本发明涉及食品安全免疫检测，尤其是指一种邻苯二甲酸二丁酯半抗原、杂交瘤细胞株、抗体及其应用。
背景技术：
1、邻苯二甲酸二丁酯作为一类广泛使用的塑化剂(也称增塑剂)，在塑料中普遍存在。它被认为是一种内分泌干扰性物质，对于内分泌系统具有破坏性，即使在非常低的浓度下也可能使生物体产生突变。另外，邻苯二甲酸二丁酯可能会造成睾丸萎缩、肝损伤、生育力下降、胎儿体重下降、肾脏重量增加和抗雄激素活性降低等危害。我国的国家强制性标准《gb 8955-2016食用植物油及其制品生产卫生规范》就明确规定了：“与食用植物油及其制品直接接触的包装容器及相关包装材料不应使用邻苯二甲酸酯类物质”。根据文献显示，首先，油料本身可能在其种植的过程中就受到了邻苯二甲酸二丁酯的污染。其次，由于邻苯二甲酸二丁酯易溶于油脂类物质，在生产、运输、包装等环节，若使用含有邻苯二甲酸二丁酯材质的塑料制品，则也容易造成邻苯二甲酸二丁酯的迁移。近年来各地的市场监督管理局却发现了多起食用油邻苯二甲酸二丁酯超标事件。食用油竟也成了人们暴露于邻苯二甲酸二丁酯的来源之一，在悄然地侵害着人们的身体健康。目前，对邻苯二甲酸二丁酯残留的检测方法主要是仪器分析方法，包括气相色谱法、气相色谱-质谱串联法等。这些方法结果可靠，灵敏度高，已有相关的技术标准可供参考。但由于需要昂贵的仪器、专门的操作人员，以及样品前处理复杂、成本高、时间长，因此不能更好地满足快速简便的现场检测要求。
2、因此建立快速简便的邻苯二甲酸二丁酯检测方法具有重要意义。酶联免疫法(elisa)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，适用于大量样本的现场快速检测，为邻苯二甲酸二丁酯检测提供了一种新的检测途径。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种邻苯二甲酸二丁酯半抗原、杂交瘤细胞株、抗体及其应用。本发明提供的杂交瘤细胞株分泌的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体针对邻苯二甲酸二丁酯具有较高的检测灵敏度，可以用来建立邻苯二甲酸二丁酯的免疫学检测方法。
2、本发明通过以下技术方案实现：
3、本发明第一个目的是提供一种邻苯二甲酸二丁酯半抗原，所述邻苯二甲酸二丁酯半抗原的结构式为：
4、
5、本发明第二个目的是提供一种邻苯二甲酸二丁酯半抗原的制备方法，包括以下步骤：
6、将4-溴邻苯二甲酸酐在碱性条件下水解为4-溴邻苯二甲酸，加入正丁醇，在催化剂浓h2so4的作用下反应，得到4-溴邻苯二甲酸二丁酯；
7、在有机溶剂中，将4-溴邻苯二甲酸二丁酯与乙烯基甲酸混合，在催化剂pd的作用下反应，得到化合物1；
8、将化合物1与氢气在催化剂binap-ru(ll)(o2cr)2的作用下反应得到邻苯二甲酸二丁酯半抗原。
9、本发明第三个目的是提供一种邻苯二甲酸二丁酯完全抗原，由所述邻苯二甲酸二丁酯半抗原与免疫原性载体制备得到。
10、在本发明的一些实施例中，所述免疫原性载体选自钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、乳铁蛋白、辣根过氧化物酶、甲状腺球蛋白、免疫球蛋白、激素和卵清蛋白中的至少一种。
11、本发明第四个目的是提供一株分泌邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株由所述邻苯二甲酸二丁酯半抗原通过合成邻苯二甲酸二丁酯完全抗原，免疫小鼠得到；已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期为2023年02月08日，保藏编号为cgmcc no.45480。
12、本发明第五个目的是提供一种邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体，由所述杂交瘤细胞株分泌产生。
13、本发明第六个目的是提供一种组合物，所述组合物中含有所述的杂交瘤细胞株和/或所述的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体。
14、本发明第七个目的是提供一种试剂盒，所述试剂盒中含有所述的杂交瘤细胞株、所述的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体和所述的组合物中的至少一种。
15、本发明第八个目的是提供一种试纸条，所述试纸条含有所述的杂交瘤细胞株、所述的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体和所述的组合物中的至少一种。
16、本发明第九个目的是提供所述的杂交瘤细胞株、所述的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体、所述的组合物、所述的试剂盒或所述的试纸条在检测邻苯二甲酸二丁酯中的应用。
17、本发明所述抗邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体可用于食品安全监测中邻苯二甲酸二丁酯残留量的分析检测。
18、本发明的有益效果：
19、本发明提供了一种邻苯二甲酸二丁酯半抗原、杂交瘤细胞株、抗体及其应用。本发明提供的杂交瘤细胞株zor分泌的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体对邻苯二甲酸二丁酯具有较好的特异性和检测灵敏度(ic50值为9.37ng/ml)，可实现对油料、油脂、水以及各种塑料包装食物中邻苯二甲酸二丁酯残留量的检测，为食品中邻苯二甲酸二丁酯残留的免疫学检测提供了原料，具有实际应用价值。
20、生物材料保藏：
21、一株分泌邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株zor，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期为2023年02月08日，保藏编号为cgmcc no.45480。
1.一种邻苯二甲酸二丁酯半抗原，其特征在于，所述邻苯二甲酸二丁酯半抗原的结构式为：
2.一种邻苯二甲酸二丁酯半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.一种邻苯二甲酸二丁酯完全抗原，其特征在于，由权利要求1所述邻苯二甲酸二丁酯半抗原与免疫原性载体制备得到。
4.根据权利要求3所述邻苯二甲酸二丁酯完全抗原，其特征在于，所述免疫原性载体选自钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、乳铁蛋白、辣根过氧化物酶、甲状腺球蛋白、免疫球蛋白、激素和卵清蛋白中的至少一种。
5.一株分泌邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株由权利要求1所述邻苯二甲酸二丁酯半抗原通过合成邻苯二甲酸二丁酯完全抗原，免疫小鼠得到；已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期为2023年02月08日，保藏编号为cgmcc no.45480。
6.一种邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体，其特征在于，由权利要求5所述杂交瘤细胞株分泌产生。
7.一种组合物，其特征在于，所述组合物中含有权利要求5所述的杂交瘤细胞株和/或权利要求6所述的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体。
8.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求5所述的杂交瘤细胞株、权利要求6所述的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体和权利要求7所述的组合物中的至少一种。
9.一种试纸条，其特征在于，所述试纸条含有权利要求5所述的杂交瘤细胞株、权利要求6所述的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体和权利要求7所述的组合物中的至少一种。
10.权利要求5所述的杂交瘤细胞株、权利要求6所述的邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体、权利要求7所述的组合物、权利要求8所述的试剂盒或权利要求9所述的试纸条在检测邻苯二甲酸二丁酯中的应用。
