本发明属于分子生物学，具体涉及一种可与磁珠结合的病毒rna快速提取的裂解液。
背景技术：
0、技术背景
1、核酸作为遗传信息载体，包括dna和rna两种，是基因表达的基础。核酸的分离提取是所有生物技术应用的前提，无论是测序、扩增、检测均需要从复杂样本中分离核酸。目前常见的核酸分离技术主要有煮沸法、碱裂解法、抽提法、离心柱法等。但这些方法往往包括一个或多个以下缺陷，如含有对人体有害的有机溶剂、需要高速离心设备、耗时长、成本高、操作复杂等，往往难以满足下游快速扩增检测需求。
2、磁珠法主要成分包括裂解液、沉降液、洗涤液、洗脱液，相较于其他提取方法，其具有提取快速、操作简单、成本低等优势，成为了目前常用的核酸提取方法之一。磁珠法利用磁性纳米材料的超顺磁性，通过外加磁场控制磁珠与介质的分离或吸附以实现磁珠与核酸的吸附，同时洗涤液可去除样本溶液中的蛋白质、多糖、盐离子等杂质，然后通过洗脱液在外加磁场作用下可获得高纯度的核酸溶液。本发明所述的病毒rna裂解液可与磁珠法结合，实现病毒rna快速纯化，该裂解液具有成分廉价易得，裂解效果好，且对下游rna扩增和检测无影响等优点，有利于基层疫病的快速检测。
技术实现思路
1、本发明目的在于提供一种可与磁珠结合的病毒rna快速提取的裂解液，可直接裂解研磨后的组织，此外，还将其与磁珠法核酸提取技术相结合实现病毒rna低成本、快速提取。
2、为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：
3、一种可与磁珠结合的病毒rna快速提取的裂解液，包括步骤：
4、1）裂解液配置：溶液ⅰ由50 mm tris-hcl，1 m nacl，10 mm edta，3 m异硫氰酸胍组成，ph为6.0；溶液ⅱ为20 mg/ml蛋白酶k；
5、2）在无菌条件下取适量患神经坏死病毒的石斑鱼组织于1.5 ml离心管中，加入150 μl裂解液溶液ⅰ，将离心管置于冰上用研磨器进行冷冻研磨；
6、3）加入10 μl裂解液溶液ⅱ；
7、4）将待裂解组织置于66℃水浴锅中恒温加热10 min进行裂解；
8、5）加入10 μl 100 mg/ml羟基二氧化硅磁珠，吹打混匀后，静置2 min；
9、 6）将离心管置于磁铁上固定磁珠，弃溶液；
10、7）加入200 μl 70%乙醇吹打清洗杂质，并重复步骤6）；
11、 8）加入50 μl depc水，在63℃水浴锅中加热10 min洗脱核酸；
12、9）用磁体固定磁珠，将洗脱的溶液转移至新的离心管中，保存于-80℃备用。
13、本发明具有如下优点：
14、本发明提供的病毒rna提取裂解可实现对组织直接裂解和病毒rna释放，裂解时间短、成本低、无需复杂的仪器、操作简单、裂解效率高。
15、本发明提供的裂解液可与磁珠提取rna技术联用，可实现与商用试剂盒相当的提取效果，但相比商业实际和该提取方法具有无需依赖昂贵离心设备，只需恒温加热仪器；操纵简单，不需要专业的技术人员；原材料廉价易得等明显优势。此外，使用该裂解液纯化的rna对下游扩增和检测无任何负面影响。
1.本发明病毒rna快速提取的裂解液，其特征在于包括：溶液ⅰ和溶液ⅱ；其中所述溶液ⅰ由50 mm tris-hcl，1 m nacl，10 mm edta，3 m异硫氰酸胍组成，ph为6.0；所述溶液ⅱ为20 mg/ml蛋白酶k。
2.如权利要求1所述裂解液，其特征在于该裂解液可通过加热裂解组织并释放病毒rna，经羟基二氧化硅磁珠吸附后，通过rna沉降溶液和洗涤液实现rna沉降和洗涤，随后使用洗脱液和外加磁场即可完成rna洗脱。
3.如权利要求2所述，rna沉降溶液为异丙醇，其作用是通过-oh的疏水作用是rna链中亲水基团收到保护，从而达到沉淀rna作用。
4.如权利要求2所述，洗涤液为70%乙醇。
5.如权利要求2所述，洗脱液为edta水。
