贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法及其产品与在植物病害防治中的应用

    技术2024-12-04  13


    本发明属于生物工程,具体涉及一株贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法及其产品与在植物病害防治中的应用。


    背景技术:

    1、贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)是常见的生防菌株,贝莱斯芽孢杆菌可以通过分泌抑菌活性物质对病原微生物产生拮抗作用,从而进行植物病害防治,它能够抑制多种植物致病菌,如辣椒疫霉,尖孢镰刀菌和立枯丝核菌等。利用贝莱斯芽孢杆菌制备生防菌剂可以增强生防菌株的防治效率,制备成生防菌剂可以克服环境的影响,推广程度高,同时降低成本。

    2、辣椒疫病:辣椒疫病是由辣椒疫霉菌(phytophthora capsici)对辣椒、番茄、茄子和瓜果等作物的侵染,对农产品产量和品质造成严重影响。植物感染辣椒疫霉后,茎基部呈暗绿色水浸状软腐或猝倒;有的茎基部呈黑褐色,幼苗枯萎而死。叶片染病,出现污褐色边缘不明显的病斑。果实染病,初生暗绿色水浸状斑,病果迅速变褐软腐,湿度大时病果表面长出白色霉层,干燥后形成暗褐色僵果。

    3、赤霉病:赤霉病是由禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)感染小麦引起的植物病。小麦抽穗扬花时,病菌侵染小穗和颖片,首先产生水浸状浅褐色斑,进而病菌扩展至整个小穗,小穗枯黄。小穗发病后扩展至穗轴,病部枯褐,使被害部以上小穗,形成枯白穗。湿度大时,病斑处产生粉红色胶状霉层;后期病穗上产生密集的黑色小颗粒(子囊壳)。

    4、稻瘟病:稻瘟病是由灰梨孢菌(pyricularia oryzae)引起的水稻疫病。根据其侵染的不同分为苗瘟、叶瘟、穗颈瘟、谷粒瘟。其主要通过孢子传播,当环境条件适宜时,孢子萌发并侵染植物。病害一旦发生,可以造成水稻枝干枯死,稻穗出现黑斑,严重影响水稻的产量和品质。

    5、软腐病:软腐病是由于葡萄座腔菌(botryosphaeria dothidea)感染猕猴桃所引起的植物病。果实发病初期病斑呈褐色,略微凹陷,果实快速变软,病斑周围呈黄绿色,病健交界处出现水渍状暗绿色晕圈。剥开病斑表皮,可见病部果肉白色絮状腐烂,果实发生软腐,失去食用价值。

    6、梨炭疽病:又称“苦腐病”,是由盘长孢状刺盘孢(colletrichumgloeosporioides)引起的一种植物病害。主要侵染梨树叶片、枝干和果实,会造成果实的腐烂和早落,大大降低梨的产量。染病的果实在采摘后,会随果实生活力的降低而逐渐发病,常常在运输和贮藏期间,扩大染病的范围及程度,甚至造成大量的果实腐烂坏死。

    7、经检索,目前报道的利用微生物防治植物病害,存在菌株产生效果缓慢和受环境影响较大等问题,因此难以在大范围进行推广,植物病害难以得到有效防治。


    技术实现思路

    1、发明目的:本发明所要解决的问题是提供一株对植物病害有防治作用的贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂,以解决现有技术中生防菌株产生效果缓慢和受环境影响较大的问题。

    2、本发明还要解决的技术问题是提供上述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法。

    3、本发明最后要解决的问题是提供上述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂在在植物病害防治中的应用。

    4、技术方案:为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:

    5、本发明筛选得到一株贝莱斯芽孢杆菌,分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(bacillusvelezensis),菌株号为lt-22,已保藏于“中国典型培养物保藏中心”(简称cctcc),保藏地址:湖北省武汉市,洪山区八一路,武汉大学山国典型培养物保藏中心,邮编:430072,保藏编号为cctcc no:m2023779,保藏日期为2023年5月19日。以下内容均以此菌株作为生产菌株。

    6、所述菌株具有下述性质:

    7、1、菌落形态学特征与生理生化特性见表1。

    8、表1菌落形态学特征与生理生化特性

    9、

    10、2、16s rrna序列分析:

