本发明属于植物组培领域，具体涉及一种‘巫山脆李’组培快繁体系构建方法。
背景技术：
1、重庆特殊的地理和气候条件，适宜中国李(prunus salicina lindl.)的生长。‘青脆李’作为重庆的原生特色果树已有上千年的栽培历史。其中，‘青脆李’的优异芽变系‘巫山脆李’，具有果型端正、果粉明显、离核、肉质脆嫩、香甜多汁且富含多种营养与功能成分，深受广大消费者喜爱。‘巫山脆李’的选育迅速推动了重庆李产业的快速发展，现已成为重庆三峡库区促进乡村全面振兴不可或缺的特色支柱产业。
2、苗木是果树早产、丰产、优质、稳产的关键。然而，随着‘巫山脆李’产业的快速发展，种苗的繁育工作却十分滞后。前期混杂的苗木来源导致当前生产的果实品质参差不齐，正在逐渐损害‘巫山脆李’产业在市场和消费中的形象。在此背景下，近年品种不正的果园必将出现大面积的‘巫山脆李’高接换新。因此，快速培养‘巫山脆李’优质种苗和接穗是保证‘巫山脆李’产业稳定高质量发展亟需解决的关键问题。李是典型的自花不/低亲和性果树，种子繁殖的实生苗后代遗传变异大。组培苗繁殖速度快、不受季节限制并能够保留亲本特性，因此建立‘巫山脆李’的组培快繁体系对产业的稳定高质量发展意义重大。
3、目前李的组织培养技术在欧李、紫叶稠李、樱桃李等种/品种中已经取得了一定进展，茎段组培的体系也已经较为成熟。然而，中国李分布广泛，地方性品种遗传背景差异极大，导致组织培养体系在不同品种间不能相互适用，而在不同种之间，茎段组培则存在着更大的差异。迄今为止，尚未见‘巫山脆李’的组培快繁体系报道。茎尖和茎段是核果类果树离体培养广泛采用的方式。以茎段作为外植体材料进行组培快繁，不仅可供取材的量大，而且不受植株树龄影响，采样方便。为建立‘巫山脆李’茎段组培快繁体系，在工作前期，尝试利用已经建立的樱桃李‘prunus cerasifera ehrhart’(cn111480573a)、中国李‘nubiana’(樊青峰，2009)等的茎段组培培养基来进行茎段组培，出现了在初代培养过程叶片黄化、脱落、矮化丛生等问题，并且无法达到增殖培养的效果。因此，需要通过进一步研究来获取适宜‘巫山脆李’生长的最佳培养基，实现‘巫山脆李’的高效快速扩繁，以满足产业和研究等的需要。
技术实现思路
1、本发明的目的是通过组织培养技术，快速获取保留亲本特性的‘巫山脆李’组培苗。该方法取材方便且不受季节限制，可增加‘巫山脆李’的扩繁速度并保证苗木质量，对‘巫山脆李’的高质量发展提供技术支持。
2、本发明提供的‘巫山脆李’茎段组培快繁体系的构建方法，包括如下步骤：
3、1)初代培养，将‘巫山脆李’茎段外植体表面灭菌后接种于初代培养基中进行初代培养，所述的初代培养基为wpm+6-ba 0.3-1mg/l+iba 0.08-0.33mg/l；
4、2)增殖培养，将经过初代培养的新芽切下接种至增殖培养基中，所述的增殖培养基为wpm+6-ba 0.3-1mg/l+iba 0.08-0.33mg/l；
5、3)增高培养，将经过增殖培养的芽切下接种至增高培养基中，所述的增高培养基为wpm+6-ba 0.5-1mg/l+iba0.1-0.33mg/l+ga31-2mg/l；
6、4)生根培养，将经过继代培养的芽切下接种至生根培养基中，所述的生根培养基为1/2wpm+iba 0.5mg/l、1/2wpm+iba 0.2mg/l+iaa 0.4mg/l或者1/2wpm+iba 0.4mg/l+iaa0.2mg/l。
7、其中，所述的初代培养基优选为wpm+6-ba 1mg/l+iba 0.33mg/l，和/或所述的增殖培养基优选为wpm+6-ba 1mg/l+iba 0.33mg/l，和/或所述的增高培养基优选为wpm+6-ba0.5mg/l+iba0.1mg/l+ga3 1mg/l。
8、其中，所述的生根培养基优选为1/2wpm+iba 0.5mg/l。
9、其中，所述的构建方法还包括茎段外植体准备的步骤：采集‘巫山脆李’幼嫩枝条，将取回的材料剪成1-2cm左右的茎段，去除茎段叶片并保留0.1-0.4cm的叶柄，处理后的茎段，用自来水冲洗2小时以上。
