本发明涉及多肽药物纯化，具体是涉及一种利司那肽的纯化方法。
背景技术：
1、利司那肽于2016年7月28日被美国食品药品管理局(fda)批准用于改善成人2型糖尿病血糖水平的控制，成为继艾塞那肽、利拉鲁肽、阿必鲁肽和度拉鲁肽之后全球上市的第5个glp-1受体激动剂，为患者提供了新的治疗选择。
2、作为一天给药一次的短效glp-1受体激动剂，利司那肽无论单用或与口服降糖药亦或与基础胰岛素联用，利司那肽均能显著降低糖化血红蛋白(hba1c)、餐后血糖(ppg)和空腹血糖(fpg)水平，尤其以ppg降低最为显著。本药低血糖风险小，可减轻体重，耐受性良好，这也使得利司那肽在2型糖尿病个体化治疗中具有广阔的应用前景。
3、利司那肽由44个天然氨基酸组成，序列为h-his-gly-glu-gly-thr-phe-thr-ser-asp-leu-ser-lys-gln-met-glu-glu-glu-ala-val-arg-leu-phe-lle-glu-trp-leu-lys-asn-gly-gly-pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-ser-lys-lys-lys-lys-lys-lys-nh2，由于序列很长，氨基酸缩合困难，粗品纯度差，导致纯化的收率低。
4、前述背景技术知识的记载旨在帮助本领域普通技术人员理解与本发明较为接近的现有技术，同时便于对本发明的发明构思及技术方案的理解，应当明确的是，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日前已公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请技术方案的新创性。
技术实现思路
1、技术问题
2、为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种利司那肽的纯化方法，先后对利司那肽粗品溶液进行阳离子交换树脂纯化与反相液相色谱纯化，操作简便，工艺稳定，可以显著提高利司那肽成品的纯度和收率，经过纯化后的成品纯度高、杂质含量低，具有很好的经济使用价值和广泛的应用前景。
3、技术方案
4、为了实现上述目的，本申请提供：
5、一种利司那肽的纯化方法，包括：
6、(1)、利司那肽粗品加入纯化水溶解为粗品溶液；
7、(2)、采用阳离子交换树脂对粗品溶液进行初次纯化，收集洗脱液；
8、(3)、采用反相高效色谱法对洗脱液进行二次纯化，收集洗脱液浓缩冻干即得利司那肽成品。
9、对于部分具体实施方案，步骤(2)中，初次纯化前需要经过孔径不高于0.22μm的滤膜过滤；滤膜优选0.22μm的pvdf膜过滤。
10、对于部分具体实施方案，步骤(2)中，阳离子交换树脂优选为source 30s或amberlite cg-120，更优选为source 30s。
11、对于部分具体实施方案，步骤(2)中，初次纯化的流动相a为ph3.5-4.5的nah2po4缓冲液，浓度50-75mmol/l。
12、对于部分具体实施方案，步骤(2)中，初次纯化的流动相b为ph3.5-4.5 的nah2po4缓冲液，并含有0.8-1.0mol/l的nacl。
13、对于部分具体实施方案，步骤(2)中，初次纯化洗脱程序为流速50ml/min，在60min内流动相b的比例由10%增加到50%。
14、对于部分具体实施方案，步骤(3)中，反相高效色谱法的分离介质是反相c18硅胶基质。
15、对于部分具体实施方案，步骤(3)中，二次纯化的流动相a为1-1.5%(体积含量)的醋酸/水溶液。
16、对于部分具体实施方案，步骤(3)中，二次纯化的流动相b为0.5-2%(体积含量)的醋酸/乙腈溶液。
17、对于部分具体实施方案，步骤(3)中，二次纯化的洗脱程序为流速50ml/min，在60min内流动相b的比例由10%增加到40%。
18、由前述纯化方法获得的利司那肽成品，纯度可达99%以上，单杂低于0.1%。
19、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合，得到具体实施方式。
20、本发明涉及到的原料或试剂均为普通市售产品，涉及到的操作如无特殊说明均为本领域常规操作。
21、有益效果
22、根据本发明，通过先后将利司那肽粗品溶液进行阳离子交换树脂纯化与反相液相色谱纯化后，操作简便，工艺稳定，可以显著提高利司那肽成品的纯度和收率，经过纯化后的成品纯度可达99%以上，单杂低于0.1%，纯化收率达到60-70%，优于现有技术cn103709243a和cn104844706a，适合工业化生产，具有很好的经济使用价值和广泛的应用前景。
23、本发明为实现上述目的而采用了上述技术方案，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
1.一种利司那肽的纯化方法，其特征在于包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
8.前述纯化方法获得的利司那肽成品，其特征在于：
