗粒开始和之后计时。在一些实施方案中，局部类固醇包括约1μg至约3μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。在一些实施方案中，局部类固醇包括约2.5μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。
4、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，raav颗粒的单位剂量为约6×1010至约2×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。在一些实施方案中，raav颗粒的单位剂量为约2×1011或约6×1010个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，raav颗粒的单位剂量在约6×1010至约6×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)之间。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，raav颗粒的单位剂量在约6×1010至约2×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)之间。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，raav颗粒的单位剂量在约2×1011至约6×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)之间。在一些实施方案中，raav颗粒的单位剂量为约2×1011或约6×1010个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。在一些实施方案中，raav颗粒的单位剂量为约2×1011vg/眼睛。在一些实施方案中，raav颗粒的单位剂量为约6×1011vg/眼睛。
5、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，个体在对侧眼睛中具有眼部新生血管性疾病的一种或多种症状。
6、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本文提供的方法还包括向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至多约2周进行的。在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒与向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒在同一天；或者向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后约1天至约14天之间。在一些实施方案中，与向个体的一只眼睛施用的raav颗粒的单位剂量相比，向个体的对侧眼睛施用的raav颗粒的单位剂量包含相同或更少的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至少约2周进行的。在一些实施方案中，与向个体的一只眼睛施用的raav颗粒的单位剂量相比，向个体的对侧眼睛施用的raav颗粒的单位剂量包含更多的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。
7、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，核酸包含seq id no:40的核酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。
8、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，多肽包含seq id no:35的氨基酸序列。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，多肽包含seq id no:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽为阿柏西普。
9、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，核酸还包含第一增强子区、启动子区、5'utr区、第二增强子区和聚腺苷酸化位点。在一些实施方案中，核酸以5'至3'顺序包含：(a)第一增强子区；(b)启动子区；(c)5'utr区；(d)编码包含与seq id no:35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列的多肽的核酸；(e)第二增强子区；和(f)聚腺苷酸化位点；并且侧接aav2反向末端重复序列(itr)。在一些实施方案中，第一增强子区包含cmv序列，所述cmv序列包含seq id no:22的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，启动子区包含cmv序列，所述cmv序列包含seq id no:23的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，编码多肽的核酸包含seq id no:40的核酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，所述多肽包含seq id no:35的氨基酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，所述多肽包含seq idno:41的氨基酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，所述多肽为阿柏西普。在一些实施方案中，5'utr区以5'至3'顺序包含tpl序列和emlp序列，所述tpl序列包含seq id no:24的序列或与其具有至少85％同一性的序列，所述emlp序列包含seq idno:25的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，第二增强子区包含完整ees序列，其包含seq id no:26的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，聚腺苷酸化位点包含hgh聚腺苷酸化位点，其包含seq id no:27的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，核酸还包含(a)第一增强子区，其包含含有seqid no:22的序列或与其具有至少85％同一性的序列的cmv序列；(b)启动子区，其包含含有seq id no:23的序列或与其具有至少85％同一性的序列的cmv序列；(c)5'utr区，其以5'至3'顺序包含tpl序列和emlp序列，所述tpl序列包含seq id no:24的序列或与其具有至少85％同一性的序列，所述emlp序列包含seq id no:25的序列或与其具有至少85％同一性的序列；(d)第二增强子区，其包含含有seq id no:26的序列或与其具有至少85％同一性的序列的完整ees序列；和(e)hgh聚腺苷酸化位点，其包含seq id no:27的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，核酸包含侧接元件的aav itr。
10、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，核酸包含seq id no:39的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
11、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，raav颗粒包含aav2 vp1衣壳蛋白，其包含含有seq id no:38的氨基酸序列或与seq id no:38具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的gh环。在一些实施方案中，raav颗粒包含aav2 vp1衣壳蛋白，其包含含有与seq id no:38具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％中任一个的序列同一性的氨基酸序列的gh环。
12、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，raav颗粒包含aav2 vp1衣壳蛋白，其包含seq id no:37的氨基酸序列或与seq id no:37具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，raav颗粒包含aav2 vp1衣壳蛋白，其包含与seq id no:37具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％中任一个的序列同一性的氨基酸序列。