    11、将菌株16s rrna的pcr扩增产物送至公司进行测序,将所测序列(seq id no:1)结果在ncbi数据库内进行同源性比对,构建16s rrna全序列为基础的系统发育树。结果表明,菌株与贝莱斯芽孢杆菌b.velezensis j17的同源相似性最高,结合菌株形态学特征及其生理生化特性分析,最终确定本发明所用菌株为贝莱斯芽孢杆菌,具体为贝莱斯芽孢杆菌b.velezensis lt-22。

    12、贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法,将贝莱斯芽孢杆菌的培养物与硅藻土混合,烘干,得到贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂;

    13、其中,所述贝莱斯芽孢杆菌的分类命名为贝莱斯芽孢杆菌bacillus velezensis,菌株号为lt-22,已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为cctcc no:m2023779,保藏日期为2023年5月19日。

    14、进一步地,所述贝莱斯芽孢杆菌的培养物与硅藻土的质量比为2~5:1。

    15、进一步地,所述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂中贝莱斯芽孢杆菌lt-22有效活菌数为6×109~8×109cfu/g。

    16、进一步地,所述的培养物的制备方法如下:

    17、将贝莱斯芽孢杆菌lt-22活化后接种至lb液体培养基中培养,离心,弃上清,得到贝莱斯芽孢杆菌培养物。

    18、进一步地,贝莱斯芽孢杆菌lt-22的培养温度为34~37℃、培养转速为180~200rpm、培养时间为36~40h。

    19、进一步地,所述的烘干,其烘干条件为:温度为50~56℃、时间为3~5h,烘干后所述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂中水分质量含量小于20%。

    20、上述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法制备得到的贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂在本发明的保护范围之内。

    21、上述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂在植物病害防治中的应用在本发明的保护范围之内。

    22、作为优选,所述的植物包括:辣椒、番茄、茄子、小麦、水稻、梨、猕猴桃。

    23、进一步地,将莱斯芽孢杆菌生防菌剂与水混合,然后喷洒在植物叶片上或果实上,或对植物进行灌根处理。

    24、有益效果:

    25、本发明首次筛选得到一株贝莱斯芽孢杆菌b.velezensis lt-22;并利用该贝莱斯芽孢杆菌制备生防菌剂。该生防菌剂能够防治辣椒疫霉、灰梨孢菌、禾谷镰孢菌、盘长孢状刺盘孢菌和葡萄座腔菌所引起的植物病害,解决农作物产量下降的问题,具有效果显著、环境友好、操作简单等优势。



    技术特征:

    1.贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法,其特征在于,将贝莱斯芽孢杆菌的培养物与硅藻土混合,烘干,得到贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂;

    2.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法,其特征在于,所述贝莱斯芽孢杆菌的培养物与硅藻土的质量比为2~5:1。

    3.根据权利要求1或2所述的贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法,其特征在于,所述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂中贝莱斯芽孢杆菌lt-22有效活菌数为6×109~8×109cfu/g。

    4.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法,其特征在于,所述的培养物的制备方法如下:

    5.根据权利要求4所述的贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法,其特征在于,贝莱斯芽孢杆菌lt-22的培养温度为34~37℃、培养转速为180~200rpm、培养时间为36~40h。

    6.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法,其特征在于,所述的烘干,其烘干条件为:温度为50~56℃、时间为3~5h,烘干后所述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂中水分质量含量小于20%。

    7.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法制备得到的贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂。

    8.权利要求7所述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂在植物病原菌抑制上的应用。

    9.权利要求7所述贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂在植物病害防治中的应用。

    10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述的植物包括:辣椒、番茄、茄子、小麦、水稻、梨、猕猴桃;


    技术总结
    本发明公开了一株贝莱斯芽孢杆菌生防菌剂的制备方法及其产品与在植物病害防治中的应用,所述贝莱斯芽孢杆菌的分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis,菌株号为LT‑22,已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2023779,保藏日期为2023年5月19日。本发明制备的生防菌剂较化学制品更安全、稳定,大大提高防治病害的效力,可用来防治辣椒疫霉、灰梨孢菌、禾谷镰刀菌、葡萄座腔菌、盘长孢状刺盘孢菌等菌引起的多种植物病害,为植物病害防治提供了新思路。

    技术研发人员:赵美琳,王苏皖,吴凌天,孙硕阳,甘泉,葛楠,聂立双,徐渊美
    受保护的技术使用者:常熟理工学院
    技术研发日:
    技术公布日:2024/10/24
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