本发明属于园艺，具体涉及农大郁香猕猴桃的遗传转化方法。
背景技术：
1、猕猴桃是世界上附价值很高的水果作物，中国是世界上最大的猕猴桃生产国。猕猴桃多为多年生植物，育种周期长，遗传背景复杂，不能满足生产的需要。随着转基因技术的发展，促进了木本果树的品种改良。转基因品系的产生能够促进新品种的快速引入，并可以改善现有基因型品质。农杆菌介导的遗传转化叶盘法，是将外源基因引入植物和生产转基因品系的有效手段，并广泛应用于木本植物。葡萄、桃、苹果等果树的遗传转化研究较为深入，实践中应用也较为普遍。
2、但国内外对猕猴桃遗传转化研究开展的工作依旧较少，可利用的稳定高效的猕猴桃遗传转化体系不多。许多猕猴桃种和优良基因型难以再生，转化效率低。适宜的培养基组合有利于提高猕猴桃的转化效率。并且由于阳性植株鉴定方法的不准确性，导致假阳性率高。商业生产中猕猴桃主要为中华系猕猴桃和美味系猕猴桃，其中高效准确的美味系猕猴桃遗传转化体系十分缺乏。农大郁香猕猴桃是西北农林科技大学选育的主栽绿肉美味系猕猴桃品种，品质细腻，风味极佳，其组培体系叶片组织再生能力强。目前尚无对农大郁香猕猴桃遗传转化体系的研究。因而提出农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，用以解决上述问题。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，包括如下步骤：
3、s1：将目的载体转入gv3101农杆菌并进行培养，直至od值为0.7-0.8,获得菌液，并将菌液摇匀；
4、s2：选取长势健壮良好的30天苗龄农大郁香猕猴桃组培苗，在叶片背面划3-5道伤口，置于预培养基中预培养预设时长；
5、s3：将s1中摇好的菌液，通过离心设备进行离心，离心后丢弃上清，并添加等倍体积的重悬液，并通过震荡设备震荡，或得悬浮液；
6、s4：将预培养基中的叶片置于悬浮液中浸泡十分钟后取出叶片，然后在滤纸上吸干叶片上的菌液，再将叶片背面朝上平铺于共培养基上，黑暗培养预设时长；
7、s5：再将叶片放置于筛选培养基中，直至叶片切口处分化出愈伤组织；
8、s6：待叶片表面愈伤组织长到预设大小后，将愈伤组织转移到生芽培养基中进行促进生芽，生芽4周后，提取植株叶片的rna、dna、蛋白，进行rna、dna、蛋白水平鉴定阳性苗。
9、s7：将阳性苗转移至生根培养基，进行生根培养，并移栽。
10、优选地，所述s3中，每升重悬液包括ms 4.43g，蔗糖20g，乙酰丁香酮(200nmo l/ml)1ml,其余溶剂为蒸馏水。
11、优选地，所述s2中，每一升预培养基包括ms 4.43g、蔗糖30g、琼脂7g、玉米素1.5mg/l、萘乙酸0.2mg/l，其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9。
12、优选地，所述s4中，每一升共培养基包括ms 4.43g、蔗糖30g、琼脂7g、玉米素2mg/l、萘乙酸0.2mg/l、乙酰丁香酮(200nmo l/ml)1ml，其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9。
13、优选地，所述s5中，每一升筛选培养基包括ms 4.43g、蔗糖30g、琼脂7g、玉米素2mg/l、萘乙酸0.2mg/l、卡那霉素50mg/l、特美汀300mg/l、羧苄青霉素250mg/l，其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9。
14、优选地，所述s6中，每一升生芽培养基包括ms 4.43g、蔗糖30g、琼脂7g、玉米素3mg/l、萘乙酸0.2mg/l、卡那霉素10mg/l、特美汀150mg/l，其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9。
15、优选地，所述s7中，每一升生根培养基包括ms2.215g、蔗糖30g、琼脂7g、吲哚丁酸0.8mg/l、其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9
16、优选地，所述离心设备为离心机，转速为4000-5000rpm，离心时长为5min。
17、优选地，所述s2中，所述预设时长为1.5-2.5天。
18、优选地，所述s4中，所述预设时长为3天。
19、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
20、本发明提供了农大郁香遗传体系的最佳预培养基、共培养基、筛选培养基、生芽培养基、生根培养基配方，同时对转基因植株进行rna、dna、蛋白水平鉴定阳性苗，建立了一套高效准确的美味系猕猴桃遗传转化体系，对猕猴桃的分子育种具有重要意义。
1.农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：所述s3中，每升重悬液包括ms 4.43g，蔗糖20g，乙酰丁香酮(200nmol/ml)1ml,其余溶剂为蒸馏水。
3.根据权利要求1所述的农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：所述s2中，每一升预培养基包括ms 4.43g、蔗糖30g、琼脂7g、玉米素1.5mg/l、萘乙酸0.2mg/l，其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9。
4.根据权利要求1所述的农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：所述s4中，每一升共培养基包括ms 4.43g、蔗糖30g、琼脂7g、玉米素2mg/l、萘乙酸0.2mg/l、乙酰丁香酮(200nmol/ml)1ml，其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9。
5.根据权利要求1所述的农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：所述s5中，每一升筛选培养基包括ms 4.43g、蔗糖30g、琼脂7g、玉米素2mg/l、萘乙酸0.2mg/l、卡那霉素50mg/l、特美汀300mg/l、羧苄青霉素250mg/l，其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9。
6.根据权利要求1所述的农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：所述s6中，每一升生芽培养基包括ms 4.43g、蔗糖30g、琼脂7g、玉米素3mg/l、萘乙酸0.2mg/l、卡那霉素10mg/l、特美汀150mg/l，其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9。
7.根据权利要求1所述的农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：所述s7中，每一升生根培养基包括ms2.215g、蔗糖30g、琼脂7g、吲哚丁酸0.8mg/l、其余溶剂为蒸馏水，ph为5.8～5.9。
8.根据权利要求1所述的农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：所述离心设备为离心机，转速为4000-5000rpm，离心时长为5min。
9.根据权利要求1所述的农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：所述s2中，所述预设时长为1.5-2.5天。
10.根据权利要求1所述的农大郁香猕猴桃的遗传转化方法，其特征在于：所述s4中，所述预设时长为3天。