13、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，aav2衣壳蛋白包含插入在包含seq id no:13的序列的aav2 vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seq id no:14)或由其组成。在一些实施方案中，aav2衣壳蛋白包含插入在所述衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seq id no:1)，其中氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，aav2衣壳蛋白包含插入在包含seq id no:13的序列的aav2vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seq id no:1)。在一些实施方案中，aav2衣壳蛋白包含插入在所述衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seq id no:1)，其中氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，aav2衣壳蛋白包含插入在包含seq id no:13的序列的aav2 vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seq id no:1)。
14、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是通过玻璃体内施用进行的。
15、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒在药物制剂中。在一些实施方案中，药物制剂包含raav颗粒、氯化钠、磷酸钠和表面活性剂。在一些实施方案中，药物制剂包含约150至约200mm氯化钠、约1至约10mm磷酸二氢钠、约1至约10mm磷酸氢二钠、约0.0005％(w/v)至约0.005％(w/v)泊洛沙姆188和约6×1013至约6×1010个载体基因组(vg)/ml(vg/ml)的raav颗粒，其中药物制剂具有约7.0至约7.5的ph。在一些实施方案中，药物制剂包含约180mm氯化钠、约5mm磷酸二氢钠、约5mm磷酸氢二钠、约6×1012vg/ml的raav颗粒和约0.001％(w/v)泊洛沙姆188，其中药物制剂具有约7.3的ph。在一些实施方案中，药物制剂包含约180mm氯化钠、约5mm磷酸二氢钠、约5mm磷酸氢二钠、约2×1012vg/ml的raav颗粒和约0.001％(w/v)泊洛沙姆188，其中药物制剂具有约7.3的ph。在一些实施方案中，药物制剂包含约180mm氯化钠、约5mm磷酸二氢钠、约5mm磷酸氢二钠、约6×1011vg/ml的raav颗粒和约0.001％(w/v)泊洛沙姆188，其中药物制剂具有约7.3的ph。
16、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约25μl至约250μl的体积。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约100μl的体积。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约30μl的体积。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒包含约25μl至约250μl的体积。在一些实施方案中，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒包含约100μl的体积。在一些实施方案中，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒包含约50μl的体积。在一些实施方案中，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒包含约30μl的体积。
17、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，个体接受了使用抗vegf剂对眼部新生血管性疾病的先前治疗。在一些实施方案中，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用raav颗粒之前，个体在一只眼睛和/或对侧眼睛中已接受过1次或2次抗vegf剂注射。在一些实施方案中，个体未接受过使用抗vegf剂对眼部新生血管性疾病的先前治疗。在一些实施方案中，抗vegf剂为阿柏西普。
18、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，眼部新生血管性疾病是湿性年龄相关性黄斑变性(amd)、视网膜新血管形成、脉络膜新血管形成糖尿病性视网膜病变、增殖性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、缺血性视网膜病变、糖尿病性视网膜水肿或其任何组合。
19、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒与类固醇治疗组合施用。在一些实施方案中，类固醇治疗为皮质类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为全身性类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为口服类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为泼尼松治疗。在一些实施方案中，口服泼尼松治疗包括从向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之前3天开始，以每天约60mg的剂量施用泼尼松，持续共6天，随后以每天约40mg的剂量施用泼尼松，持续共3天，随后以每天约20mg的剂量施用泼尼松，持续共2天，随后以每天约10mg的剂量施用泼尼松，持续共2天。在一些实施方案中，类固醇治疗为局部类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用类固醇。在一些实施方案中，在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用类固醇。
20、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，类固醇治疗为局部类固醇治疗，并且局部类固醇治疗为从施用单位剂量的raav颗粒起持续多至约4周、多至约6周或多至约8周的每日类固醇治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括在约第1周约四次施用局部类固醇，在约第2周约三次施用局部类固醇，在约第3周约两次施用局部类固醇，以及在约第4周约一次施用局部类固醇；从施用单位剂量的raav颗粒开始和之后计时。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括在施用单位剂量的raav颗粒之后每天约四次施用局部类固醇，持续约3周，随后每天约3次施用局部类固醇，持续约1周，随后每天约2次施用局部类固醇，持续约1周，以及随后每天约1次施用局部类固醇，持续约1周。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约四周，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一周，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一周，以及随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一周；在施用单位剂量的raav颗粒之前约一周开始计时。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约一个月，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一个月，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一个月，以及随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一个月；约在施用单位剂量的raav颗粒时开始计时。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约一个月，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一个月，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一个月，以及随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一个月；在施用单位剂量的raav颗粒之前约一周开始计时。在一些实施方案中，局部类固醇包括约1μg至约3μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。在一些实施方案中，局部类固醇包括约2.5μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。
21、在一些实施方案中，眼部新生血管性疾病为湿性年龄相关性黄斑变性(wamd)。
