本发明属于生物,具体涉及日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2及应用。
背景技术:
1、类胰岛素多肽(insulin-like peptides, ilps)是无脊椎动物分布最广泛的肽,是动物生长、发育、代谢和繁殖的重要调节因子。无脊椎动物中,多种ilps 被认为经由pi3k/akt 信号通路,不仅具有调节动物生长的功能,还包括调节繁殖和育。
2、日本沼虾(macrobrachium nipponense),俗称青虾、河虾,是我国重要的淡水养殖虾类之一。
3、日本沼虾雌虾具有“性成熟期短”的特点,进入繁殖季节后45天左右就可达到性成熟,且同一年内可进行多代繁殖。在繁殖季节水温达到28℃以上时,雌虾只需15天左右就能完成一个卵巢成熟周期。根据日本沼虾卵巢发育不同阶段的外部特征和物质构成,可将卵巢发育阶段分为增殖期、小生长期、大生长期、成熟期和恢复期5个时期。其中生长期的卵巢呈草绿色,体积迅速增大,从其背部观察其轮廓比较明显。组织切片观察发现,卵巢壁逐渐开始变薄,卵巢腔变得狭小,卵母细胞周边出现一层液泡 ,卵细胞开始沉积卵黄,卵细胞呈圆形或者椭圆形。成熟期卵巢呈暗绿色,体积基本达到最大状态,能够十分清楚地看到卵巢的外部形态,卵巢饱满, 充斥在整个头胸甲部位, 背面呈红褐色。组织切片观察,该时期的卵巢壁变得极薄,卵母细胞发育完成,接近圆形,胞质内已充满着大量的卵粒,核生发泡破裂,细胞核消失,滤泡细胞层与卵母细胞分离。
4、tgf-β是tgf-β超家族的重要成员之一,在细胞增殖、分化、迁移、凋亡等多种生理过程中发挥着重要作用。通常tgf-β信号通路的下游的效应转录因子是smad,tgf-β家族配体二聚体与膜上相应的ii型受体和i型受体形成复合物,诱导ii型受体磷酸化i型受体并激活其激酶活性,然后i型受体招募并活化下游的smad蛋白,从而诱导smad蛋白在细胞核内聚集并作为转录因子发挥转录调控作用。因此,smad蛋白是tgf-β家族受体下游的信号转导分子。smad蛋白在细胞核内能与不同的转录因子或者辅助蛋白结合,从而调控不同靶基因的表达。
5、另外,在繁育期卵巢转录组中,卵黄蛋白原(vitellogenin)和卵黄膜外层蛋白(vitelline membrane outer layer protein)基因表达量显著升高。卵黄蛋白原在甲壳动物卵巢发育过程中发挥了重要作用,甲壳动物卵巢的发育主要由于卵母细胞中营养物质的积累,这一过程主要包括卵黄蛋白原形成前期和卵黄蛋白原形成期,卵黄蛋白原形成期主要包括卵黄蛋白原的形成、积累、降解及加工过程。卵黄蛋白原形成后水解为卵黄蛋白在卵母细胞中的积累为胚胎发育提供了能量。
6、近年来,日本沼虾出现了母本发育提前、个体小型化的资源退化现象,小虾早熟产卵,导致池塘中出现多代同堂、养殖密度过大等系列问题,严重制约着其产业的可持续健康发展。前期对日本沼虾卵巢发育调控从组织水平、细胞水平及分子水平进行了大量研究工作,主要集中于眼柄神经肽、激素和神经递质等多种调节因子,涉及生殖细胞周期调控和卵黄发生等多种复杂的生物学过程,目前尚未对其类胰岛素多肽调控卵巢发育方面进行基因鉴定和功能分析研究。
技术实现思路
1、本发明提供一种日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2及应用。该基因可用于调控雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟。该基因可用于促进雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟。
2、为达到上述技术目的,本发明所采用的技术方案如下:
3、日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2,其核苷酸序列如seq id no.1所示。
4、所述的日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2经由tgf-β信号通路调控雌性日本沼虾卵巢发育的应用。
5、本发明另一方面,提供日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2在调控雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟的应用。
6、根据上述所述应用,本发明还提供日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2在制备调控雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟制剂中的应用。
7、根据上述所述应用,本发明还提供日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2在制备促进雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟制剂中的应用。
8、本发明还提供基于mnilp2基因的完整序列为模板转录获得dsrna。
9、上述dsrna,其上游序列如seq id no.2所示,下游序列如seq id no.3所示,
10、seq id no.2:5'-gcaguuguauagcguuaaaga-3',
11、seq id no.3:5'-uuuaacgcuauacaacugcga-3'。
12、本发明还提供上述dsrna在抑制雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟中的应用。
13、本发明的有益效果在于: 本发明提供一种日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2及应用。该基因可用于调控雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟。该基因可用于促进雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟。
1.日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2,其特征在于:其核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.如权利要求1所述的日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2经由tgf-β信号通路调控雌性日本沼虾卵巢发育的应用。
3.如权利要求1所述的日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2在调控雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟的应用。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于:所述日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2在制备调控雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟制剂中的应用。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于:所述日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2在制备促进雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟制剂中的应用。
6.如权利要求1所述的日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2,其特征在于:还包括基于mnilp2基因的完整序列为模板转录获得dsrna。
7.如权利要求6所述的日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2,其特征在于:所述dsrna,其上游序列如seq id no.2所示,下游序列如seq id no.3所示。
8.如权利要求7所述的日本沼虾类胰岛素肽基因 mnilp2,其特征在于:所述dsrna在抑制雌性日本沼虾卵巢发育过程中的卵巢成熟中的应用。