本发明涉及外泌体制备，具体涉及一种mirna含量高的间充质干细胞外泌体及其制备方法。
背景技术：
1、间充质干细胞外泌体(mscs-exosomes)是一种由间充质干细胞(mscs)分泌的具有多功能的纳米囊泡，是重要的细胞外通讯介质。随着对间充质干细胞外泌体的深入研究，越来越多的研究认为间充质干细胞外泌体是调节生理和病理条件下的生化反应和细胞活性的关键介质，间充质干细胞外泌体可以通过其携带的蛋白和rna成分的胞间转移，实现组织修复、减轻炎症和调节免疫等功能。
2、尽管当前诸多文献表明间充质干细胞外泌体在促进组织修复、减轻炎症和调节免疫等方面具有显著潜力，然而，要将间充质干细胞外泌体应用于实际的临床治疗或疾病管理中，仍需要不断的研究和技术创新来进一步优化和提升外泌体的功能，以实现间充质干细胞外泌体在临床治疗中的广泛应用。micrornas(简称mirnas)是长度为18～24个核苷酸的小非编码rna，在转录后控制基因表达，是外泌体中发挥作用的主要活性物质之一，通过提升外泌体中mirnas的含量，能够增加外泌体的活性，进而提高外泌体功能。但是，目前通过间充质干细胞在常规培养条件下制得的间充质干细胞外泌体中mirnas的含量较低，这限制了间充质干细胞外泌体的功能以及在临床治疗中的应用，仍需要进一步提升间充质干细胞外泌体中mirnas的含量，从而进一步提高间充质干细胞外泌体的功能。因此，亟需一种能够提高间充质干细胞外泌体中mirnas含量的外泌体制备方法。
技术实现思路
1、鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提出一种mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法，通过向间充质干细胞中转染pact表达载体，能够增加细胞内pact蛋白表达量，从而提高间充质干细胞外泌体中的mirna的含量。
2、本发明的另一目的在于提出一种mirna含量高的间充质干细胞外泌体，由上述mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法制备得到，本发明间充质干细胞外泌体中mirna的含量高。
3、为达此目的，本发明采用以下技术方案：
4、一种mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法，包括如下步骤：将pact表达载体转染至间充质干细胞中，使间充质干细胞内pact蛋白的表达量增加，然后收集细胞上清，对细胞上清进行处理，收集得到mirna含量高的间充质干细胞外泌体；
5、所述pact表达载体包括载体骨架和编码pact的核苷酸序列，所述编码pact的核苷酸序列如seq id no.1所示。
6、优选地，本技术方案mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法包括如下步骤：
7、(1)将pact表达载体和转染试剂混合，得到转染复合液；
8、(2)将间充质干细胞接种至干细胞培养基中进行传代，在第4次传代48～96h后，向干细胞培养基中加入转染复合液，转染48～96h；
9、(3)收集干细胞培养基的细胞上清，对细胞上清进行处理，收集得到mirna含量高的间充质干细胞外泌体。
10、优选地，在步骤(1)中，所述转染复合液中所述pact表达载体的质量和所述转染试剂的体积的比值为1：(2～4)。
11、优选地，在步骤(2)中，向干细胞培养基中加入转染复合液后，所述干细胞培养基中所述pact表达载体的浓度为0.8～1.2mm。
12、优选地，在步骤(2)中，向干细胞培养基中加入转染复合液后，所述培养基中所述pact表达载体的浓度为1mm。
13、优选地，所述对细胞上清进行处理包括如下操作方法：对细胞上清进行多次离心，去除漂浮细胞、死细胞和细胞碎片，收集上清，过滤后再次离心收集沉淀，重悬，离心重悬液，收集沉淀，得到mirna含量高的间充质干细胞外泌体。
14、优选地，所述载体骨架为pcdna3.1载体。
15、一种mirna含量高的间充质干细胞外泌体，由上述的mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法制备得到。
16、本申请实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果：本技术方案通过向间充质干细胞中转染pact表达载体，能够增加间充质干细胞内pact蛋白表达量，从而提高间充质干细胞外泌体中的mirna的含量，进而提高间充质干细胞外泌体的功能。本技术方案的制备方法不仅能够提高间充质干细胞外泌体中mirna的含量，显著提高外泌体的功能，而且本技术方案的制备方法不需要昂贵的仪器设备，符合行业标准。本技术方案的制备方法和制得的间充质干细胞外泌体对于外泌体的临床前研究和临床应用具有很大的推动作用，适于推广应用。
1.一种mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将pact表达载体转染至间充质干细胞中，使间充质干细胞内pact蛋白的表达量增加，然后收集细胞上清，对细胞上清进行处理，收集得到mirna含量高的间充质干细胞外泌体；
2.根据权利要求1所述的mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述转染复合液中所述pact表达载体的质量和所述转染试剂的体积的比值为1：(2～4)。
4.根据权利要求2所述的mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，向干细胞培养基中加入转染复合液后，所述干细胞培养基中所述pact表达载体的浓度为0.8～1.2mm。
5.根据权利要求4所述的mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，向干细胞培养基中加入转染复合液后，所述培养基中所述pact表达载体的浓度为1mm。
6.根据权利要求1或2所述的mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述对细胞上清进行处理包括如下操作方法：对细胞上清进行多次离心，去除漂浮细胞、死细胞和细胞碎片，收集上清，过滤后再次离心收集沉淀，重悬，离心重悬液，收集沉淀，得到mirna含量高的间充质干细胞外泌体。
7.根据权利要求1所述的mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述载体骨架为pcdna3.1载体。
8.一种mirna含量高的间充质干细胞外泌体，其特征在于，由权利要求要求1-7任一项所述的mirna含量高的间充质干细胞外泌体的制备方法制备得到。