22、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致视网膜厚度维持或减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，视网膜厚度的维持或减少在向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后约30周、约34周、约44周、约6个月、约1年、约1.5年、约2年、约3年、约5年、约10年或更长时间存在。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致视网膜厚度减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，视网膜厚度减少至少约10％。在一些实施方案中，视网膜厚度为中央亚视场厚度(cst)或中央视网膜厚度(crt)。
23、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致黄斑体积维持或减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，黄斑体积的维持或减少在向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后约30周、约34周、约44周、约6个月、约1年、约1.5年、约2年、约3年、约5年、约10年或更长时间存在。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致黄斑体积减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，黄斑体积减少至少约10％。
24、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视敏度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致视敏度维持或改善。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视敏度相比，视敏度的维持或改善在向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后约30周、约34周、约44周、约6个月、约1年、约1.5年、约2年、约3年、约5年、约10年或更长时间存在。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视敏度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致视敏度改善。在一些实施方案中，视敏度为最佳矫正视敏度(best corrected visual acuity)(bcva)。
25、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单个单位剂量的raav颗粒提供治疗益处(例如，治疗眼部新生血管性疾病、减少视网膜液、维持或减少视网膜厚度、维持或减少黄斑体积和/或维持或改善视敏度)。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单个单位剂量的raav颗粒提供治疗益处，所述治疗益处在向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后约30周或更长时间、约34周或更长时间、约44周或更长时间、约6个月或更长时间、约1年或更长时间、约1.5年或更长时间，或约2年、约3年、约5年、约10年或更长时间存在。
26、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致多个个体中至少约50％的个体不需要抗vegf救援治疗。在一些实施方案中，多个个体中至少约50％的个体在施用单位剂量的raav颗粒之后至少约20周、至少约36周、至少约52周、至少约56周或更长时间不需要抗vegf救援治疗。
27、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单个单位剂量的raav颗粒导致多个个体中至少约67％的个体不需要抗vegf救援治疗。在一些实施方案中，多个个体中至少约67％的个体在施用单位剂量的raav颗粒之后至少约20周、至少约36周、至少约52周、至少约60周、至少约64周或至少约66周不需要抗vegf救援治疗。
28、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致多个个体中至少约78％的个体不需要抗vegf救援治疗。在一些实施方案中，多个个体中至少约78％的个体在施用单位剂量的raav颗粒之后至少约20周、至少约36周或更长时间不需要抗vegf救援治疗。
29、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致多个个体中100％的个体不需要抗vegf救援治疗。在一些实施方案中，多个个体中100％的个体在施用单位剂量的raav颗粒之后至少约64周、至少约68周、至少约72周、至少约76周、至少约80周、至少约84周或更长时间不需要抗vegf救援治疗。
30、在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的年化抗vegf注射率相比，向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致年化抗vegf注射率降低至少约80％、至少约85％、至少约87％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或100％。
31、在一些实施方案中，眼部新生血管性疾病为糖尿病性黄斑水肿(dme)。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致糖尿病性视网膜病变严重程度量表(drss)的2步或3步改善。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致糖尿病性视网膜病变严重程度量表(drss)的2步改善。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致糖尿病性视网膜病变严重程度量表(drss)的3步改善。
32、在一个实施方案中，提供了用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法。所述方法包括向个体的一只眼睛施用单位剂量的约2x 1011个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其中个体为人，并且其中raav颗粒包含：(a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与权利要求35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列；和(b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lgettrp(seq id no:14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。在所述方法的各种方面，患有眼部新生血管性疾病的个体的眼睛中的视网膜液减少。
33、在一个实施方案中，提供了用于减少患有眼部新生血管性疾病的个体的眼睛中的视网膜液的方法。所述方法包括向个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒，其中个体为人，并且其中raav颗粒包含：(a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seq id no:35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列；和(b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lgettrp(seq id no:14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。在所述方法的方面，个体在施用单位剂量的raav颗粒之前约12周内已接受过至少一次抗vegf剂的治疗。在各种方法的方面中，个体的一只眼睛中的视网膜液的量或存在是使用抗vegf剂的先前治疗难治的。在所述方法的此外的方面，抗vegf剂为阿柏西普。在任何上述方法的方面中，与向个体施用raav之前个体的一只眼睛中的视网膜液水平相比，所述一只眼睛中的视网膜液减少了约80％。在任何上述方法的方面中，视网膜液为视网膜下液(srf)或视网膜内液(irf)。
34、提供了用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法。所述方法包括：(a)向个体的一只眼睛施用抗vegf剂；和(b)在施用抗vegf剂之后向个体的一只眼睛施用单位剂量的约6x 1011个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其中个体为人，并且其中raav颗粒包含：(i)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seq id no:35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列；和(ii)aav衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lgettrp(seq id no:14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。所述方法的方面包括在施用抗vegf剂之后约1周或约7天向个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒。所述方法的方面包括在第1天向个体的一只眼睛施用抗vegf剂，和在第8天向个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在所述方法的方面，抗vegf剂包括阿柏西普。在所述方法的方面，阿柏西普以约2mg的剂量通过玻璃体内注射施用。