10、其中，茎段外植体的表面灭菌包括：冲洗后的茎段吸干水分后，在超净工作台中用75％的酒精浸泡10-60秒，随后用无菌水清洗3-5遍，再用2-5％的次氯酸钠溶液浸泡茎段5-10分钟，用无菌水清洗5-6遍。
11、其中，初代培养时，茎段外植体接种后先黑暗培养5-8天，后光培养直至腋芽处萌发出新芽。
12、其中，增殖培养为光培养，芽转接的周期为3-5周。增殖培养一开始的芽为初代培养萌发的新芽，增殖后转接用的芽为增殖获得的新芽。
13、其中，增高培养为光培养，芽转接的周期为3-5周。芽取自增殖培养获得的新芽。
14、其中，将经增高培养的增高新芽，切去基部膨大组织后转移至生根培养基，先黑暗培养5-8天后再进行光培养，直至诱导出不定根。
15、在本发明一个具体实施方案中，所述构建方法还包括将生根苗进行炼苗和移栽的步骤。
16、具体地，将生根后的组培苗瓶盖半打开，在组培的光照条件下，放置2天，后将组培苗取出并洗去根部琼脂，种植至营养基质中，浇水后覆盖塑料薄膜，置于温室培养，7天后除去塑料薄膜。
17、本发明的有益效果是：
18、1、利用‘巫山脆李’的茎段进行组培，获得保留亲本特性的组培苗，从而可保证‘巫山脆李’优异的生物学特征，保证果实品质。
19、2、该方法简单易性，能短时间(7-8个月)内快速扩繁大量苗木(增殖倍数可达10000倍)，对‘巫山脆李’科学研究以及产业树体更新具有重要意义，有助于推动产业的稳定高质量发展。
1.一种‘巫山脆李’茎段组培快繁体系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的初代培养基为wpm+6-ba 1mg/l+iba 0.33mg/l，和/或所述的增高培养基为wpm+6-ba 0.5mg/l+iba0.1mg/l+ga3 1mg/l。
3.如权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法还包括茎段外植体准备的步骤：采集‘巫山脆李’幼嫩枝条，将取回的材料剪成1-2cm左右的茎段，去除茎段叶片并保留0.1-0.4cm的叶柄，处理后的茎段，用自来水冲洗2小时以上。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，茎段外植体的表面灭菌包括：冲洗后的茎段吸干水分后，在超净工作台中用75％的酒精浸泡10-60秒，随后用无菌水清洗3-5遍，再用2-5％的次氯酸钠溶液浸泡茎段5-10分钟，用无菌水清洗5-6遍。
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，初代培养时，茎段外植体接种后先黑暗培养5-8天，后光培养直至腋芽处萌发出新芽。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，增殖培养为光培养，芽转接的周期为3-5周。
7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，增高培养为光培养，芽转接的周期为3-5周。
8.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，将经增高培养的增高新芽，切去基部膨大组织后转移至生根培养基，先黑暗培养5-8天后再进行光培养，直至诱导出不定根。
9.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述构建方法还包括将生根苗进行炼苗和移栽的步骤。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，将生根后的组培苗瓶盖半打开，在组培的光照条件下，放置2天，后将组培苗取出并洗去根部琼脂，种植至营养基质中，浇水后覆盖塑料薄膜，置于温室培养，7天后除去塑料薄膜。