35、在上述方法的方面中，raav颗粒的单位剂量在约6x 1010至约6x 1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)之间。在上述方法的方面中，raav颗粒的单位剂量在约6x 1010至约2x1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)之间。在上述方法的一些方面，raav颗粒的单位剂量为约2x 1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。在上述方法的其他方面中，raav颗粒的单位剂量为约6x 1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。
36、在任何上述方法的方面中，个体在对侧眼睛中具有眼部新生血管性疾病的一种或多种症状。上述方法的各种方面还包括向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些方面，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至多约2周进行的。在一些方面，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒与向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒在同一天；或者向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后约1天至约14天之间。在一些方面，与向个体的一只眼睛施用的raav颗粒的单位剂量相比，向个体的对侧眼睛施用的raav颗粒的单位剂量包含相同或更少的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。在一些方面，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至少约2周进行的。在上述方法的一些方面，与向个体的一只眼睛施用的raav颗粒的单位剂量相比，向个体的对侧眼睛施用的raav颗粒的单位剂量包含更多的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。
37、在任何上述方法的方面中，核酸包含seq id no:40的核酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。在上述方法的方面，多肽包含seq id no:35的氨基酸序列。在任何上述方法的方面中，多肽包含seq id no:41的氨基酸序列。在任何所述方法的方面，多肽为阿柏西普。在所述方法的方面，核酸还包含第一增强子区、启动子区、5'utr区、第二增强子区和聚腺苷酸化位点。在所述方法的方面，核酸以5'至3'顺序包含：(a)第一增强子区；(b)启动子区；(c)5'utr区；(d)编码包含与seq id no:35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列的多肽的核酸；(e)第二增强子区；和(f)聚腺苷酸化位点；并且侧接aav2反向末端重复序列(itr)。在一些方面，第一增强子区包含cmv序列，所述cmv序列包含seq id no:22的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些方面，启动子区包含cmv序列，所述cmv序列包含seq id no:23的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在所述方法的一些方面，编码多肽的核酸包含seq id no:40的核酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。在各种方面，所述多肽包含seq id no:35的氨基酸序列或与其具有至少95％同一性的序列。在各种方面，所述多肽包含seq id no:41的氨基酸序列或与其具有至少95％同一性的序列。在一些方面，所述多肽为阿柏西普。在各种方面，5'utr区以5'至3'顺序包含tpl序列和emlp序列，所述tpl序列包含seq id no:24的序列或与其具有至少85％同一性的序列，所述emlp序列包含seq id no:25的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在所述方法的一些方面，第二增强子区包含完整ees序列，其包含seq id no:26的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在所述方法的某些方面，聚腺苷酸化位点包含hgh聚腺苷酸化位点，其包含seq idno:27的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
38、在所述方法的一个方面，核酸还包含(a)第一增强子区，其包含含有seq id no:22列出的序列或与其具有至少85％同一性的序列的cmv序列；(b)启动子区，其包含含有seqid no:23的序列或与其具有至少85％同一性的序列的cmv序列；(c)5'utr，其以5'至3'顺序包含tpl序列和emlp序列，所述tpl序列包含seq id no:24的序列或与其具有至少85％同一性的序列，所述emlp序列包含seq id no:25的序列或与其具有至少85％同一性的序列；(d)第二增强子区，其包含含有seq id no:26的序列或与其具有至少85％同一性的序列的完整ees序列；和(e)hgh聚腺苷酸化位点，其包含seq id no:27的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
39、在任何所述方法的方面，核酸包含seq id no:39的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
40、在任何上述方法的方面，aav2衣壳蛋白包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lgettrpa(seq id no:1)，其中氨基酸残基编号对应于包含seq id no:13的序列的aav2 vp1衣壳蛋白。在任何上述方法的方面，aav2衣壳蛋白包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seq id no:1)，其中氨基酸残基编号对应于包含seq id no:13的序列的aav2 vp1衣壳蛋白。
41、在任何上述方法的方面，raav颗粒包含aav2 vp1衣壳蛋白，其包含含有seq idno:38的氨基酸序列或与seq id no:38具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的gh环。
42、提供了任何上述方法的方面，其中向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是通过玻璃体内施用进行的。
43、在任何上述方法的方面，单位剂量的raav颗粒在药物制剂中。在一些方面，药物制剂包含raav颗粒、氯化钠、磷酸钠和表面活性剂。在上述方法的一个方面，药物组合物包含约150至约200mm氯化钠、约1至约10mm磷酸二氢钠、约1至约10mm磷酸氢二钠、约0.0005％(w/v)至约0.0005％(w/v)泊洛沙姆188和约6x 1013至约6x 1010个载体基因组(vg)/ml(vg/ml)的raav颗粒，其中药物制剂具有约7.0至约7.5的ph。在一些方面，药物组合物包含约180mm氯化钠、约5mm磷酸二氢钠、约5mm磷酸氢二钠、约6x 1012vg/ml的raav颗粒和约0.001％(w/v)泊洛沙姆188，其中药物制剂具有约7.3的ph。在一些方面，药物组合物包含约180mm氯化钠、约5mm磷酸二氢钠、约5mm磷酸氢二钠、约6x 1011vg/ml的raav颗粒和约0.001％(w/v)泊洛沙姆188，其中药物制剂具有约7.3的ph。
44、在任何上述方法的方面，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒为约25μl至约250μl的体积。在一些方面，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒包含约100μl的体积。在一些方面，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒包含约30μl的体积。
45、在上述方法的方面，个体接受了使用抗vegf剂对眼部新生血管性疾病的先前治疗。在一些方面，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用raav颗粒之前，个体在一只眼睛和/或对侧眼睛中已接受过1次或2次抗vegf剂注射。
46、在一些上述方法的方面，个体未接受过使用抗vegf剂对眼部新生血管性疾病的先前治疗。
47、在上述方法中任一种的方面，抗vegf剂是阿柏西普。
48、在上述方法中任一种的方面，眼部新生血管性疾病是湿性年龄相关性黄斑变性(amd)、视网膜新血管形成、脉络膜新血管形成糖尿病性视网膜病变、增殖性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、缺血性视网膜病变、糖尿病性视网膜水肿或其任何组合。
49、在上述方法的方面，单位剂量的raav颗粒与类固醇治疗组合施用。在某些方面，类固醇治疗为皮质类固醇治疗。在一些方面，类固醇治疗为全身性类固醇治疗。在各种方面，类固醇治疗为口服类固醇治疗。在一些方面，类固醇治疗为泼尼松治疗。在所述方法的某些方面，类固醇治疗为局部类固醇治疗。在所述方法的方面，类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。在上述方法的方面，在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用类固醇。
50、在一些方法的方面，类固醇治疗为局部类固醇治疗，并且局部类固醇治疗为从施用单位剂量的raav颗粒起持续多至约4周、多至约6周或多至约8周的每日类固醇治疗。在上述方法的一些方面，局部类固醇治疗包括在约第1周每天约四次施用局部类固醇，在约第2周每天约三次施用局部类固醇，在约第3周每天约两次施用局部类固醇，以及在约第4周每天约一次施用局部类固醇；从施用单位剂量的raav颗粒开始和之后计时。在所述方法的一些方面，局部类固醇治疗包括在施用单位剂量的raav颗粒之后每天约四次施用局部类固醇，持续约3周，随后每天约3次施用局部类固醇，持续约1周，随后每天约2次施用局部类固醇，持续约1周，以及随后每天约1次施用局部类固醇，持续约1周。在所述方法的一些方面，局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约四周，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一周，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一周，随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一周；在施用单位剂量的raav颗粒之前约一周开始计时。
51、在所述方法的一些方面，所述方法还包括施用局部类固醇治疗。在所述方法的方面，局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。在上述方法的方面，局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约四周，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一周，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一周，随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一周；从施用抗vegf剂开始和之后计时。在上述方法的方面，局部类固醇包括约1μg至约3μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。在上述方法的一些方面，局部类固醇包括约2.5μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。
52、在任何上述方法的方面，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致视网膜厚度维持或减少。在一些方面，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致视网膜厚度减少。在所述方法的某些方面，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，视网膜厚度减少至少约10％。在某些方法的方面，视网膜厚度为中央亚视场厚度(cst)或中央视网膜厚度(crt)。
53、在任何上述方法的方面，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致黄斑体积维持或减少。在所述方法的一个方面，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致黄斑体积减少。在所述方法的方面，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，黄斑体积减少至少约10％。
54、在任何上述方法的方面，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视敏度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致视敏度维持或改善。在所述方法的一些方面，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视敏度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致视敏度改善。在所述方法的方面，视敏度为最佳矫正视敏度(bcva)。
55、在任何上述方法的方面，向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致多个个体中至少约50％的个体不需要抗vegf救援治疗。在所述方法的一些方面，多个个体中至少约50％的个体在施用单位剂量的raav颗粒之后至少约20周、至少约36周、至少约52周、至少约56周或更长时间不需要抗vegf救援治疗。
56、在任何上述方法的方面，向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致多个个体中至少约67％的个体不需要抗vegf救援治疗。在所述方法的一些方面，多个个体中至少约67％的个体在施用单位剂量的raav颗粒之后至少约20周、至少约36周、至少约52周、至少约60周、至少约64周或至少约66周不需要抗vegf救援治疗。
57、在上述方法的方面，向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致多个个体中至少约78％的个体不需要抗vegf救援治疗。在各种方面，多个个体中至少约78％的个体在施用单位剂量的raav颗粒之后至少约20周、至少约36周或更长时间不需要抗vegf救援治疗。
58、在上述方法的方面，向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致多个个体中100％的个体不需要抗vegf救援治疗。在所述方法的方面，多个个体中100％的个体在施用单位剂量的raav颗粒之后至少约64周、至少约68周、至少约72周、至少约76周、至少约80周、至少约84周或更长时间不需要抗vegf救援治疗。
59、任何上述方法的方面提供了对多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛进行的单位剂量的raav颗粒的施用，该施用导致年化抗vefg注射率与施用单位剂量的raav颗粒之前的年化抗vegf注射率相比降低至少约80％、至少约85％、至少约87％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或100％。
60、在各种方法的方面，眼部新生血管性疾病为湿性年龄相关性黄斑变性(amd)。
61、在各种方法的方面，眼部新生血管性疾病为糖尿病性黄斑水肿(dme)。在各种方面，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒导致糖尿病性视网膜病变严重程度评分(drss)的2步或3步改善。
62、本技术的实施方案提供了一种单位剂量的约6x 1011个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其用于在用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法中使用，所述方法包括向个体的一只眼睛施用单位剂量，其中个体为人，并且其中raav颗粒包含(a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seq id no:35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列；和(b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lgettrp(seq id no:14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。
63、本技术的实施方案提供了一种单位剂量的raav颗粒，其用于在减少患有眼部新生血管性疾病的个体的眼睛中的视网膜液的方法中使用，所述方法包括向个体的一只眼睛施用所述单位剂量，其中个体为人，并且其中raav颗粒包含(a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seq id no:35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列；和(b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587与588之间的氨基酸序列lgettrp(seq id no:14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。用于在所指示的方法中使用的上述单位剂量的方面，其中所述方法还包括在施用所述单位剂量之前向个体的一只眼睛施用抗vegf剂。
64、以引用方式并入
65、本文引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物，均以引用方式整体并入。
1.一种用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的约2×1011个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其中所述个体为人，并且其中所述raav颗粒包含：
2.如权利要求1所述的方法，其中患有眼部新生血管性疾病的所述个体的眼睛中的视网膜液减少。
3.一种用于减少患有眼部新生血管性疾病的个体的眼睛中的视网膜液的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒，其中所述个体为人，并且其中所述raav颗粒包含：
4.如权利要求3所述的方法，其中所述个体在施用所述单位剂量的raav颗粒之前约12周内已接受过至少一次抗vegf剂的治疗。
5.如权利要求3或权利要求4所述的方法，其中所述个体的一只眼睛中的视网膜液的量或存在是使用抗vegf剂的先前治疗难治的。
6.如权利要求4或权利要求5所述的方法，其中所述抗vegf剂为阿柏西普。
7.如权利要求2-6中任一项所述的方法，其中所述一只眼睛中的视网膜液减少了至少约60％。
8.如权利要求2-7中任一项所述的方法，其中与向所述个体施用所述raav之前所述个体的一只眼睛中的视网膜液水平相比，所述一只眼睛中的所述视网膜液减少了约80％。
9.如权利要求2-8中任一项所述的方法，其中所述视网膜液为视网膜下液(srf)或视网膜内液(irf)。
10.如权利要求3-9中任一项所述的方法，其中raav颗粒的所述单位剂量为约6×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)或更少。
11.一种用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法，所述方法包括：
12.如权利要求11所述的方法，其包括在施用所述抗vegf剂之后约1周或约7天向所述个体的一只眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒。
13.如权利要求11或权利要求12所述的方法，其包括在第1天向所述个体的一只眼睛施用所述抗vegf剂，和在第8天向所述个体的一只眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒。
14.如权利要求11-13中任一项所述的方法，其中所述抗vegf剂包括阿柏西普。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述阿柏西普以约2mg的剂量通过玻璃体内注射施用。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中raav颗粒的所述单位剂量在约6×1010至约6×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)之间。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中raav颗粒的所述单位剂量在约6×1010至约2×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)之间。
18.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中raav颗粒的所述单位剂量在约2×1011至约6×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)之间。
19.如权利要求18所述的方法，其中raav颗粒的所述单位剂量为约2×1011或约6×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。
20.如权利要求19所述的方法，其中raav颗粒的所述单位剂量为约2×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。
21.如权利要求19所述的方法，其中raav颗粒的所述单位剂量为约6×1011个载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。
22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述个体在对侧眼睛中具有眼部新生血管性疾病的一种或多种症状。
23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其还包括向所述个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。
24.如权利要求23所述的方法，其中向所述对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒是在向所述一只眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒之后至多约2周进行的。
25.如权利要求24所述的方法，其中：
26.如权利要求24或权利要求25所述的方法，其中与向所述个体的一只眼睛施用的raav颗粒的所述单位剂量相比，向所述个体的对侧眼睛施用的raav颗粒的所述单位剂量包含相同或更少的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。
27.如权利要求23所述的方法，其中向所述对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒是在向所述一只眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒之后至少约2周进行的。
28.如权利要求27所述的方法，其中与向所述个体的一只眼睛施用的raav颗粒的所述单位剂量相比，向所述个体的对侧眼睛施用的raav颗粒的所述单位剂量包含更多的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。
29.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述核酸包含seq id no:40的核酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。
30.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中所述多肽包含seq id no:35的氨基酸序列。
31.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述多肽包含seq id no:41的氨基酸序列。
32.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中所述多肽为阿柏西普。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中所述核酸还包含第一增强子区、启动子区、5'utr区、第二增强子区和聚腺苷酸化位点。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述核酸以5'至3'顺序包含：
35.如权利要求33或权利要求34所述的方法，其中所述第一增强子区包含cmv序列，所述cmv序列包含seq id no:22的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
36.如权利要求33-35中任一项所述的方法，其中所述启动子区包含cmv序列，所述cmv序列包含seq id no:23的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
37.如权利要求34-36中任一项所述的方法，其中所述编码多肽的核酸包含seq id no:40的核酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。
38.如权利要求34-37中任一项所述的方法，其中所述多肽包含seq id no:35的氨基酸序列或与其具有至少95％同一性的序列。
39.如权利要求34-38中任一项所述的方法，其中所述多肽包含seq id no:41的氨基酸序列或与其具有至少95％同一性的序列。
40.如权利要求34-39中任一项所述的方法，其中所述多肽为阿柏西普。
41.如权利要求33-40中任一项所述的方法，其中所述5'utr区以5'至3'顺序包含tpl序列和emlp序列，所述tpl序列包含seq id no:24的序列或与其具有至少85％同一性的序列，所述emlp序列包含seq id no:25的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
42.如权利要求33-41中任一项所述的方法，其中所述第二增强子区包含完整ees序列，其包含seq id no:26的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
43.如权利要求33-42中任一项所述的方法，其中所述聚腺苷酸化位点包括hgh聚腺苷酸化位点，其包含seq id no:27的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
44.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中所述核酸还包含(a)第一增强子区，其包含含有seq id no:22的序列或与其具有至少85％同一性的序列的cmv序列；(b)启动子区，其包含含有seq id no:23的序列或与其具有至少85％同一性的序列的cmv序列；(c)5'utr区，其以5'至3'顺序包含tpl序列和emlp序列，所述tpl序列包含seq id no:24的序列或与其具有至少85％同一性的序列，所述emlp序列包含seq id no:25的序列或与其具有至少85％同一性的序列；(d)第二增强子区，其包含含有seq id no:26的序列或与其具有至少85％同一性的序列的完整ees序列；和(e)hgh聚腺苷酸化位点，其包含seq id no:27的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
45.如权利要求1-44中任一项所述的方法，其中所述核酸包含seq id no:39的序列或与其具有至少85％同一性的序列。
46.如权利要求1-45中任一项所述的方法，其中所述aav2衣壳蛋白包含插入在所述衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seq id no:1)，其中所述氨基酸残基编号对应于aav2 vp1衣壳蛋白。
47.如权利要求1-46中任一项所述的方法，其中所述aav2衣壳蛋白包含插入在包含seqid no:13的序列的所述aav2 vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seq id no:14)。
48.如权利要求1-47中任一项所述的方法，其中所述aav2衣壳蛋白包含插入在包含seqid no:13的序列的所述aav2 vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seq idno:1)。
49.如权利要求1-46中任一项所述的方法，其中所述raav颗粒包含aav2 vp1衣壳蛋白，其包含含有seq id no:38的氨基酸序列或与seq id no:38具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的gh环。
50.如权利要求1-49中任一项所述的方法，其中向所述一只眼睛和/或所述对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒是通过玻璃体内施用进行的。
51.如权利要求1-50中任一项所述的方法，其中所述单位剂量的raav颗粒在药物制剂中。
52.如权利要求51所述的方法，其中所述药物制剂包含所述raav颗粒、氯化钠、磷酸钠和表面活性剂。
53.如权利要求52所述的方法，其中所述药物制剂包含约150至约200mm氯化钠、约1至约10mm磷酸二氢钠、约1至约10mm磷酸氢二钠、约0.0005％(w/v)至约0.005％(w/v)泊洛沙姆188和约6×1013至约6×1010个载体基因组(vg)/ml(vg/ml)的所述raav颗粒，其中所述药物制剂具有约7.0至约7.5的ph。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述药物制剂包含约180mm氯化钠、约5mm磷酸二氢钠、约5mm磷酸氢二钠、约6×1012vg/ml的所述raav颗粒和约0.001％(w/v)泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.3的ph。
55.如权利要求53所述的方法，其中所述药物制剂包含约180mm氯化钠、约5mm磷酸二氢钠、约5mm磷酸氢二钠、约2×1012vg/ml的所述raav颗粒和约0.001％(w/v)泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.3的ph。
56.如权利要求53所述的方法，其中所述药物制剂包含约180mm氯化钠、约5mm磷酸二氢钠、约5mm磷酸氢二钠、约6×1011vg/ml的所述raav颗粒和约0.001％(w/v)泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.3的ph。
57.如权利要求1-56中任一项所述的方法，其中向所述一只眼睛和/或所述对侧眼睛施用的所述单位剂量的raav颗粒为约25μl至约250μl的体积。
58.如权利要求57所述的方法，其中向所述一只眼睛和/或所述对侧眼睛施用的所述单位剂量的raav颗粒包含约100μl的体积。
59.如权利要求57所述的方法，其中向所述一只眼睛和/或所述对侧眼睛施用的所述单位剂量的raav颗粒包含约30μl的体积。
60.如权利要求1-59中任一项所述的方法，其中所述个体接受使用抗vegf剂对所述眼部新生血管性疾病的先前治疗。
61.如权利要求60所述的方法，其中在所述一只眼睛和/或所述对侧眼睛中施用所述raav颗粒之前，所述个体在所述一只眼睛和/或所述对侧眼睛中已接受过1次或2次抗vegf剂注射。
62.如权利要求1-3或7-59中任一项所述的方法，其中所述个体未接受过使用抗vegf剂对所述眼部新生血管性疾病的先前治疗。
63.如权利要求60-62中任一项所述的方法，其中所述抗vegf剂为阿柏西普。
64.如权利要求1-63中任一项所述的方法，其中所述眼部新生血管性疾病为湿性年龄相关性黄斑变性(amd)、视网膜新血管形成、脉络膜新血管形成糖尿病性视网膜病变、增殖性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、缺血性视网膜病变、糖尿病性视网膜水肿或其任何组合。
65.如权利要求1-10或16-64中任一项所述的方法，其中所述单位剂量的raav颗粒与类固醇治疗组合施用。
66.如权利要求65所述的方法，其中所述类固醇治疗为皮质类固醇治疗。
67.如权利要求65或权利要求66所述的方法，其中所述类固醇治疗为全身性类固醇治疗。
68.如权利要求65-67中任一项所述的方法，其中所述类固醇治疗为口服类固醇治疗。
69.如权利要求65-68中任一项所述的方法，其中所述类固醇治疗为泼尼松治疗。
70.如权利要求65或权利要求66所述的方法，其中所述类固醇治疗为局部类固醇治疗。
71.如权利要求70所述的方法，其中所述类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。
72.如权利要求65-71中任一项所述的方法，其中在向所述一只眼睛和/或所述对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用所述类固醇。
73.如权利要求70-72中任一项所述的方法，其中所述类固醇治疗为局部类固醇治疗，并且所述局部类固醇治疗为从施用所述单位剂量的raav颗粒起持续多至约4周、多至约6周或多至约8周的每日类固醇治疗。
74.如权利要求73所述的方法，其中所述局部类固醇治疗包括在约第1周每天约四次施用局部类固醇，在约第2周每天约三次施用局部类固醇，在约第3周每天约两次施用局部类固醇，以及在约第4周每天约一次施用局部类固醇；从施用所述单位剂量的raav颗粒开始和之后计时。
75.如权利要求73所述的方法，其中所述局部类固醇治疗包括在施用所述单位剂量的raav颗粒之后每天约四次施用局部类固醇，持续约3周，随后每天约3次施用局部类固醇，持续约1周，随后每天约2次施用局部类固醇，持续约1周，以及随后每天约1次施用局部类固醇，持续约1周。
76.如权利要求73所述的方法，其中所述局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约四周，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一周，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一周，以及随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一周；在施用所述单位剂量的raav颗粒之前约一周开始计时。
77.如权利要求11-64中任一项所述的方法，其还包括施用局部类固醇治疗。
78.如权利要求77所述的方法，其中所述局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。
79.如权利要求77或权利要求78所述的方法，其中所述局部类固醇治疗包括每天约四次施用局部类固醇，持续约四周，随后每天约三次施用局部类固醇，持续约一周，随后每天约两次施用局部类固醇，持续约一周，以及随后每天约一次施用局部类固醇，持续约一周；从施用所述抗vegf剂开始和之后计时。
80.如权利要求71-79中任一项所述的方法，其中所述局部类固醇包括约1μg至约3μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。
81.如权利要求71-80中任一项所述的方法，其中所述局部类固醇包括约2.5μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。
82.如权利要求1-81中任一项所述的方法，其中与施用所述单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向所述个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述视网膜厚度维持或减少。
83.如权利要求82所述的方法，其中与施用所述单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向所述个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述视网膜厚度减少。
84.如权利要求83所述的方法，其中与施用所述单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，所述视网膜厚度减少至少约10％。
85.如权利要求82-84中任一项所述的方法，其中视网膜厚度为中央亚视场厚度(cst)或中央视网膜厚度(crt)。
86.如权利要求1-85中任一项所述的方法，其中与施用所述单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，向所述个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述黄斑体积维持或减少。
87.如权利要求86所述的方法，其中与施用所述单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，向所述个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述黄斑体积减少。
88.如权利要求87所述的方法，其中与施用所述单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，所述黄斑体积减少至少约10％。
89.如权利要求1-88中任一项所述的方法，其中与施用所述单位剂量的raav颗粒之前的视敏度相比，向所述个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述视敏度维持或改善。
90.如权利要求89所述的方法，其中与施用所述单位剂量的raav颗粒之前的视敏度相比，向所述个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述视敏度改善。
91.如权利要求89或权利要求90所述的方法，其中视敏度为最佳矫正视敏度(bcva)。
92.如权利要求1-91中任一项所述的方法，其中向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述多个个体中至少约50％的个体不需要抗vegf救援治疗。
93.如权利要求92所述的方法，其中所述多个个体中至少约50％的个体在施用所述单位剂量的raav颗粒之后至少约20周、至少约36周、至少约52周、至少约56周或更长时间不需要抗vegf救援治疗。
94.如权利要求1-91中任一项所述的方法，其中向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述多个个体中至少约67％的个体不需要抗vegf救援治疗。
95.如权利要求94所述的方法，其中所述多个个体中至少约67％的个体在施用所述单位剂量的raav颗粒之后至少约20周、至少约36周、至少约52周、至少约60周、至少约64周或至少约66周不需要抗vegf救援治疗。
96.如权利要求1-91中任一项所述的方法，其中向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述多个个体中至少约78％的个体不需要抗vegf救援治疗。
97.如权利要求96所述的方法，其中所述多个个体中至少约78％的个体在施用所述单位剂量的raav颗粒之后至少约20周、至少约36周或更长时间不需要抗vegf救援治疗。
98.如权利要求1-91中任一项所述的方法，其中向多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述多个个体中100％的个体不需要抗vegf救援治疗。
99.如权利要求98所述的方法，其中所述多个个体中100％的个体在施用所述单位剂量的raav颗粒之后至少约64周、至少约68周、至少约72周、至少约76周、至少约80周、至少约84周或更长时间不需要抗vegf救援治疗。
100.如权利要求1-99中任一项所述的方法，其中与施用所述单位剂量的raav颗粒之前的年化抗vegf注射率相比，向所述多个个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致所述年化抗vegf注射率降低至少约80％、至少约85％、至少约87％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或100％。
101.如权利要求1-10、16-76或80-100中任一项所述的方法，其中所述眼部新生血管性疾病为湿性年龄相关性黄斑变性(amd)。
102.如权利要求1-3、11-64、77-83、85-87或89-91中任一项所述的方法，其中所述眼部新生血管性疾病为糖尿病性黄斑水肿(dme)。
103.如权利要求102所述的方法，其中向所述个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用所述单位剂量的raav颗粒导致糖尿病性视网膜病变严重程度量表(drss)的2步或3步改善。
104.一种单位剂量的约6×1011个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其用于在用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法中使用，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用所述单位剂量，其中所述个体为人，并且其中所述raav颗粒包含：
105.一种单位剂量的raav颗粒，其用于在用于减少患有眼部新生血管性疾病的个体的眼睛中的视网膜液的方法中使用，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用所述单位剂量，其中所述个体为人，并且其中所述raav颗粒包含：
106.根据权利要求104或权利要求105使用的单位剂量，其中所述方法还包括在施用所述单位剂量之前向所述个体的所述一只眼睛施用抗vegf剂。
107.一种用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用重组腺相关病毒(raav)颗粒，其中所述个体为人，
108.如权利要求107所述的方法，其中所述口服类固醇治疗和所述局部类固醇治疗或所述口服类固醇治疗和所述ivt为皮质类固醇治疗。
109.如权利要求107或108所述的方法，其中所述局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。
110.如权利要求107-109中任一项所述的方法，其中所述局部类固醇治疗包括约1μg至约3μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。
111.如权利要求107-110中任一项所述的方法，其中所述局部类固醇治疗包括约2.5μg的剂量的二氟泼尼酯0.05％。
112.如权利要求107-111中任一项所述的方法，其中所述局部类固醇治疗包括
113.如权利要求107-112中任一项所述的方法，其中所述局部类固醇治疗包括
114.如权利要求107-113中任一项所述的方法，其中所述口服类固醇治疗为泼尼松治疗。
115.如权利要求114所述的方法，其中所述口服类固醇治疗以以下剂量施用：
116.如权利要求114或115所述的方法，其中所述口服类固醇治疗以以下剂量施用：
117.如权利要求114-116中任一项所述的方法，其中所述口服类固醇治疗在施用所述单位剂量的raav颗粒之后第九周的前四天以约0.125mg/kg/天至约0.14mg/kg/天的剂量施用，并且如果所述个体体重为70kg或以上，则在施用所述单位剂量的raav颗粒之后第九周的前四天以约0.0625mg/kg/天至约0.070mg/kg/天的剂量施用。
118.如权利要求107-117中任一项所述的方法，其中所述ivt类固醇治疗为曲安奈德治疗或地塞米松治疗。
119.如权利要求118所述的方法，其中所述ivt类固醇治疗为约2mg的曲安奈德治疗。
120.如权利要求118或119所述的方法，其中所述ivt类固醇治疗包括在施用所述单位剂量的raav颗粒之前一周和在施用所述单位剂量的raav颗粒之后第12周施用所述ivt类固醇治疗。
121.如权利要求118所述的方法，其中所述ivt类固醇治疗为约0.7mg的地塞米松。
122.如权利要求121所述的方法，其中所述ivt类固醇治疗为在施用所述单位剂量的raav颗粒之前一周的玻璃体内植入。
123.如权利要求107-122中任一项所述的方法，其中所述口服类固醇治疗和/或所述局部类固醇治疗在施用所述单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用。
124.一种单位剂量的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其用于在用于治疗个体的眼部新生血管性疾病的方法中使用，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用所述单位剂量，其中所述个体为人，
